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EpiMark® 热启动 Taq DNA 聚合酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

EpiMark 热启动 Taq DNA 聚合酶是 Taq DNA 聚合酶和温度敏感性核酸适配体抑制剂的混合物。这种抑制剂可与酶可逆结合，在温度低于 45℃ 时抑制聚合酶活性，而在正常的 PCR 循环条件下释放酶。此特性有助于在室温下建立反应体系。基于适配体的热启动机制的一个优点是无需单独的高温温育步骤来激活酶。EpiMark 热启动 Taq DNA 聚合酶拥有先进的基于适配体的热启动机制活性，并随附经优化的反应缓冲液，堪称用于扩增重亚硫酸盐转化 DNA 的理想之选。

Taq DNA 聚合酶具有 5´ – 3´ 聚合酶活性（1、2、3）和 5´ 结构特异性核酸内切酶活性（4、5）。

EpiMark 热启动 Taq DNA 聚合酶随附 5X EpiMark 热启动 Taq 反应缓冲液，从而可实现重亚硫酸盐转化 DNA 和富含 AT 的扩增子的稳定扩增。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自水生嗜热菌（Thermus aquaticus）YT-1 的 Taq DNA 聚合酶基因。

产品类别:
Methylome Analysis Products,
Epigenetic Analysis Products,
Taq DNA Polymerase Products,

Next Generation Sequencing Library Preparation Products

应用:
Bisulfite Sequencing,
Bisulfite Conversion,
Hot Start PCR,

Specialty PCR,
Routine PCR,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0490S     -20    
        EpiMark® Hot Start Taq DNA Polymerase M0490SVIAL -20 1 x 0.025 ml 5,000 units/ml
        EpiMark® Hot Start Taq Reaction Buffer Pack B0490SVIAL -20 1 x 2 ml 5 X
    • M0490L     -20    
        EpiMark® Hot Start Taq DNA Polymerase M0490LVIAL -20 1 x 0.125 ml 5,000 units/ml
        EpiMark® Hot Start Taq Reaction Buffer Pack B0490SVIAL -20 3 x 2 ml 5 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 75℃ 条件下，30 分钟内将 15 nmol dNTP 掺入到酸不溶物所需的酶量。

    反应条件

    1X EpiMark®热启动 Taq 反应缓冲液套装

    1X EpiMark®热启动 Taq 反应缓冲液套装
    20 mM Tris-HCl
    1.8 mM MgCl2
    22 mM KCl
    0.06% IGEPAL® CA-630
    0.05% Tween® 20
    22 mM NH4Cl
    (pH 8.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    100 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    0.5% Tween® 20
    0.5% IGEPAL® CA-630
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

    分子量

    理论上的: 94000 道尔顿

    5′ – 3′ 核酸外切酶

    Yes

    3′ – 5′ 核酸外切酶

    No

    产物末端

    • 3´ 单碱基突出末端

    单位活性检测条件

    1X ThermoPol® 反应缓冲液、200 µM dNTP（含 [3H]-dTTP）和 15 nM 已结合引物的 M13 DNA。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 重亚硫酸盐转化 DNA 的 PCR 实验

  • 相关产品

    相关产品

    • MgCl2 溶液
    • dNTP 套装
    • EpiMark® 甲基化 DNA 富集试剂盒
    • dNTP 混合液

    单独销售的组分

    • EpiMark® Hot Start Taq Reaction Buffer Pack

  • 参考文献

    1. Chien, A., Edgar, D.B. and Trela, J.M. (1976). J. Bact. . 127, 1550-1557.
    2. Kaledin, A.S., Slyusarenko, A.G. and Gorodetskii, S.I. (1980). Biokhimiya . 45, 644-651.
    3. Lawyer, F.C. et al. (1993). PCR Methods And Appl.. 2, 275-287.
    4. Longley, M.J., Bennett, S.E. and Mosbaugh D.W. (1990). Nucleic Acids Res. . 18, 7317-7322.
    5. Lyamichev, V., Brow, M.A. and Dahlberg, J.E. (1993). Science. 260, 778-783.
    6. Saiki R.K. et al. (1985). Science. 230, 1350-1354.
    7. Powell, L.M. et al. (1987). Cell. 50, 831-840.
    8. Sun, Y., Hegamyer, G. and Colburn, N. (1993). Biotechniques . 15, 372-374.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. EpiMark® Hot Start Taq DNA Polymerase Guidelines for PCR (M0490)

  • 使用指南

    • Activity of Restriction Enzymes in PCR Buffers

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What ends will my PCR products have?
    2. What are Hot Start and WarmStart® polymerases and when would I use them?
    3. How should I determine the appropriate annealing temperature for my reaction?
    4. My results are not as expected. Where can I find troubleshooting help?
    5. What should the final primer concentration be in my PCR?
    6. Is this Taq DNA Polymerase product compatible with other NEB Buffers?
    7. What are the general recommendations for designing primers for bisulfite-treated/deaminated DNA?

