产品信息

 

产品来源

该酶克隆自绿色咖啡豆，在 E. coli 中表达。

特异性

产品类别:

Exoglycosidases Products,

Proteome Analysis Products

应用:

Expression Systems,

Glycan Sequencing,

Proteomics,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0747S     4       α1-3,4,6 Galactosidase P0747SVIAL 4 1 x 0.025 ml 8,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml
  P0747L     4       α1-3,4,6 Galactosidase P0747LVIAL 4 1 x 0.125 ml 8,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galα1-3Galβ1-4Gal- 7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 α-D-半乳糖水解所需要的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C

  分子量

  理论上的: 39700 Da

  比活度

  71,000 unit/mg

  单位活性检测条件

  在 10 μl 1X GlycoBuffer 1 和 1X BSA 的反应体系中，将两倍稀释的 α1-3,4,6 半乳糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 相关产品

  相关产品

  • α1-3,6 半乳糖苷酶

• 注意事项

  1. 8 个单位的酶在 65℃ 条件下温育 10 分钟失活。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology 5,. 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for α1-3, 4, 6 Galactosidase (P0747)

• 应用实例

  • Detailed Characterization of Antibody Glycan Structure using the N-Glycan Sequencing Kit

工具 & 资源

• Web 工具

  • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What are Glycosidases and their uses?
  2. What is the difference between α1-3,6 Galactosidase and α1-3,4,6 Galactosidase?
  3. Can I use α1-3,4,6 Galactosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
  4. What is a good positive control for α1-3,4,6 Galactosidase?
  5. Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
  6. What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
  7. Do detergents inhibit glycosidases?
  8. How much exoglycosidase should be used?
  9. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  • 反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃
  • 1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。
  • 对硝基苯 α-D-半乳糖苷是 α1-3,4,6 半乳糖苷酶的阳性对照底物
  • 贮存缓冲液不包含 BSA；建议在反应中添加 BSA 以保持最佳酶活性

产品信息

α1-3,6 半乳糖苷酶是一种具有高度特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖上 α1-3 和 α1-6 连接的 D-吡喃半乳糖残基。

详细特异性：特异性可能会随温育时间和分支结构变化。

图 1：α1-3,6 半乳糖苷酶的详细特异性

重点

从糖蛋白中去除 Galα1,3Gal 抗原表位。

产品来源

克隆自木薯细菌性萎蔫病菌（Xanthomonas manihotis），在 E. coli 中表达。

产品类别:

Exoglycosidases Products

应用:

Glycan Sequencing,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0731S     4       α1-3,6 Galactosidase P0731SVIAL 4 1 x 0.025 ml 4,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 µl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galα1-3Galβ1-4Gal-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 α-D-半乳糖水解所需的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  实际: 70000 Da

  单位活性检测条件

  在 10 µl 反应体系中，将两倍梯度稀释的 α1-3,6 半乳糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物在含有 1X BSA 的 1X GlycoBuffer 1 中进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 注意事项

  1. 避免反复冻融。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Protocol for α1-3,6 Galactosidase (P0731)
  2. Typical Reaction Conditions for α1-3,6 Galactosidase (P0731)

• 使用指南

  • Detailed Characterization of Several Glycosidase Enzymes
  • Glycobiology Unit Conversion Chart

• 应用实例

  • AppNote_Removal_of_Terminal_Galactose_from_Glycoprotein_with_alpha1-3_6_Galactosidase
  • Enzymatic removal of N– and O-glycans using PNGase F or the Protein Deglycosylation Mix
  • Removal of terminal galactose from a glycoprotein containing tri- and tetra-antennary N-linked sugars with α1-3 6 Galactosidase

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Can I use α1-3,6 Galactosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
  2. What is a good positive control for α1-3,6 Galactosidase?
  3. What are Glycosidases and their uses?
  4. How much exoglycosidase should be used?
  5. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
  6. How much exoglycosidase should be used?

