α1-3,6 半乳糖苷酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

α1-3,6 半乳糖苷酶是一种具有高度特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖上 α1-3 和 α1-6 连接的 D-吡喃半乳糖残基。

α1-3,6 半乳糖苷酶 |

详细特异性：特异性可能会随温育时间和分支结构变化。

图 1：α1-3,6 半乳糖苷酶的详细特异性

α1-3,6 半乳糖苷酶 | α1-3,6 半乳糖苷酶 |
α1-3,6 半乳糖苷酶 |

反应（B）包含 4 unit α1-3,6 半乳糖苷酶、1X GlycoBuffer 1 和 1X BSA，总反应体系为 10 µl。反应（B）显示，分支的岩藻糖会抑制酶切。反应（A）包含 24 unit α1-3,6 半乳糖苷酶和 100 unit 神经氨酸苷酶，随后在 65℃ 条件下热失活 10 分钟，再以 16 unit β1-4 半乳糖苷酶酶切 2 小时。反应（B）包含 1X GlycoBuffer 1 和 1X BSA，总反应体系为 20 µl。在 37℃ 条件下温育。当观察到（A）中底物完全转化为末端为非还原性 N-乙酰氨基葡糖的四支链寡糖时，即可判断 α1-3,6 半乳糖苷酶已完全酶切。

重点

从糖蛋白中去除 Galα1,3Gal 抗原表位。

产品来源

克隆自木薯细菌性萎蔫病菌（Xanthomonas manihotis），在 E. coli 中表达。

产品类别:
Exoglycosidases Products

应用:
Glycan Sequencing,
Recombinant Glycoprotein Expression,
Glycoprotein Analysis

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • P0731S     4    
        α1-3,6 Galactosidase P0731SVIAL 4 1 x 0.025 ml 4,000 units/ml
        GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 10 µl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galα1-3Galβ1-4Gal-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 α-D-半乳糖水解所需的酶量。

    反应条件

    1X GlycoBuffer 1
    Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
    Incubate at 37°C

    1X GlycoBuffer 1
    5 mM CaCl2
    50 mM sodium acetate
    (pH 5.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    50 mM NaCl
    1 mM EDTA
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

    分子量

    实际: 70000 Da

    单位活性检测条件

    在 10 µl 反应体系中，将两倍梯度稀释的 α1-3,6 半乳糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物在含有 1X BSA 的 1X GlycoBuffer 1 中进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

  • 注意事项

    1. 避免反复冻融。

  • 参考文献

    1. Wong-Madden, S.T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for α1-3,6 Galactosidase (P0731)
    2. Typical Reaction Conditions for α1-3,6 Galactosidase (P0731)

  • 使用指南

    • Detailed Characterization of Several Glycosidase Enzymes
    • Glycobiology Unit Conversion Chart

  • 应用实例

    • AppNote_Removal_of_Terminal_Galactose_from_Glycoprotein_with_alpha1-3_6_Galactosidase
    • Enzymatic removal of N– and O-glycans using PNGase F or the Protein Deglycosylation Mix
    • Removal of terminal galactose from a glycoprotein containing tri- and tetra-antennary N-linked sugars with α1-3 6 Galactosidase

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I use α1-3,6 Galactosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
    2. What is a good positive control for α1-3,6 Galactosidase?
    3. What are Glycosidases and their uses?
    4. How much exoglycosidase should be used?
    5. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
    6. How much exoglycosidase should be used?