上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
产品信息
产品来源
大肠杆菌菌株,携带克隆自大肠杆菌的 Poly(A) 聚合酶基因(1)。
- 产品类别:
- RNA Modification,
- cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products,
- RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)
- 应用:
- PCR
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产品组分信息
本产品提供以下试剂或组分:
NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度 -
M0276S -20 E. coli Poly(A) Polymerase M0276SVIAL -20 1 x 0.02 ml 5,000 units/ml Poly(A) Polymerase Reaction Buffer B0276SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X Adenosine-5′-Triphosphate (ATP) B0756AVIAL -20 1 x 0.2 ml 10 mM
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M0276L -20 E. coli Poly(A) Polymerase M0276LVIAL -20 1 x 0.1 ml 5,000 units/ml Poly(A) Polymerase Reaction Buffer B0276SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X Adenosine-5′-Triphosphate (ATP) B0756AVIAL -20 1 x 0.2 ml 10 mM
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特性和用法
单位定义
1 单位指 20 µl 反应体系中,37℃ 条件下,10 分钟催化 1 nmol 的 AMP 掺入 RNA 所需要的酶量。
反应条件
1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液
Supplement with 1 mM ATP
Incubate at 37°C1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液
50 mM Tris-HCl
250 mM NaCl
10 mM MgCl2
(pH 8.1 @ 25°C)贮存溶液
20 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
1 mM EDTA
50% Glycerol
0.1% (w/v) Triton® X-100
pH 7.5 @ 25°C单位活性检测条件
20 µl 总反应体系,含 1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液、1 mM rATP 和 500 ng 5´ FAM 标记的 poly A 20-mer RNA。37℃ 温育 10 分钟后,通过凝胶电泳或自动毛细管电泳 DNA 测序仪确定 poly(A) 添加的长度。在该测定中,5 个单位的酶催化大约 60 到 80 个腺苷掺入 RNA 引物。在这些条件下,20 个单位的酶将耗尽 rATP。
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优势和特性
应用特性
- 用 ATP 或虫草素标记 RNA
- 为 RNA 添加 Poly(A) 尾,用于克隆或亲和纯化
- 提高转染至真核细胞中 RNA 的翻译效率。
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注意事项
- 提供的缓冲液不含 rATP。
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参考文献
- Cao, G.J. and Sarkar, N. (1992). Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 89, 10380-10384.
操作说明、说明书 & 用法
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操作说明
- Poly(A) Tailing of RNA using E. coli Poly(A) Polymerase (NEB# M0276)
工具 & 资源
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选择指南
- RNA Polymerase Selection Chart
FAQs & 问题解决指南
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FAQs
- How can the E. coli Poly(A) Polymerase be inactivated without heating up the reaction?
- Does the E. coli Poly(A) Polymerase work in the M-MuLV reverse transcriptase buffer?
- Can E. coli Poly(A) Polymerase be used to add a poly A tail to ssDNA?
- Can E. coli Poly(A) Polymerase also add GTP, UTP and CTP to RNA?
- Can I end-label a polyadenylated RNA molecule with a Cy3/5 or biotin-modified base using the E. coli Poly(A) Polymerase?
- Does E. coli Poly(A) Polymerase work on tRNA?
- Is MnCl2 required for a reaction with E. coli Poly(A) Polymerase?
- Is it possible to have the same length of poly A added to all RNA molecules by E. coli Poly(A) Polymerase?
- Can we use the ribonucleotide Mix (N0466) to replace the addition of an rATP solution for the poly A tailing of an RNA template by E.coli Poly(A) polymerase?
- Is the E.coli Poly(A) polymerase able to elongate short and surface-immobilized oligoribonucleotides? What is the minimum length of an RNA sequence that can be recognized by the enzyme and, therefore, elongated?
- What is the molecular weight of E.coli Poly(A) polymerase?
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实验技巧
E. coli Poly(A) 聚合酶(M0276)
使用前对试管进行轻柔涡旋处理。
可通过向反应中添加终浓度为 10 mM 的 EDTA 让 Poly(A) 聚合酶失活。
Poly (A) 聚合酶与 M-MuLV 反转录酶缓冲液兼容。如果准备在多聚腺苷酸化反应后进行反转录,建议这两个反应顺序进行。首先使用反转录酶缓冲液进行多聚腺苷酸化反应。随后添加反转录所需的组份。
强烈建议戴手套、使用无核酸酶的试管和试剂并彻底清洁移液器和工作台表面,避免 RNase 污染。