产品信息

α1-2,3,6 甘露糖苷酶克隆自刀豆，又称 JBM，是一种具有广谱特异性的糖苷外切酶，可催化水解寡糖末端 α1-2、α1-3 和 α1-6 连接的甘露糖残基。对比 α1-3 和 α1-6 甘露糖残基，该酶略优先催化水解 α1-2 甘露糖残基。

底物特异性

产品来源

该酶克隆自刀豆（Canavalia ensiformis，Jack Bean），在毕赤酵母（Pichia pastoris）中表达。

产品类别:

Exoglycosidases Products,

Proteome Analysis Products

应用:

Glycan Sequencing,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0768S     4       α1-2,3,6 Mannosidase P0768SVIAL 4 1 x 0.04 ml 2,000 units/ml   GlycoBuffer 4 B1703SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Zinc B0768SVIAL 4 1 x 1 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 µl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Man(α1,3)-Man(β1,4)-GlcNAc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端甘露糖水解所需的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 4
  Supplement with 1X 锌
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 4
  50 mM sodium acetate
  (pH 4.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  95°C for 10 minutes

  分子量

  理论上的: 110 kDa

  单位活性检测条件

  在 10 µl 反应体系中，将两倍稀释的 α1-2,3,6 甘露糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物在 1X GlycoBuffer 4 和 1X 锌中进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 相关产品

  相关产品

  • α1-6 甘露糖苷酶
  • α1-2,3 甘露糖苷酶

• 注意事项

  1. α1-2,3,6 甘露糖苷酶是一种糖基化蛋白。理论分子量为 110 kDa，包含的两个亚基分别为 66 kDa 和 44 kDa（2）。
  2. α1-2,3,6 甘露糖苷酶的最佳 pH 值为 4.5。在反应体系中加入 2 mM Zn²⁺ 可增强酶的活性。
  3. 为了完全去除所有在非还原性末端由 α 连接的甘露糖残基，可能需要增加酶的浓度并过夜温育（18 小时）。
  4. 为了从复杂底物中完全去除 α1-6 甘露糖残基，可能需要先后使用 α1-2,3,6 甘露糖苷酶和 α1-6 甘露糖苷酶（NEB #P0727）进行酶切。
  5. 如需更大反应体积，可按比例扩大反应体系。
  6. 酶切底物不同，所需糖苷外切酶的量也不同。在 10-25 μl 的反应体系中，1 小时内处理 1 μg 糖蛋白或 100 nM 寡糖时，酶的起始量范围为 1-2 μl。如果酶切不完全，需要过夜反应。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.
  2. Kumar, S.N. et al (2014). Glycobiology. 24, 252-261.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for α1-2,3,6 Mannosidase (P0768)

• 使用指南

  • Detailed Characterization of Several Glycosidase Enzymes
  • Glycobiology Unit Conversion Chart

• 应用实例

  • Detailed Characterization of Antibody Glycan Structure using the N-Glycan Sequencing Kit

工具 & 资源

• Web 工具

  • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What is the difference between α1-2,3 Mannosidase, α1-6 Mannosidase and α1-2,3,6 Mannosidase? 
  2. Can α1-2,3,6 Mannosidase (JBM) be a substrate itself for mannosidase activity?
  3. What is a good positive control for α1-2,3 Mannosidase?
  4. When digesting complex substrates that include α1-6 Mannose residue, can additional mannose enzymes be used in combination with α1-2,3,6 Mannosidase?
  5. Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
  6. What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
  7. How much exoglycosidase should be used?
  8. Do detergents inhibit glycosidases?
  9. What are Glycosidases and their uses?
  10. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。

  α1-2,3,6 甘露糖苷酶的最佳 pH 值为 4.5。而大多数糖苷外切酶的最佳 pH 值为 5.5。

  在反应体系中加入 2 mM Zn²⁺ 可增强酶的活性。

  1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。