产品信息

α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 是一种具有广谱特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖上 α1-2、α1-4 和 α1-6 连接的岩藻糖残基。与其它键相比，α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 可更有效地切割 α1-6 岩藻糖残基。
• 是重组酶，没有检测到糖苷内切酶或其它糖苷外切酶污染活性
• 无甘油剂型更适合在 HPLC 和质谱分析中获得最佳性能
• 经 SDS-PAGE 和完整 ESI-MS 测定，纯度 ≥ 95%
• 稳定最佳活性可以长达 12 个月

产品来源

该酶克隆自 Omnitrophica 细菌，在 E. coli 中表达。

特异性

产品类别:

Exoglycosidases Products,

Proteome Analysis Products

应用:

Glycan Sequencing,

Proteomics,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0749S     4       α1-2,4,6 Fucosidase O P0749SVIAL 4 1 x 0.04 ml 2,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
  P0749L     4       α1-2,4,6 Fucosidase O P0749LVIAL 4 1 x 0.2 ml 2,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 µl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol 人源 IgG [GlcNAcβ1-2Manα1-6(GlcNAcβ1-2Manα1-3)Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc(Fucα1-6)-AMAC] 的 G0F 中超过 95% 的岩藻糖水解所需的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 20°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  实际: 49 kDa

  单位活性检测条件

  在 10µl 反应体系中，将两倍稀释的 α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 与 1 nmol AMAC 标记底物和 1X GlycoBuffer 1 进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 相关产品

  相关产品

  • α1-2 岩藻糖苷酶
  • p0709-pngase-f-glycerol-free-recombinant
  • Rapid 快速 PNGase F

• 注意事项

  1. 酶活力单位定义使用 37℃ 作为反应温度，以同时适应糖苷酶消化和 N-糖链测序的操作说明。而 α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 的最佳反应温度为 50℃。37℃ 条件下活性降低约 35%。
  2. 为了从具有即时标签的糖链中完全去除核心 α1-6 岩藻糖残基，可能需要更长的温育时间（18 小时）。
  3. 只有将底物剪切至三甘露糖基核心时，α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 才对完整的抗体有活性。
  4. 如需更大反应体积，可按比例扩大反应体系。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. α1-2,4,6 Fucosidase O Digestion of Released Labeled Glycans Protocol

• 应用实例

  • Detailed Characterization of Antibody Glycan Structure using the N-Glycan Sequencing Kit

工具 & 资源

• Web 工具

  • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. what-is-the-difference-between-1-2-3-4-6-fucosidase-and-1-2-4-6-fucosidase-o
  2. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-fucose-residues-in-the-presence-of-instant-labelled-glycans
  3. can-i-use-1-2-4-6-fucosidase-o-in-a-double-digest-with-other-exoglycosidases
  4. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-1-3-fucose-residues
  5. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-branched-and-complex-substrates
  6. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-fucose-residues-from-an-intact-antibody
  7. what-is-the-optimal-incubation-temperature-for-1-2-4-6-fucosidase-o
  8. what-is-a-good-method-to-re-purify-a-glycan-or-glycopeptide-after-exoglycosidase-treatment3
  9. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。

  最佳 pH 范围为 4.5–5.5。

  如果单独使用该酶（不同时使用其它糖苷酶），建议温育温度为 50℃。

  若底物为结构复杂的多分支寡糖，可能需要延长温育时间（4 小时至过夜）进行酶切。

产品信息

 

产品来源

该酶克隆自扁桃（Prunus dulcis），在毕赤酵母（Pichia pastoris）中表达。

特异性

产品类别:

Exoglycosidases Products,

Proteome Analysis Products

应用:

Expression Systems,

Glycan Sequencing,

Proteomics,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0769S     4       α1-3,4 Fucosidase P0769SVIAL 4 1 x 0.05 ml 4,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 μl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galβ1-4GlcNAcβ1-3(Fucα1-3)Galβ1- 4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的 α-岩藻糖水解所需的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  实际: 56000 Da

  比活度

  75,000 unit/mg

  单位活性检测条件

  在 10 μl 反应体系中，将两倍稀释的 a1-3,4 岩藻糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物在添加有 1X BSA 的 1X GlycoBuffer 1 中进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S. T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for α1-3, 4 Fucosidase (P0769)

工具 & 资源

• Web 工具

  • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What is the difference between α1-2 Fucosidase, α1-3,4,6 Fucosidase and α1-3,4 Fucosidase?
  2. Can I use α1-3,4 Fucosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
  3. Can α1-3,4 Fucosidase cleave core α1-3 fucose residues?
  4. Can α1-3,4 Fucosidase and α1-2,3,4,6 Fucosidase cleave branched and complex substrates?
  5. What are Glycosidases and their uses?
  6. Do detergents inhibit glycosidases?
  7. What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
  8. Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
  9. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  • 反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。