产品信息

底物特异性：

β1-3 半乳糖苷酶是一种具有高度特异性的糖苷外切酶，既可催化水解寡糖上 β1-3 连接的 D-半乳糖残基，也可缓慢水解 β1-6 连接的 D-半乳糖残基。动力学数据表明，该酶优先水解 β1-3 糖苷键，其水解速度是 β1-6 糖苷键的 100 倍以上（1,2），是水解 β1-4 糖苷键的 500 倍以上（3）。

详细特异性：GlcNAc(β1-6) 残基是唯一可以影响酶特异性切割的异构型，因而能够水解非还原性 β1-4 半乳糖（图 1）。

 图 1： 

产品来源

克隆自木薯细菌性萎蔫病菌（Xanthomonas manihotis），在 E. coli 中表达。

产品类别:

Exoglycosidases Products

应用:

Glycan Sequencing,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0726S     -20       β1-3 Galactosidase P0726SVIAL -20 1 x 0.05 ml 10,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指 10 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 β-D-半乳糖水解所需要的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Supplement with 100 µg/µl Recombinant Albumin (Low-glycerol)
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  50 mM NaCl
  20 mM Tris-HCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  理论上的: 66 kDa

  单位活性检测条件

  在 10 µl 1X GlycoBuffer 1（添加有 100 µg/ml BSA）反应体系中，将两倍稀释的 β1-3 半乳糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 相关产品

  相关产品

  • β1-4 半乳糖苷酶 S
  • 1-3,4 半乳糖苷酶

• 注意事项

  1. 对于特定底物，需对实验进行优化，以确定最佳温育时间和酶浓度。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.
  2. Guthrie, E.P. and Taron, C.H. New England Biolabs. Unpublished observation
  3. Monks, B. New England Biolabs. Unpublished observation

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for β1-3 Galactosidase (P0726)

• 使用指南

  • Detailed Characterization of Several Glycosidase Enzymes
  • Glycobiology Unit Conversion Chart

• 应用实例

  • Enzymatic removal of N– and O-glycans using PNGase F or the Protein Deglycosylation Mix

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. How much exoglycosidase should be used?
  2. Do detergents inhibit exoglycosidases/endoglycosidases?
  3. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
  4. What are Glycosidases and their uses?
  5. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。

产品信息

β1-3,4 半乳糖苷酶又称 BTG，克隆自牛睾丸，是一种具有高度特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖末端 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖残基。

产品来源

该酶克隆自牛睾丸，在毕赤酵母（Pichia pastoris）中表达。

产品类别:

Exoglycosidases Products

应用:

Glycan Sequencing,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0746S     4       β1-3,4 Galactosidase P0746SVIAL 4 1 x 0.05 ml 8,000 units/ml   GlycoBuffer 4 B1703SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指 10 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 β-D-甘露糖水解所需要的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 4
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 4
  50 mM sodium acetate
  (pH 4.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  理论上的: 71 kDa

  单位活性检测条件

  在 10 µl 1X GlycoBuffer 4 反应体系中，将两倍稀释的 β1-3,4 半乳糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 相关产品

  相关产品

  • β1-3 半乳糖苷酶
  • β1-4 半乳糖苷酶 S

• 注意事项

  1. β1-3,4 半乳糖苷酶的最佳 pH 值为 4.5。
  2. 虽然在自然界中很少见，但实验表明，β1-6 连接半乳糖残基被 β1-3,4 半乳糖苷酶水解的速率远低于 β1-3 或 β1-4 连接半乳糖残基（2）的水解速率。
  3. 如需更大反应体积，可按比例扩大反应体系。
  4. 酶切底物不同，所需糖苷外切酶的量也不同。在 10-25 μl 的反应体系中，1 μg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的起始量范围为 1-2 µl。如果酶切不完全，可让反应过夜。
  5. β1-3,4 半乳糖苷酶是一种糖基化蛋白。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.
  2. Distler, J. and Jourdian, G. (1973). J. Biol. Chem. 248, 6772-6780.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for β1-3,4 Galactosidase Reaction Protocol (P0746)

工具 & 资源

• Web 工具

  • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What is the difference between β1-4Galactosidase, β1-4Galactosidase S and β1-3,4Galactosidase? 
  2. Can β1-3,4Galactosidase cleave β1-6 linked galactose residues? 
  3. What is a good positive control for β1-3,4 Galactosidase?
  4. Can I use β1-3,4 Galactosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
  5. What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
  6. How much exoglycosidase should be used?
  7. What are Glycosidases and their uses?
  8. Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
  9. Do detergents inhibit glycosidases?
  10. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  • 反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃

  • β1-3,4 半乳糖苷酶的最佳 pH 值为 4.5。而大多数糖苷外切酶的最佳 pH 值为 5.5。

  • β1-3,4 半乳糖苷酶以同等效率释放 β1-3 和 β1-4 半乳糖残基

  • 1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。