TC处理24孔板方形细胞爬片-已灭菌

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酒中氨基甲酸乙酯的测定-GC-MS法 参照GB 5009.223-2014 国标方法

酒中氨基甲酸乙酯的测定-GC-MS法 参照GB 5009.223-2014 国标方法

酒中氨基甲酸乙酯的测定
方法一、GC-MS 参照GB 5009.223-2014
摘要:本文参照食品安全国家标准方法《GB 5009.223-2003 食品中氨基甲酸乙酯的测定》 ,进行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的测定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱(碱性硅藻土)进行样品前处理,GC-MS法测定,结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg,定量限为5.0 μg / kg(取样2.00g),回收率在98.3%~104.5%;白酒样品的日间精密度测试,RSD<3%。方法简单,产品稳定,结果准确灵敏,完全满足分析检测的要求。
氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC),是一种致癌物,可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。它是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物。2007年,世界卫生组织的国际癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。因此对相关食品中进行氨基甲酸乙酯的检测和监测是非常必要的。
 
一、试剂和材料
标准溶液配制
1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯贮备液:准确称取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯标准品,用甲醇定容至10 mL。
2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液:准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL,用甲醇定容至50 mL。
1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液:准确称取0.5000 g氨基甲酸乙酯标准品,用甲醇定容至50 mL。
分别准确吸取一定量氨基甲酸乙酯标准,加100 μL  2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液,用甲醇定容至1.0 mL,得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的标准使用液(内含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯)
固相萃取柱:Cleanert JP氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱(碱性硅藻土)
气相色谱柱:DA-INNOWAX
 
二、实验方法
样品前处理
准确量取 2.00 ml 酒样(注:啤酒样品EC含量较低,取4 mL样品上样),加 100 μL  2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯内标使用液、氯化钠 0.3 g(白酒、酱油不加),超声溶解、混匀,然后加样到氨基甲酸乙酯上,抽真空,让试样慢慢渗入到Cleanert JP氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱中,静置约 10 min,先用10 mL 正己烷淋洗除杂,然后用 15 mL 5%乙酸乙酯/乙醚溶液以1 mL/min 流速洗脱并收集于10 mL 具塞刻度试管中,在室温下用氮气缓缓吹至0.5mL 左右,用甲醇定容至1.0 mL 制成测定液供GC/MS分析,同时做空白。
GC-MS条件
色谱柱:DA-INNOWAX柱,30 m*0.25 mm*0.25 μm;
进样口温度:220℃;柱温:初温 50℃,保持 1 min,然后以 8℃ / min 升至 180,然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min;
载气:氦气,纯度≥99.999%
流速:1 mL/min;
电离方式:EI源。
离子源温度:230℃;
进样方式:不分流进样;
样量:1-2μL;
氨基甲酸乙酯选择监测离子(m/z): 62、76、89;定量离子62;
D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子(m/z)64、76;定量离子64
 
三、实验结果
色谱图
 

图1 氨基甲酸乙酯及内标总离子图
 

图2 氨基甲酸乙酯质谱图
 

 
3 内标 D5-氨基甲酸乙酯质谱图
标准曲线
 

 
酒样加标的回收率及精密度
表1 白酒样品加标的回收率及精密度
 

序号 白酒样品
(mg/L)
加标量(mg/L) 测定浓度(mg/L) 回收量(mg/L) 回收率(%) 平均回收率
(%)
RSD %
1  
 
73.86
 
100 178.32 104.46 104.5  
101.4
2.51
2 100 176.78 102.92 102.9
3 100 175.64 101.78 101.8
4 100 173.25 99.39 99.4
5 100 172.20 98.34 98.3

表2 白酒样品日间精密度
 

测定数据(mg/L) 平均值 RSD%
60.47 60.79 59.05 63.04 58.15 56.61 59.03 59.13 2.94
58.99 59.75 60.24 57.49 59.77 56.91 57.60

注:相同的样品,,每天测定2次,连续7天内测定数据
 
 
方法检出限
当试样取2.00g时,本方法氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg,定量限为5.0μg/kg。
 
四、结论
本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相柱(碱性硅藻土)前处理结合DA-INNOWAX柱进行白酒中氨基甲酸乙酯的测定,结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0 μg/kg,回收率在98.3% ~104.5%,完全满足食品安全国家标准GB5009.223-2014方法的检测要求
 
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