HANNA哈纳 HI6016pH校准液1.679

HANNA哈纳 HI6016pH校准液1.679

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  • 商品品牌: HANNA哈纳
    商品编号:HI6016
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  • HANNA哈纳 HI6016pH校准液1.679-HANNA哈纳-HI6016

    实验室耗材|||标准品|||PH标准溶液|||HANNA哈纳HI6016pH校准液1.679
    PH校准缓冲液性 校准液

    HANNA哈纳 HI6016pH校准液1.679


    商品属性

    商品属性
    商品名称 HANNA哈纳 HI6016pH校准液1.679-HI6016-HANNA哈纳
    型号 HI6016
    类别 实验室耗材|||标准品|||PH标准溶液|||HANNA哈纳HI6016pH校准液1.679
    品牌 HANNA哈纳
    品牌简介 HANNA哈纳
    关键字 PH校准缓冲液性 校准液,缓冲液

    HANNA哈纳 HI6016pH校准液1.679

    Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶(高浓度) |NEB酶试剂 New England Biolabs

    上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

    产品信息

    Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶(高浓度)的浓度为标准 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶(NEB#M0658)的 20 倍,是希望自己建立和优化体外转录反应体系的有经验用户的理想选择。该酶配有 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁溶液,可进一步调试不同条件,例如核苷酸浓度。

    体外转录除了 RNA 聚合酶外还涉及多种成分,包括核糖核苷酸、无机焦磷酸酶和 RNase 抑制剂,这些均可单独购买。详细信息请参考“相关产品”部分

    Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶是一种经基因工程改造的 DNA 依赖性 RNA 聚合酶,对 T7 噬菌体启动子具有高度特异性,跟野生型噬菌体 T7 RNA 聚合酶相比,它可在更高的温度下进行反应。Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶的最佳温度为 50-52°C。

    产品来源

    An E.coli strain that carries an engineered His-tag T7 RNA Polymerase gene.

    产品类别:
    RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

    应用:
    Transcription-Mediated and NASBA Amplification

    • 产品组分信息

      本产品提供以下试剂或组分:

      NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
      • M0470T     -20    
          Hi-T7® RNA Polymerase (High Concentration) M0470TVIAL -20 1 x 0.05 ml 1,000,000 units/ml
          Hi-T7® RNA Polymerase Reaction Buffer B0658AVIAL -20 1 x 1 ml Not Applicable
          MgCl2 Solution B2534AVIAL -20 1 x 0.5 ml 0.2 M

    • 特性和用法

      单位定义

      One unit is defined as the amount of enzyme required to incorporate 1 nmol of ATP into acid-insoluble material in 1 hour at 50°C

      反应条件

      1X Hi-T7® RNA Polymerase Reaction Buffer
      Incubate at 50°C

      1X Hi-T7® RNA Polymerase Reaction Buffer
      40 mM Tris-HCl
      4 mM MgCl2
      50 mM NaCl
      2 mM spermidine
      1 mM DTT
      (pH 7.5 @ 25°C)

      贮存溶液

      50 mM Tris-HCl
      100 mM NaCl
      1 mM EDTA
      1 mM DTT
      50% Glycerol
      0.1% (w/v) Triton® X-100
      pH 7.9 @ 25°C

      单位活性检测条件

      1X Hi-T7 RNA Polymerase Reaction Buffer, supplemented with 0.5 mM each ATP, UTP, GTP, CTP and 1 µg T7 phage DNA in 50 µl reaction volume.

    • 优势和特性

      应用特性

      • mRNA 用于体外翻译、显微注射以及转染
      • 放射标记的 RNA 探
      • 非同位素 RNA 标记
      • 靶基因的向导 RNA
      • RNA 的结构、加工以及催化作用的研究
      • 基因表达实验中的反义 RNA
      • RNA 扩增
      • 等温扩增

    • 相关产品

      相关产品

      • rNTP 套装
      • rNTP 混合液
      • 小鼠 RNase 抑制剂
      • rNTP 混合液
      • T2040 Monarch RNA Cleanup Kit 50 ug
      • m0251-t7-rna-polymerase
      • 无机焦磷酸酶(大肠杆菌)

    操作说明、说明书 & 用法

    • 操作说明

      1. Protocol for Standard RNA Synthesis

    • 应用实例

      • Scaling of High-Yield In vitro Transcription Reactions for Linear Increase of RNA Production

    FAQs & 问题解决指南

    • FAQs

      1. Can I use a different reaction buffer for in vitro transcription with Hi-T7 RNA Polymerase?
      2. Does Hi-T7 RNA Polymerase recognize the same promoter sequence as the wild-type T7 RNA Polymerase from bacteriophage?
      3. At what temperature is Hi-T7 RNA Polymerase active?
      4. What are the main causes of reaction failure when using Hi-T7 RNA Polymerase?
      5. What templates can be used for in vitro transcription with Hi-T7 RNA Polymerase?
      6. Can Hi-T7 RNA Polymerase transcribe off of an uncut plasmid?

