产品信息

该套装试剂盒包含 200 万单位 O-糖苷酶和 2,000 单位神经氨酸苷酶。

O-糖苷酶即内切-α-N-乙酰半乳糖胺酶，催化切割糖蛋白上 O-连接二糖结构，核心 1 和核心 3 结构。

神经氨酸苷酶是乙酰神经氨酸水解酶（唾液酸酶）的俗称。该酶催化水解糖蛋白和寡糖上的 α2-3、α2-6、α2-8 连接的 N-乙酰-神经氨酸残基。

产品来源

O--糖苷酶克隆自粪肠球菌（Enterococcus faecalis），在E.coli中表达（1）。神经氨酸苷酶克隆自产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）（2），在E.coli中过表达（3）。

产品类别:

Endoglycosidases Products

应用:

Expression Systems,

Glycan Sequencing,

Protein Digestion,

Proteomics,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  E0540S     -20       α2-3,6,8 Neuraminidase P0720SVIAL -20 1 x 0.04 ml 50,000 units/ml   O-Glycosidase P0733SVIAL -20 1 x 0.05 ml 4.0E7 units/ml   GlycoBuffer 2 B3704SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   NP-40 B2704SVIAL -20 1 x 1 ml 10 %   Glycoprotein Denaturing Buffer B1704SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位 O-糖苷酶指 100 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内从 5 mg 神经氨酸苷酶酶解后的非变性胎球蛋白中去除 0.68 nmol O-连接二糖单位所需的酶量（1 单位 O-糖苷酶和 PNGase F 可以分别去除等摩尔的 O-连接二糖单位和 N-连接寡糖）。

  O-糖苷酶的非变性单位定义：
  在 1X GlycoBuffer 2 反应缓冲液中，5 mg 神经氨酸苷酶酶解后的胎球蛋白和两倍梯度稀释的 O-糖苷酶。37℃ 条件下温育 1 小时。通过 Morgan-Elson 检测法测定 O-连接二糖碳水化合物的含量（4）。注意：在变性条件下，酶的活性提高两倍。该观察结果因底物而异。

  神经氨酸苷酶的单位定义：
  1 单位神经氨酸苷酶指 10 µl 反应体系中，37℃ 条件下，5 分钟内将 1 nmol Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95%的末端 α-Neu5Ac 水解所需的酶量。

  1X 糖蛋白变性缓冲液
  0.5% SDS
  40 mM DTT

  1X NP-40
  1% NP-40（溶解于 MilliQ-H₂O）

  反应条件

  1X GlycoBuffer 2
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 2
  50 mM Sodium Phosphate
  (pH 7.5 @ 25°C)

• 相关产品

  相关产品

  • α2-3,6,8 神经氨酸苷酶
  • p0733-o-glycosidase
  • p0704-pngase-f
  • p0705-pngase-f-glycerol-free
  • p0702-endo-h
  • p0703-endo-hf

• 注意事项

  1. SDS 会抑制 O-糖苷酶活性，因此反应混合物中须含有 NP-40 来抵消 SDS 的抑制作用。目前还不清楚这种非离子洗涤剂抵消 SDS 抑制作用的机理。要使用糖苷内切酶 H 进行双酶切，须含有 NP-40（NP-40 不会抑制糖苷内切酶 H 的活性）。
  2. 要使非变性糖蛋白去糖基化，建议增加酶量并延长温育时间。

• 参考文献

  1. Koutsioulis, D., Landry, D. and Guthrie, E.P. (2008). Glycobiology. 18, 799-805.
  2. Roggentin, P. et al. (1988). FEBS Lett. 238, 31-34.
  3. Guan, C. unpublished observations. New England Biolabs.
  4. Morgan, W.T.J. and Elson, L.A. (1934). Biochem. J. 28, 988-995.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. O-Glycosidase Application Note 1 (P0733)
  2. O-Glycosidase (P0733)

• 使用指南

  • Detailed Characterization of Several Glycosidase Enzymes

工具 & 资源

• 选择指南

  • Endoglycosidase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What are the typical reaction conditions for O-Glycosidase?
  2. Is it necessary to treat my glycoprotein concomitantly with Neuraminidase and O-Glycosidase?
  3. What is the difference between PNGase F, Endo H and O-Glycosidase?
  4. How much O-Glycosidase should I use to remove my carbohydrate under native conditions?
  5. How do I inhibit O-Glycosidase?
  6. What is a good positive control for O-Glycosidase?
  7. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
  8. Do detergents inhibit O-Glycosidase?
  9. I tried using O-Glycosidase on my glycoprotein and didn’t see removal of the carbohydrate. What could be the problem?

产品信息

底物特异性：

α1-2,3 甘露糖苷酶是一种高度特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖末端 α1-2 和 α1-3 连接的 D-吡喃甘露糖残基。

产品来源

克隆自木薯细菌性萎蔫病菌（Xanthomonas manihotis），在 E. coli 中表达。

产品类别:

Exoglycosidases Products

应用:

Glycan Sequencing,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0729S     4       α1-2,3 Mannosidase P0729SVIAL 4 1 x 0.02 ml 32,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 µl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Manα1-3Manβ1-4GlcNAc-7-amino-4-methyl-coumarin （AMC）中超过 95% 的非还原性末端 α-D-甘露糖水解所需的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  50 mM NaCl
  20 mM Tris-HCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  实际: 90 kDa

  单位活性检测条件

  在 10µl 反应体系中，将两倍梯度稀释的 α1-2,3 甘露糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物在添加了 100 µg/ml BSA 的 1X GlycoBuffer 1 中进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 相关产品

  相关产品

  • α1-6 甘露糖苷酶

• 注意事项

  1. 对硝基苯-α-D-吡喃甘露糖苷不是本酶底物。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for  α1-2,3 Mannosidase (P0729)

• 使用指南

  • Detailed Characterization of Several Glycosidase Enzymes
  • Glycobiology Unit Conversion Chart

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What is a good positive control for this α1-2, 3 Mannosidase?
  2. How much exoglycosidase should be used?
  3. What are Glycosidases and their uses?
  4. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
  5. Do detergents inhibit exoglycosidases/endoglycosidases?
  6. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。

  1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。

  对硝基苯-a-D-吡喃甘露糖苷不是本酶底物。