Express 无细胞 E. coli 蛋白合成系统 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

NEBExpress® 无细胞 E. coli 蛋白合成系统是一种转录/翻译偶联的系统，专用于在 T7 RNA 聚合酶启动子控制下合成 DNA 模板编码的蛋白。该系统表达水平高，能够产生高分子量蛋白，可扩大规模，高通量表达应用时成本低。系统的速度和稳定性有助于蛋白质合成应用，如蛋白质工程、突变研究和酶筛选。此外，该系统还可生成用于生物物理和结构功能分析的蛋白。

NEBExpress® 无细胞 E. coli 蛋白合成系统包含除目的蛋白的模板 DNA 外蛋白合成所需的所有组分。该系统由基因工程菌株中提取的高活性细胞提取物、反应缓冲液和优化的 T7 RNA 聚合酶混合形成，协同完成分子量从 17 到 230 KDa 的多种蛋白质的高效表达。

通过短时间温育实现蛋白合成，而所合成的蛋白则与下游纯化或 SDS-PAGE、Western Blot 或直接功能性测定分析兼容。该系统的新配方允许样本直接上样到 SDS-PAGE 上，无需丙酮或 TCA 沉淀。此外，所合成的蛋白可以使用固定化金属亲和层析（IMAC）等亲和纯化技术从反应混合物中分离，供进一步结构和/或功能表征。

图 1：使用 NEBExpress® 无细胞 E. coli 蛋白合成系统合成蛋白

Express 无细胞 E. coli 蛋白合成系统 | 

在 50 µl 反应体系中加入 250 ng 模板 DNA，37℃ 温育 3 小时。各取 2 µl 反应液使用 10% – 20% Tris-甘氨酸凝胶进行 SDS-PAGE 电泳分析。红点处代表目的蛋白。M = 非预染蛋白 Standard，宽范围（10-200 kDa）（NEB #P7717），Neg = 阴性对照，无 DNA。
产品类别:
NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System,
Cell-Free Protein Expression Products,
Protein Expression Products

应用:
NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System,
Cell-Free Protein Expression,
High-throughput cloning and automation solutions,

Protein Expression

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E5360S     -80    
        NEBExpress™ S30 Synthesis Extract P0864SVIAL -80 1 x 0.125 ml Not Applicable
        Protein Synthesis Buffer (2X) B0864SVIAL -80 1 x 0.25 ml 2 X
        RNase Inhibitor, Murine M1018AVIAL -20 1 x 0.015 ml 40,000 units/ml
        T7 RNA Polymerase M1019AVIAL -20 1 x 0.015 ml Not Applicable
        NEBExpress® Control DHFR-His Plasmid N3273AVIAL -20 1 x 0.01 ml 125 ng/µl
    • E5360L     -80    
        NEBExpress™ S30 Synthesis Extract P0864SVIAL -80 10 x 0.125 ml Not Applicable
        Protein Synthesis Buffer (2X) B0864SVIAL -80 10 x 0.25 ml 2 X
        RNase Inhibitor, Murine M1018AAVIAL -20 1 x 0.15 ml 40,000 units/ml
        T7 RNA Polymerase M1019AAVIAL -20 1 x 0.15 ml Not Applicable
        NEBExpress® Control DHFR-His Plasmid N3273AVIAL -20 1 x 0.01 ml 125 ng/µl

  • 优势和特性

    Features

    • 快速合成分析量的蛋白质，便于下一步鉴定。
    • 合成目的蛋白质的分子量从 17 至 230 kDa
    • 模板可以是质粒 DNA、线性 DNA 或 mRNA。
    • 最低限度的蛋白酶活性可确保所需目的蛋白的稳定性
    • 质粒模板无需额外纯化步骤，RNase 污染可以使用随附的 RNase 抑制剂抑制
    • 蛋白可以通过亲和纯化分离或直接功能性分析
    • 反应液可以直接上样到 SDS-PAGE 凝胶上，无需丙酮或 TCA 沉淀
    • 灵活的反应条件可实现最大产量：蛋白质合成可在 37℃ 下持续 10 小时，或在更低的温度下持续 24 小时，不需要在中途进行加样
    • 可以轻松按比例缩小或放大合成反应的规模来产生以毫克计的蛋白
    • 试剂盒包含经优化的 T7 RNA 聚合酶，可实现最佳性能

    应用特性

    • 高通量筛选和液体处理
    • 突变研究：点突变、缺失和插入的影响，快速识别活性结构域和功能基团
    • 抗原表位图谱构建和蛋白折叠
    • 毒性蛋白表达

