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Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（高浓度） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（高浓度）的浓度为标准 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（NEB＃M0658）的 20 倍，是希望自己建立和优化体外转录反应体系的有经验用户的理想选择。该酶配有 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁溶液，可进一步调试不同条件，例如核苷酸浓度。

体外转录除了 RNA 聚合酶外还涉及多种成分，包括核糖核苷酸、无机焦磷酸酶和 RNase 抑制剂，这些均可单独购买。详细信息请参考“相关产品”部分

Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶是一种经基因工程改造的 DNA 依赖性 RNA 聚合酶，对 T7 噬菌体启动子具有高度特异性，跟野生型噬菌体 T7 RNA 聚合酶相比，它可在更高的温度下进行反应。Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶的最佳温度为 50-52°C。

产品来源

An E.coli strain that carries an engineered His-tag T7 RNA Polymerase gene.

产品类别:
RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

应用:
Transcription-Mediated and NASBA Amplification

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0470T     -20    
        Hi-T7® RNA Polymerase (High Concentration) M0470TVIAL -20 1 x 0.05 ml 1,000,000 units/ml
        Hi-T7® RNA Polymerase Reaction Buffer B0658AVIAL -20 1 x 1 ml Not Applicable
        MgCl2 Solution B2534AVIAL -20 1 x 0.5 ml 0.2 M

  • 特性和用法

    单位定义

    One unit is defined as the amount of enzyme required to incorporate 1 nmol of ATP into acid-insoluble material in 1 hour at 50°C

    反应条件

    1X Hi-T7® RNA Polymerase Reaction Buffer
    Incubate at 50°C

    1X Hi-T7® RNA Polymerase Reaction Buffer
    40 mM Tris-HCl
    4 mM MgCl2
    50 mM NaCl
    2 mM spermidine
    1 mM DTT
    (pH 7.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    50 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    1 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    0.1% (w/v) Triton® X-100
    pH 7.9 @ 25°C

    单位活性检测条件

    1X Hi-T7 RNA Polymerase Reaction Buffer, supplemented with 0.5 mM each ATP, UTP, GTP, CTP and 1 µg T7 phage DNA in 50 µl reaction volume.

  • 优势和特性

    应用特性

    • mRNA 用于体外翻译、显微注射以及转染
    • 放射标记的 RNA 探
    • 非同位素 RNA 标记
    • 靶基因的向导 RNA
    • RNA 的结构、加工以及催化作用的研究
    • 基因表达实验中的反义 RNA
    • RNA 扩增
    • 等温扩增

  • 相关产品

    相关产品

    • rNTP 套装
    • rNTP 混合液
    • 小鼠 RNase 抑制剂
    • rNTP 混合液
    • T2040 Monarch RNA Cleanup Kit 50 ug
    • m0251-t7-rna-polymerase
    • 无机焦磷酸酶（大肠杆菌）

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Standard RNA Synthesis

  • 应用实例

    • Scaling of High-Yield In vitro Transcription Reactions for Linear Increase of RNA Production

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I use a different reaction buffer for in vitro transcription with Hi-T7 RNA Polymerase?
    2. Does Hi-T7 RNA Polymerase recognize the same promoter sequence as the wild-type T7 RNA Polymerase from bacteriophage?
    3. At what temperature is Hi-T7 RNA Polymerase active?
    4. What are the main causes of reaction failure when using Hi-T7 RNA Polymerase?
    5. What templates can be used for in vitro transcription with Hi-T7 RNA Polymerase?
    6. Can Hi-T7 RNA Polymerase transcribe off of an uncut plasmid?