E. coli Poly(A) 聚合酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Poly(A) 聚合酶催化由 ATP 转化成的 AMP 添加到 RNA 3´ 端，该反应不依赖模板的存在。

图 1：带帽和 Poly(A) 尾的 RNA 的分析
E. coli Poly(A) 聚合酶 |
A. 使用 Agilent Bioanalyzer® 对带帽和 Poly(A) 尾的 RNA 进行分析。通过提高反应中酶的浓度来产生较长的尾。计算每条泳道上显示出的 A 尾长度。泳道：L：分子量 marker，1：无 poly-A 尾，2：5 个单位，3：15 个单位，4：25 个单位的 E. coli Poly(A) 聚合酶。B. 酶促加 A 尾对 CLuc mRNA 荧光素酶报告基因活性的影响

产品来源

大肠杆菌菌株，携带克隆自大肠杆菌的 Poly(A) 聚合酶基因（1）。

产品类别:
RNA Modification,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products,
RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

应用:
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0276S     -20    
        E. coli Poly(A) Polymerase M0276SVIAL -20 1 x 0.02 ml 5,000 units/ml
        Poly(A) Polymerase Reaction Buffer B0276SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
        Adenosine-5′-Triphosphate (ATP) B0756AVIAL -20 1 x 0.2 ml 10 mM
    • M0276L     -20    
        E. coli Poly(A) Polymerase M0276LVIAL -20 1 x 0.1 ml 5,000 units/ml
        Poly(A) Polymerase Reaction Buffer B0276SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
        Adenosine-5′-Triphosphate (ATP) B0756AVIAL -20 1 x 0.2 ml 10 mM

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指 20 µl 反应体系中，37℃ 条件下，10 分钟催化 1 nmol 的 AMP 掺入 RNA 所需要的酶量。

    反应条件

    1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液
    Supplement with 1 mM ATP
    Incubate at 37°C

    1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    250 mM NaCl
    10 mM MgCl2
    (pH 8.1 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    300 mM NaCl
    1 mM DTT
    1 mM EDTA
    50% Glycerol
    0.1% (w/v) Triton® X-100
    pH 7.5 @ 25°C

    单位活性检测条件

    20 µl 总反应体系，含 1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液、1 mM rATP 和 500 ng 5´ FAM 标记的 poly A 20-mer RNA。37℃ 温育 10 分钟后，通过凝胶电泳或自动毛细管电泳 DNA 测序仪确定 poly(A) 添加的长度。在该测定中，5 个单位的酶催化大约 60 到 80 个腺苷掺入 RNA 引物。在这些条件下，20 个单位的酶将耗尽 rATP。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 用 ATP 或虫草素标记 RNA
    • 为 RNA 添加 Poly(A) 尾，用于克隆或亲和纯化
    • 提高转染至真核细胞中 RNA 的翻译效率。

  • 注意事项

    1. 提供的缓冲液不含 rATP。

  • 参考文献

    1. Cao, G.J. and Sarkar, N. (1992). Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 89, 10380-10384.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Poly(A) Tailing of RNA using E. coli Poly(A) Polymerase (NEB# M0276)

工具 & 资源

  • 选择指南

    • RNA Polymerase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How can the E. coli Poly(A) Polymerase be inactivated without heating up the reaction?
    2. Does the E. coli Poly(A) Polymerase work in the M-MuLV reverse transcriptase buffer?
    3. Can E. coli Poly(A) Polymerase be used to add a poly A tail to ssDNA?
    4. Can E. coli Poly(A) Polymerase also add GTP, UTP and CTP to RNA?
    5. Can I end-label a polyadenylated RNA molecule with a Cy3/5 or biotin-modified base using the E. coli Poly(A) Polymerase?
    6. Does E. coli Poly(A) Polymerase work on tRNA?
    7. Is MnCl2 required for a reaction with E. coli Poly(A) Polymerase?
    8. Is it possible to have the same length of poly A added to all RNA molecules by E. coli Poly(A) Polymerase?
    9. Can we use the ribonucleotide Mix (N0466) to replace the addition of an rATP solution for the poly A tailing of an RNA template by E.coli Poly(A) polymerase?
    10. Is the E.coli Poly(A) polymerase able to elongate short and surface-immobilized oligoribonucleotides? What is the minimum length of an RNA sequence that can be recognized by the enzyme and, therefore, elongated?
    11. What is the molecular weight of E.coli Poly(A) polymerase?