  • 1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。

  • 从复杂 N-糖链中去除 α1-3 和 α1-4 岩藻糖残基，可能需要提高酶的浓度和延长温育时间。

  • α1-3,4 岩藻糖苷酶可以切割 N-连接糖链外臂上的 α1-3 岩藻糖，但无法去除核心 α1-3 岩藻糖残基。

  • 贮存缓冲液不包含 BSA；建议在反应中添加 BSA 以保持最佳酶活性。

产品信息

 

产品来源

该酶克隆自绿色咖啡豆，在 E. coli 中表达。

特异性

产品类别:

Exoglycosidases Products,

Proteome Analysis Products

应用:

Expression Systems,

Glycan Sequencing,

Proteomics,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0747S     4       α1-3,4,6 Galactosidase P0747SVIAL 4 1 x 0.025 ml 8,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml
  P0747L     4       α1-3,4,6 Galactosidase P0747LVIAL 4 1 x 0.125 ml 8,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galα1-3Galβ1-4Gal- 7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 α-D-半乳糖水解所需要的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C

  分子量

  理论上的: 39700 Da

  比活度

  71,000 unit/mg

  单位活性检测条件

  在 10 μl 1X GlycoBuffer 1 和 1X BSA 的反应体系中，将两倍稀释的 α1-3,4,6 半乳糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 相关产品

  相关产品

  • α1-3,6 半乳糖苷酶

• 注意事项

  1. 8 个单位的酶在 65℃ 条件下温育 10 分钟失活。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology 5,. 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for α1-3, 4, 6 Galactosidase (P0747)

• 应用实例

  • Detailed Characterization of Antibody Glycan Structure using the N-Glycan Sequencing Kit

工具 & 资源

• Web 工具

  • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What are Glycosidases and their uses?
  2. What is the difference between α1-3,6 Galactosidase and α1-3,4,6 Galactosidase?
  3. Can I use α1-3,4,6 Galactosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
  4. What is a good positive control for α1-3,4,6 Galactosidase?
  5. Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
  6. What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
  7. Do detergents inhibit glycosidases?
  8. How much exoglycosidase should be used?
  9. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  • 反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃
  • 1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。
  • 对硝基苯 α-D-半乳糖苷是 α1-3,4,6 半乳糖苷酶的阳性对照底物
  • 贮存缓冲液不包含 BSA；建议在反应中添加 BSA 以保持最佳酶活性

产品信息

α1-3,6 半乳糖苷酶是一种具有高度特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖上 α1-3 和 α1-6 连接的 D-吡喃半乳糖残基。

详细特异性：特异性可能会随温育时间和分支结构变化。

图 1：α1-3,6 半乳糖苷酶的详细特异性

重点

从糖蛋白中去除 Galα1,3Gal 抗原表位。

产品来源

克隆自木薯细菌性萎蔫病菌（Xanthomonas manihotis），在 E. coli 中表达。

产品类别:

Exoglycosidases Products

应用:

Glycan Sequencing,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0731S     4       α1-3,6 Galactosidase P0731SVIAL 4 1 x 0.025 ml 4,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 µl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galα1-3Galβ1-4Gal-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 α-D-半乳糖水解所需的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  实际: 70000 Da

  单位活性检测条件

  在 10 µl 反应体系中，将两倍梯度稀释的 α1-3,6 半乳糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物在含有 1X BSA 的 1X GlycoBuffer 1 中进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 注意事项

  1. 避免反复冻融。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Protocol for α1-3,6 Galactosidase (P0731)
  2. Typical Reaction Conditions for α1-3,6 Galactosidase (P0731)

• 使用指南

  • Detailed Characterization of Several Glycosidase Enzymes
  • Glycobiology Unit Conversion Chart

• 应用实例

  • AppNote_Removal_of_Terminal_Galactose_from_Glycoprotein_with_alpha1-3_6_Galactosidase
  • Enzymatic removal of N– and O-glycans using PNGase F or the Protein Deglycosylation Mix
  • Removal of terminal galactose from a glycoprotein containing tri- and tetra-antennary N-linked sugars with α1-3 6 Galactosidase

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Can I use α1-3,6 Galactosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
  2. What is a good positive control for α1-3,6 Galactosidase?
  3. What are Glycosidases and their uses?
  4. How much exoglycosidase should be used?
  5. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
  6. How much exoglycosidase should be used?