Poly(U) 聚合酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Poly(U) 聚合酶催化由 UTP 或 ATP 转化的 UMP 或 AMP 添加到 RNA 3´ 端，该反应不依赖模板的存在。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）Cid1 的 poly(U) 聚合酶基因。

产品类别:
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products,
RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

应用:
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0337S     -20    
        Poly(U) Polymerase M0337SVIAL -20 1 x 0.03 ml 2,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指 50 µl 反应体系中，37℃ 条件下，10 分钟催化 1 nmol 的 UMP 掺入 RNA 所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 2
    Supplement with 0.5 mM UTP 
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ 2
    50 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

    单位活性检测条件

    50 µl 反应体系，含 1X NEBuffer 2、0.5 mM 3H UTP 和 5 µg 酵母 RNA，37℃ 温育 10 分钟。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 用 UTP 标记 RNA
    • 为 RNA 添加 Poly(U) 和 Poly(A) 尾，用于克隆
    • 研究加 poly(U) 尾对 RNA 转染至真核细胞的稳定性及翻译效率的影响
    • 2´ O-甲基的 3´ 修饰末端添加 poly(A) 尾

  • 相关产品

    相关产品

    • m0307-rnase-inhibitor-human-placenta
    • 小鼠 RNase 抑制剂
    • rNTP 套装

    单独销售的组分

    • NEBuffer 2

  • 注意事项

    1. 本产品不包含 UTP。
    2. 在 NEBuffer 2 中，Poly(U) 聚合酶催化 rNTP 转化成的 rNMP 掺入 RNA。poly(U) 加尾长度随 UTP 变化。Poly(U) 聚合酶在低引物浓度（< 100 pmol）下具有极高的掺入率。

  • 参考文献

    1. Wickens, M. and Kwak, J.E. (2008). Science. 319, 1344.
    2. Kwak, J.E. and Wickens, M. (2008). RNA. 13, 860.
    3. Rissland, O.O.S., Mikulasova, A. and Norbury, C.J. (2007). Molecular and Cell Biology. 27, 3612.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. A Typical Tailing Reaction (M0337)

工具 & 资源

  • 选择指南

    • RNA Polymerase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the molecular weight of Poly(U) Polymerase?
    2. What type of labeled-UTPs will the Poly(U) Polymerase incorporate?
    3. Will Poly(U) Polymerase incorporate GTPs onto the 3’ end of an RNA?
    4. What Poly(U) length can be expected to be incorporated by Poly(U) Polymerase?
    5. Can Poly(U) Polymerase incorporate GTPs onto an RNA that contains chemically modified or 2-O-methyl groups on its 3’ end?
    6. How can the Poly(U) Polymerase be inactivated without heating up the reaction?
    7. Does the E. coli Poly(U) Polymerase work in the M-MuLV reverse transcriptase buffer?
    8. Can Poly(U) Polymerase be used to add a poly U tail to ssDNA?

  • 实验技巧

    强烈建议戴手套、使用无核酸酶的试管和试剂并彻底清洁移液器和工作台表面，避免 RNase 污染。

SP6 RNA 聚合酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

噬菌体 SP6 RNA 聚合酶是一种 DNA 依赖型 RNA 聚合酶，对 SP6 噬菌体启动子具有高度特异性。该聚合酶的分子量为 98.5 kD，通过 SP6 噬菌体启动子从一个克隆的 DNA 模板体外合成 RNA。使用 SP6 RNA 聚合酶合成的 RNA 适用于各种科研应用和生物技术。

反应条件：
1X RNAPol 反应缓冲液，每种 ATP、UTP、GTP、CTP 的浓度为 0.5 mM，以及含有 SP6 RNA 聚合酶启动子的 DNA 模板。37℃ 孵育。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自伤寒沙门菌（Salmonella typhimurium）LT2Z 的 SP6 RNA 聚合酶基因。

产品类别:
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products,
RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

应用:
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0207S     -20    
        SP6 RNA Polymerase M0207SVIAL -20 1 x 0.1 ml 20,000 units/ml
        RNAPol Reaction Buffer B9012SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    一个单位是指在 37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol ATP 掺入酸不溶物所需的酶量。

    反应条件

    1X RNAPol 反应缓冲液
    Supplement with 0.5 mM ATP, 0.5 mM GTP, 0.5 mM UTP  和 0.5 mM CTP
    Incubate at 37°C