  • 相关产品

    相关产品

    • PURExpress® 体外蛋白合成试剂盒
    • PURExpress® 二硫键增强剂
    • PURExpress® Δ (aa, tRNA) 试剂盒
    • PURExpress® Δ RF123 试剂盒
    • NEBExpress® GamS 核酸酶抑制剂

    单独销售的组分

    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）
    • Nuclease-free Water
    • Unstained Protein Standard, Broad Range (10-200 kDa)
    • 蓝色蛋白上样染料
    • NEBExpress® Ni-NTA 磁珠
    • NEBExpress® Ni Spin Columns
    • NEBExpress® Ni Resin

  • 注意事项

    1. 详细的产品说明书和操作说明可在此处查询。
    2. 常规温育温度为 37℃。降低温育温度能促进某些目的蛋白的折叠。该反应可在 16℃ 至 42℃ 的温度温育，蛋白合成可在 37℃ 下持续 10 小时，或在更低的温度下持续 24 小时，具体取决于 DNA 起始量和通风情况。
    3. 某些市售试剂盒制备的质粒 DNA 可能含有微量的 RNase A。RNase A 污染可由随附的 RNase 抑制剂抑制，因此无需额外的纯化步骤。
    4. 由 NEBExpress 无细胞 E. coli 蛋白合成系统建立的体外蛋白合成反应体系可以直接上样到 SDS-PAGE 凝胶上，无需丙酮或 TCA 沉淀。
    5. 该系统与线性 DNA 兼容。为达到与质粒模板相当的表达水平，需添加 NEBExpress GamS 核酸酶抑制剂（NEB #P0774S）。
    6. 蛋白合成反应可以按比例放大；包括 DNA 模板在内的所有反应组分都必须按比例缩放。该系统已在低至 1 µl、高至 2 mL 的反应体积下进行了测试。此范围内的蛋白合成产量相当。对于较小体积的反应（如 1 µl），应使用声波液滴喷射（acoustic droplet ejection）移液系统（或类似设备）。对于较大体积的反应，应使用有足够顶部空间的容器，以便通风和搅拌温育。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Quick Start Protocol for NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System
    2. NEBExpress Cell-free E.coli Protein Synthesis SDS-PAGE Protocol
    3. Typical Protocol for NEBExpress® GamS Nuclease Inhibitor when used with the NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System (NEB #E5360)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE5360

  • 应用实例

    • NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System
    • Scaling down to scale up Miniaturizing cell free protein synthesis reactions with the Echo 525 Acoustic Liquid Handler
    • Accelerating DNA Construction to Protein Expression: A Rapid 1-Day Workflow Using NEBridge® Golden Gate Assembly 

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Protein Expression and Purification Selection Chart
    • PURExpress® vs. NEBExpress® Application Chart

  • Web 工具

    • DNA Sequences and Maps Tool

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Based on my application, should I use the NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System (NEB #E5360) or the PURExpress® In Vitro Protein Synthesis Kit (NEB #E6800)? 
    2. What is the difference between NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System and the PURExpress In Vitro Protein Synthesis Kit?
    3. Are the yields with NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System comparable with the PURExpress In Vitro Protein Synthesis Kit?
    4. Can I express large proteins with NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System?
    5. Can I use the NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System to incorporate unnatural amino acids or radiolabeled amino acids?
    6. Can the reaction be scaled to smaller or larger volumes?
    7. What methods can be used to purify the synthesized protein?
    8. Can I co-express different protein targets from different plasmids? 
    9. Do I need to purify my plasmid or linear DNA template prior to synthesis?
    10. Are genes under bacterial promoter control expressed with the NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System?
    11. What systems does NEB offer for protein expression and purification?
    12. Will the target protein remain stable during the synthesis incubation at 37°C?
    13. Following the NEBExpress cell-free protein synthesis reaction, how should I analyze the protein? Is it possible to use native SDS-PAGE or other functional assays to determine the activity of the expressed protein?
    14. Can I add an RNA polymerase (RNAP) other than T7 RNAP to my NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis reactions?
    15. Can I use a different concentration or formulation of T7 RNA Polymerase in my NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis reactions?
    16. What size is the NEBExpress® Control DHFR-His Plasmid?
    17. The protocol recommends shaking the reactions vigorously. Is this necessary?
    18. What size is the NEBExpress® Control DHFR-His Plasmid?
    19. The protocol recommends shaking the reactions vigorously. Is this required?

  • 问题解决指南

    • Troubleshooting Guide for NEBExpress™ Cell-free E. coli Protein Synthesis System (NEB #E5360)