    Hi-T7® RNA Polymerase |NEB酶试剂 New England Biolabs

    上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

    产品信息

    Hi-T7 RNA Polymerase is an engineered DNA-dependent RNA polymerase that is highly specific for T7 phage promoters and is designed to function at higher temperatures than the wild-type bacteriophage T7 RNA Polymerase. Hi-T7 RNA Polymerase functions at an optimal temperature of 50-52°C.

    产品来源

    An E. coli strain that carries an engineered His-tag T7 RNA Polyermase gene.

    产品类别:
    RNA Synthesis In vitro Transcription (IVT)

    • 产品组分信息

      本产品提供以下试剂或组分:

      NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
      • M0658S     -20    
          Hi-T7® RNA Polymerase M0658SVIAL -20 1 x 0.1 ml 50,000 units/ml
          Hi-T7® RNA Polymerase Reaction Buffer B0658AVIAL -20 1 x 1 ml Not Applicable

    • 特性和用法

      单位定义

      One unit is defined as the amount of enzyme required to incorporate 1 nmol of ATP into acid-insoluble material in 1 hour at 50°C.

      Reaction Conditions
      1X Hi-T7 RNA Polymerase Reaction Buffer, supplemented with 0.5 mM each of ATP, UTP, GTP, CTP, and DNA template containing the T7 RNA Polymerase promoter.  Incubate at 37-56°C for 1 hour.  Optimal incubation temperature is 50-52°C.

      反应条件

      1X Hi-T7® RNA Polymerase Reaction Buffer
      Supplement with 0.5 mM ATP, 0.5 mM UTP , 0.5 mM GTP 和 0.5 mM CTP 
      Incubate at 50°C

      1X Hi-T7® RNA Polymerase Reaction Buffer
      40 mM Tris-HCl
      4 mM MgCl2
      50 mM NaCl
      2 mM spermidine
      1 mM DTT
      (pH 7.5 @ 25°C)

      贮存溶液

      50 mM Tris-HCl
      100 mM NaCl
      1 mM EDTA
      1 mM DTT
      0.1% (w/v) Triton® X-100
      50% Glycerol
      pH 7.9 @ 25°C

      单位活性检测条件

      1X Hi-T7 RNA Polymerase Reaction Buffer, supplemented with 0.5 mM each ATP, UTP, GTP, CTP and 1 µg T7 phage DNA in 50 µl reaction volume.

    • 优势和特性

      应用特性

      • Radiolabeled RNA probes
      • Non-isotopic RNA labeling
      • Guide RNA for gene targeting
      • mRNA for in vitro translation, microinjection and transfection 
      • RNA structure, processing and catalysis studies
      • RNA amplification
      • Isothermal amplification
      • Anti-sense RNA for gene expression

    • 相关产品

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      • m0251-t7-rna-polymerase
      • 小鼠 RNase 抑制剂
      • rNTP 套装
      • rNTP 混合液

    操作说明、说明书 & 用法

    • 操作说明

      1. Protocol for Standard RNA Synthesis with Hi-T7 RNA Polymerase (NEB #M0658)

    • 应用实例

      • Scaling of High-Yield In vitro Transcription Reactions for Linear Increase of RNA Production

    FAQs & 问题解决指南

    • FAQs

      1. Can I use a different reaction buffer for in vitro transcription with Hi-T7 RNA Polymerase?
      2. Does Hi-T7 RNA Polymerase recognize the same promoter sequence as the wild-type T7 RNA Polymerase from bacteriophage?
      3. At what temperature is Hi-T7 RNA Polymerase active?
      4. What are the main causes of reaction failure when using Hi-T7 RNA Polymerase?
      5. What templates can be used for in vitro transcription with Hi-T7 RNA Polymerase?
      6. Can Hi-T7 RNA Polymerase transcribe off of an uncut plasmid?

    Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

    上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

    产品信息

    如需了解 NEB DNA 连接酶产品质量控制的详细信息,请访问连接酶质控页面。

    Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶的耐热突变体,可催化双链 DNA 或 RNA 中相邻的 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基末端之间形成磷酸二酯键,比野生型 T4 DNA 连接酶更耐高热条件。Hi-T4 耐热 DNA 连接酶可在高达 50℃ 的条件下连接平末端和粘性末端,并修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交体中的单链切刻。

    图 1:Hi-T4 耐热 DNA 连接酶的耐热性优于 T4 DNA 连接酶。

    Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶 |

     
    400 单位 T4 DNA 连接酶(NEB #M0202)或 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶(NEB #M2622)在无 DNA 底物的 1X T4 DNA 连接酶缓冲液中,以 45℃ 预温育指定时长。加入 0.12 μM HindIII(粘性末端)荧光标记片段,并以 37℃ 温育 15 分钟,测试连接酶的剩余活性。连接产物经毛细管电泳分析。

    T4 DNA 连接酶在 45℃ 时逐渐失去活性,而 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶即使在 45℃ 温育 72 小时后在连接粘性末端底物上仍保持完全活性。

     