    1X RNAPol 反应缓冲液
    40 mM Tris-HCl
    6 mM MgCl2
    1 mM DTT
    2 mM spermidine
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    50 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    20 mM β-ME
    1 mM EDTA
    50% Glycerol
    0.1% (w/v) Triton® X-100
    pH 7.9 @ 25°C

    单位活性检测条件

    50 μl 反应体系：1X RNAPol 反应缓冲液，每种 ATP、UTP、GTP、CTP 的浓度为 0.5 mM，以及含 SP6 噬菌体启动子的 DNA 模板 1 μg。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 制备放射性标记的 RNA 探针
    • 非同位素 RNA 标记
    • RNA 疫苗制备
    • 靶基因的向导 RNA
    • 用于体外翻译和显微注射的 mRNA
    • 用于结构、加工和催化性能研究的 RNA
    • RNA 扩增
    • 合成 RNA 反义链，调控基因表达

  • 相关产品

    相关产品

    • dsRNA Ladder
    • rNTP 混合液
    • ssRNA Ladder
    • m0251-t7-rna-polymerase
    • 无机焦磷酸酶（大肠杆菌）
    • 2X RNA 上样染料
    • E. coli Poly(A) 聚合酶
    • 小鼠 RNase 抑制剂
    • 热稳定无机焦磷酸酶
    • mRNA 帽结构 2-O-甲基转移酶
    • m2080-vaccinia-capping-system

  • 注意事项

    1. 对于放射性标记高特异性 RNA 探针，放射性核苷酸的浓度不应超过 6 μM。
    2. 为了防止核糖核酸酶降解 RNA ，反应中 RNase 抑制剂（NEB #M0314 或 #M0307）终浓度应为 1 U/μl 。
    3. SP6 RNA 聚合酶对盐抑制极其敏感。盐总浓度不应超过 50 mM。
    4. SP6 RNA 聚合酶在 40℃ 条件下的活性略高于 37℃ 条件下的活性。对于含有复杂二级结构的 RNA 转录本，可考虑在 40℃ 条件下进行温育。

  • 参考文献

    1. Schenborn, E.T. and Meirendorf, R.C. (1985). Nucl. Acids Res. 13, 6223-6236.
    2. Zinn, K. et al. (1983). Cell. 34, 865-879.
    3. Butler, E.T. and Chamberlin, J. (1982). J. Biol. Chem. 257, 5772-5778.
    4. Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual . (2nd ed.), 10.27-10.37.
    5. Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. (2nd ed.), 18.82-18.84.
    6. Melton, D.A., Krieg, P.A., Rebagliati, M.R., Maniatis, T., Zinn, K. and Green, M.R. (1984). Nucl. Acids Res. 12, 7057-7070.
    7. Kreig, P.A. and Melton, D.A. (1984). Nucl. Acids Res. 12, 7057-7070.
    8. Green, M.R., Maniatis, R. and Melton, D.A. (1983). Cell. 32, 681-694.
    9. Melton, D.A. (1985). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82, 144-128.
    10. Milligan, J.F., Groebe, D.R., Witherell, G.W. and Uhlenbeck, O.C. (1987). Nucl. Acids Res. 15, 8783.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. SP6 In Vitro Transcription Reaction Protocol (M0207)

  • 应用实例

    • Scaling of High-Yield In vitro Transcription Reactions for Linear Increase of RNA Production

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Polymerase Selection Chart
    • RNA Polymerase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Does the transcription reaction with SP6 RNA Polymerase require a primer?
    2. Does SP6 RNA Polymerase leave an extra base at the end of a transcript?
    3. Will SP6 RNA Polymerase work on single stranded substrate?
    4. Will SP6 RNA Polymerase work on uncut plasmid DNA?
    5. Can aberrant RNA be produced when using SP6 RNA Polymerase?
    6. Can I use SP6 RNA Polymerase to make high specific activity radiolabeled probes?
    7. Why is the specific activity of the probe low?
    8. What are the main causes of reaction failure using SP6 RNA Polymerase?