  • 实验技巧

    E. coli Poly(A) 聚合酶（M0276）

    使用前对试管进行轻柔涡旋处理。

    可通过向反应中添加终浓度为 10 mM 的 EDTA 让 Poly(A) 聚合酶失活。

    Poly (A) 聚合酶与 M-MuLV 反转录酶缓冲液兼容。如果准备在多聚腺苷酸化反应后进行反转录，建议这两个反应顺序进行。首先使用反转录酶缓冲液进行多聚腺苷酸化反应。随后添加反转录所需的组份。

    强烈建议戴手套、使用无核酸酶的试管和试剂并彻底清洁移液器和工作台表面，避免 RNase 污染。

E. coli RNA 聚合酶，全酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

E. coli RNA 聚合酶，全酶由核心酶和 sigma 因子 70 组成。全酶能从 sigma 因子 70 特定的细菌和噬菌体启动子处起始合成 RNA。

E. coli RNA 聚合酶，核心酶由 5 种亚基组成，分别为 α、α、β´、β、和 ω。 该酶无 sigma 因子，因此不会识别任何特定的细菌和噬菌体 DNA 启动子。该酶保留了从非特异性启动序列转录 RNA 的功能。添加 sigma 因子后，该酶可从特定的细菌和噬菌体启动子启动合成 RNA。核心酶分子量约 400 kDa。

产品来源

E. coli RNA 聚合酶，全酶分离自 E. coli 菌株 BL21。Sigma 因子 70 由携带有克隆自 sigma 因子 70 基因的 E. coli 菌株纯化而来。

产品类别:
RNA Modification,
RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0551S     -20    
        E. coli RNA Polymerase, Holoenzyme M0551SVIAL -20 1 x 0.05 ml 1,000 units/ml
        E.coli RNA Polymerase Reaction Buffer B0550AVIAL -20 1 x 0.5 ml 5 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 37℃ 条件下，10 分钟内可将 1 nmol NTP 掺入 RNA 所需的酶量。

    反应条件

    1X E.coli RNA 聚合酶反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X E.coli RNA 聚合酶反应缓冲液
    40 mM Tris-HCl
    150 mM KCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    0.01% Triton® X-100
    (pH 7.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    0.1 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    单位活性检测条件

    50 μl 含有 1X E. coli RNA 聚合酶反应缓冲液的反应体系中，添加每种 NTP 各 0.5 mM，以及 1 μg T7 噬菌体 DNA。

  • 优势和特性

    应用特性

    • E. coli 启动子启动的 RNA 合成
    • 转录起始研究
    • PURExpress 体外翻译

  • 相关产品

    相关产品

    • rNTP 套装
    • dNTP 套装
    • m0307-rnase-inhibitor-human-placenta
    • 小鼠 RNase 抑制剂

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the difference between the E.coli RNA Polymerase, Core Enzyme and Holoenzyme?
    2. What are the major functions of these subunits?
    3. Can the Core and Holoenzyme be used in PURExpress?
    4. What are the other sigma factors in E.coli?

E. coli RNA 聚合酶，核心酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

产品来源

E. coli RNA 聚合酶（核心酶）分离自 E. coli 菌株 BL21。

产品类别:
RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0550S     -20    
        E. coli RNA Polymerase, Core Enzyme M0550SVIAL -20 1 x 0.1 ml 1,000 units/ml
        E.coli RNA Polymerase Reaction Buffer B0550AVIAL -20 1 x 0.5 ml 5 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 37℃ 条件下，10 分钟内可将 1 nmol NTP 掺入 RNA 所需的酶量。

    反应条件

    1X E.coli RNA Polymerase Reaction Buffer
    Incubate at 37°C

    1X E.coli RNA Polymerase Reaction Buffer
    40 mM Tris-HCl
    150 mM KCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    0.01% Triton® X-100
    (pH 7.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    0.1 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    单位活性检测条件

    50 μl 含有 1X E. coli RNA 聚合酶反应缓冲液的反应体系中，添加每种 NTP 各 0.5 mM、sigma 因子 70，，以及 1 μg T7 噬菌体 DNA。

  • 优势和特性

    应用特性

    • E. coli 启动子启动的 RNA 合成
    • 转录起始研究
    • PURExpress 体外翻译

  • 相关产品

    相关产品

    • rNTP 套装
    • rNTP 混合液
    • m0307-rnase-inhibitor-human-placenta
    • 小鼠 RNase 抑制剂
    • PURExpress® 体外蛋白合成试剂盒

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the difference between the E.coli RNA Polymerase, Core Enzyme and Holoenzyme?
    2. What are the major functions of these subunits?
    3. Can the Core and Holoenzyme be used in PURExpress?
    4. What are the other sigma factors in E.coli?