    图 2:Hi-T4 耐热 DNA 连接酶对更高温度循环的耐受性优于 T4 DNA 连接酶。

    Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶 |

    Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶 |

    在 1X T4 DNA 连接酶缓冲液中,分别用 1,000 单位 T4 DNA 连接酶(NEB #M0202)或 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶(NEB #M2622)与 DNA(1 μg pBR322)进行循环温浴。循环温度设置为:42℃(A)或 50℃(B)5 分钟,16℃ 5 分钟。在指定的循环次数(0、15、30、45 或 60 次)之后,以荧光标记的粘性末端底物(HindIII 突出末端,25℃ 时 10 分钟)检测连接酶活性。连接产物经毛细管电泳分析。图中显示了连接酶的剩余活性(相对于 0 循环数据点)。

    A:在 16℃ 和 42℃ 条件下,T4 DNA 连接酶经过循环后逐渐失去活性(金黄线,A),而 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶在此温度条件下经过 60 次循环后仍保持活性(橙红线,A)。

    B:在 16℃ 和 50℃ 的 15 次循环后,T4 DNA 连接酶就完全失去活性(金黄线,B),而 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶在此温度条件下经过 60 次循环后仍保持约 60% 的活性(橙红线,B)。

    重点

    • 经基因工程改造的 T4 DNA 连接酶耐热突变体
    • 从重组酶中分离

    产品来源

    An E. coli strain that carries a plasmid encoding the engineered Hi-T4 DNA Ligase gene.

    产品类别:
    DNA Ligases Products

    应用:
    BioBrick® Assembly,
    Cloning Ligation,
    NEBridge® Golden Gate Assembly

    • 产品组分信息

      本产品提供以下试剂或组分:

      NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
      • M2622S     -20    
          Hi-T4™ DNA Ligase M2622SVIAL -20 1 x 0.05 ml 400,000 units/ml
          T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
          StickTogether™ DNA Ligase Buffer B0535AVIAL -20 1 x 1 ml 2 X
      • M2622L     -20    
          Hi-T4™ DNA Ligase M2622LVIAL -20 1 x 0.25 ml 400,000 units/ml
          T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
          StickTogether™ DNA Ligase Buffer B0535AVIAL -20 3 x 1 ml 2 X

    • 特性和用法

      单位定义

      1 单位是指在 25℃ 条件下,当总反应体积为 20 µl 时,30 分钟内能连接 50% 的 6 µg Lambda-HindIII 消化后的 DNA 所需的酶量。

      反应条件

      1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
      Incubate at 25°C

      1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
      50 mM Tris-HCl
      10 mM MgCl2
      1 mM ATP
      10 mM DTT
      (pH 7.5 @ 25°C)

      贮存溶液

      10 mM Tris-HCl
      50 mM KCl
      1 mM DTT
      0.1 mM EDTA
      50% Glycerol
      pH 7.4 @ 25°C

      热失活

      65°C for 10 minutes

    • 优势和特性

      Features

      • 限制性酶切片段的克隆
      • 将连接子(linkers)和接头(adapters)连接到 DNA 片段的平末端

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      • T4 DNA Ligase
      • Nuclease-free Water

      单独销售的组分

      • T4 DNA 连接酶反应缓冲液

    • 注意事项

      1. ATP 是反应中必不可少的辅因子。这与需要 NAD 作为辅因子的 E. coli DNA 连接酶不同。
      2. 若需稀释 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶,随后 -20℃ 储存,推荐使用含 50% 甘油的贮存缓冲液(稀释液 A,NEB #B8001S);如稀释后立即使用,也可使用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液。
      3. 连接温度

        连接粘性末端(建议用 1X T4 DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Hi-T4 耐热 DNA 连接酶,在 25-50℃ 条件下温育 10 分钟。连接平末端或单碱基突出末端(建议用 1X StickTogether DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 的反应体系中加入 1 µl Hi-T4 耐热 DNA 连接酶,在 25-50℃ 条件下温育 10 分钟。切勿通过加热来终止反应,因为 StickTogether DNA 连接酶缓冲液中的 PEG 受热会抑制转化。

    • 参考文献

      1. Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982). P.D. Boyer(Ed.), 5, San Diego: Academic Press.

    操作说明、说明书 & 用法

    • 操作说明

      1. Protocol for Hi-T4™ DNA Ligase (NEB #M2622)

    • 使用指南

      • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer

    工具 & 资源

    • 选择指南

      • DNA Ligase Selection Chart
      • NEB Diluent and Buffer Table
      • Properties of DNA and RNA Ligases
      • Substrate-based Ligase Selection Chart

    • Web 工具

      • NEBioCalculator®

    FAQs & 问题解决指南

    • FAQs

      1. What are some causes of ligation reaction failure that can lead to transformation failure?
      2. When should Hi-T4 DNA Ligase be the enzyme of choice?
      3. Which buffer should I use with Hi-T4 DNA Ligase?
      4. What is the activity of Hi-T4 DNA Ligase in other buffers?
      5. Can this ligase be heat inactivated?
      6. What is the difference between the unit definitions of T4 DNA Ligase (NEB #M0202) and Hi-T4 DNA Ligase (NEB #M2622)?
      7. How much DNA should be used in a ligation using this ligase?