  • 实验技巧

    如果反应缓冲液超过 6 个月，需在反应体系中添加新配置的 DTT。

    将每种 rNTP 的浓度增加到 4 mM，MgCl2 的浓度增加到 20 mM，可提高产量。

T3 RNA 聚合酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

噬菌体 T3 RNA 聚合酶是一种 DNA 依赖性 RNA 聚合酶，对 T3 噬菌体启动子具有高度特异性。该酶的分子量为 99 kD，它以 T3 启动子后的克隆 DNA 序列为模板催化体外 RNA 合成。 T3 RNA 聚合酶制备的 RNA 适用于多种科研和生物技术应用。

产品来源

分离自大肠杆菌，携带包含 T3 基因 I 的质粒。

产品类别:
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products,
RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

应用:
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0378S     -20    
        T3 RNA Polymerase M0378SVIAL -20 1 x 0.1 ml 50,000 units/ml
        RNAPol Reaction Buffer B9012SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指 37℃ 条件下，1 小时催化 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需的酶量。

    反应条件
    1X RNAPol 反应缓冲液，每种 ATP、UTP、GTP、CTP 的浓度为 0.5 mM，以及含有 T3 RNA 聚合酶启动子的 DNA 模板。37℃ 温育。

    反应条件

    1X RNAPol 反应缓冲液

    1X RNAPol 反应缓冲液
    40 mM Tris-HCl
    6 mM MgCl2
    1 mM DTT
    2 mM spermidine
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    100 mM NaCl
    50 mM Tris-HCl
    1 mM EDTA
    20 mM 2-mercaptoethanol
    0.1% Triton® X-100
    50% (w/v) Glycerol
    pH 7.9 @ 25°C

    单位活性检测条件

    50 μl 反应体系：1X RNAPol 反应缓冲液，每种 ATP、UTP、GTP、CTP 的浓度为 0.5 mM，以及 2 μg T3 DNA。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 放射标记的 RNA 探针
    • 非同位素 RNA 标记
    • 制备 RNA 疫苗
    • 合成用于基因靶向的向导 RNA
    • 合成用于体外翻译和显微注射的 mRNA
    • 合成用于 RNA 结构、加工和催化性能研究的 RNA
    • RNA 扩增
    • 合成反义 RNA，调控基因表达

  • 相关产品

    相关产品

    • 2X RNA 上样染料
    • m0307-rnase-inhibitor-human-placenta
    • 小鼠 RNase 抑制剂
    • 无机焦磷酸酶（大肠杆菌）
    • 低分子量 ssRNA Ladder
    • ssRNA Ladder
    • m2080-vaccinia-capping-system
    • mRNA 帽结构 2-O-甲基转移酶
    • E. coli Poly(A) 聚合酶
    • rNTP 混合液
    • rNTP 套装
    • SP6 RNA 聚合酶
    • m0251-t7-rna-polymerase

  • 注意事项

    1. 对于放射性标记高特异性 RNA 探针，放射性核苷酸的浓度不应超过 6 μM。
    2. 为了防止核糖核酸酶降解 RNA ，反应中 RNase 抑制剂（NEB #M0314 或 #M0307）终浓度应为 1 U/μl。
    3. T3 RNA 聚合酶对盐抑制极其敏感。盐总浓度不应超过 50 mM。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Standard RNA Synthesis (NEB #M0378)

  • 应用实例

    • Scaling of High-Yield In vitro Transcription Reactions for Linear Increase of RNA Production

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the promoter sequence of T3 RNA Polymerase?
    2. Does the transcription reaction with T3 RNA Polymerase require a primer?
    3. Does T3 RNA Polymerase leave an extra base at the end of a transcript?
    4. Will T3 RNA Polymerase work on uncut plasmid DNA?
    5. Can aberrant RNA be produced when using T3 RNA Polymerase?
    6. Can I use T3 RNA Polymerase to make high specific activity radiolabeled probes?
    7. What are the main causes of reaction failure using T3 RNA Polymerase?
    8. Why is the specific activity of the probe low?