α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 是一种具有广谱特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖上 α1-2、α1-4 和 α1-6 连接的岩藻糖残基。与其它键相比，α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 可更有效地切割 α1-6 岩藻糖残基。
• 是重组酶，没有检测到糖苷内切酶或其它糖苷外切酶污染活性
• 无甘油剂型更适合在 HPLC 和质谱分析中获得最佳性能
• 经 SDS-PAGE 和完整 ESI-MS 测定，纯度 ≥ 95%
• 稳定最佳活性可以长达 12 个月

产品来源

该酶克隆自 Omnitrophica 细菌，在 E. coli 中表达。

特异性

α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O |
产品类别:
Exoglycosidases Products,
Proteome Analysis Products

应用:
Glycan Sequencing,
Proteomics,
Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • P0749S     4    
        α1-2,4,6 Fucosidase O P0749SVIAL 4 1 x 0.04 ml 2,000 units/ml
        GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
    • P0749L     4    
        α1-2,4,6 Fucosidase O P0749LVIAL 4 1 x 0.2 ml 2,000 units/ml
        GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 10 µl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol 人源 IgG [GlcNAcβ1-2Manα1-6(GlcNAcβ1-2Manα1-3)Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc(Fucα1-6)-AMAC] 的 G0F 中超过 95% 的岩藻糖水解所需的酶量。

    反应条件

    1X GlycoBuffer 1
    Incubate at 37°C

    1X GlycoBuffer 1
    5 mM CaCl2
    50 mM sodium acetate
    (pH 5.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    50 mM NaCl
    1 mM EDTA
    pH 7.5 @ 20°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

    分子量

    实际: 49 kDa

    单位活性检测条件

    在 10µl 反应体系中，将两倍稀释的 α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 与 1 nmol AMAC 标记底物和 1X GlycoBuffer 1 进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

  • 相关产品

    相关产品

    • α1-2 岩藻糖苷酶
    • p0709-pngase-f-glycerol-free-recombinant
    • Rapid 快速 PNGase F

  • 注意事项

    1. 酶活力单位定义使用 37℃ 作为反应温度，以同时适应糖苷酶消化和 N-糖链测序的操作说明。而 α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 的最佳反应温度为 50℃。37℃ 条件下活性降低约 35%。
    2. 为了从具有即时标签的糖链中完全去除核心 α1-6 岩藻糖残基，可能需要更长的温育时间（18 小时）。
    3. 只有将底物剪切至三甘露糖基核心时，α1-2,4,6 岩藻糖苷酶 O 才对完整的抗体有活性。
    4. 如需更大反应体积，可按比例扩大反应体系。

  • 参考文献

    1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. α1-2,4,6 Fucosidase O Digestion of Released Labeled Glycans Protocol

  • 应用实例

    • Detailed Characterization of Antibody Glycan Structure using the N-Glycan Sequencing Kit

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. what-is-the-difference-between-1-2-3-4-6-fucosidase-and-1-2-4-6-fucosidase-o
    2. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-fucose-residues-in-the-presence-of-instant-labelled-glycans
    3. can-i-use-1-2-4-6-fucosidase-o-in-a-double-digest-with-other-exoglycosidases
    4. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-1-3-fucose-residues
    5. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-branched-and-complex-substrates
    6. can-1-2-4-6-fucosidase-o-cleave-fucose-residues-from-an-intact-antibody
    7. what-is-the-optimal-incubation-temperature-for-1-2-4-6-fucosidase-o
    8. what-is-a-good-method-to-re-purify-a-glycan-or-glycopeptide-after-exoglycosidase-treatment3
    9. How much exoglycosidase should be used?

  • 实验技巧

    反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。

    最佳 pH 范围为 4.5–5.5。

    如果单独使用该酶（不同时使用其它糖苷酶），建议温育温度为 50℃。

    若底物为结构复杂的多分支寡糖，可能需要延长温育时间（4 小时至过夜）进行酶切。