产品信息

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  S1423S     4       NEBExpress® Ni-NTA Magnetic Beads S1423SVIAL 4 1 x 1 ml 10 %   2X IMAC Buffer B1076SVIAL 4 1 x 30 ml 2 X   2M Imidazole B1077SVIAL 4 1 x 2 ml 2 M
  S1423L     4       NEBExpress® Ni-NTA Magnetic Beads S1423SVIAL 4 5 x 1 ml 10 %   2X IMAC Buffer B1076SVIAL 4 5 x 30 ml 2 X   2M Imidazole B1077LVIAL 4 1 x 10 ml 2 M

• 特性和用法

  贮存溶液

  20% Ethanol

  支持介质

  大小在 20-100 μm 的琼脂糖基超顺磁球形微粒。

  结合容量

  因纯化靶标不同而异，通常 1 ml 柱床体积结合 ≥ 7.5 mg His 标签融合蛋白。

• 优势和特性

  Features

  • 在未变性或者变性条件下分离及纯化 His 标签融合蛋白，因为 IMAC 兼容各种条件，包括含有蛋白变性剂和洗涤剂时。
  • 具有高特异性 His 标签蛋白结合能力，可与多种表达体系结合且纯度 > 95%。
  • NTA 通过四个配位点牢固地结合金属离子，从而减少镍离子浸出。
  • 可与常用的细胞裂解试剂和多种缓冲液添加剂一起使用。

• 相关产品

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  • TEV Protease
  • 6 孔磁性分离架
  • 12 孔磁性分离架
  • 96 孔微孔板磁性分离架
  • 50 ml 磁性分离架

• 注意事项

  1. 请勿冷冻。
  2. 请勿贮存在含咪唑的缓冲液中。
  3. 多种大肠杆菌蛋白均能结合固定化金属亲和基质，亲和性由中到高。最常见的污染物包括 SlyD（28kDa）、GlmS（67kDa）、ArnA（74kDa）和碳酸酐酶（25 kDa）（1）。可以将 NiCo21（DE3）（NEB# C2529H）作为表达宿主，然后使用几丁质磁珠（NEB# E8036）（2）来进行第二步的结合，以去除 Ni-NTA 洗脱组分中的上述污染物。
  4. 蛋白产量和纯度取决于重组融合蛋白的表达水平、构象和溶解度特征。为了获得最佳结果，请先进行小量试验以估计每种 His 标签蛋白的表达水平并确定其溶解度。
  5. 请避免使用蛋白酶抑制剂或其它含螯合剂（如 EDTA）或强还原剂（如 DTT 或 β-巯基乙醇）的添加剂，它们会影响 NEBExpress™ Ni-NTA 磁珠的性能。
  6. 多组氨酸标签一般不会影响生物蛋白功能，或引起免疫反应，但如需切割 His 标签，推荐使用 TEV 蛋白酶（NEB# P8112）。
  7. NEBExpress™ NEBExpress Ni-NTA 磁珠的结合能力会因靶标和反应条件的不同而有很大差异。此产品的结合能力（≥ 7.5 mg/ml）通过从添加有 his 标签目的蛋白的粗细胞裂解物中进行模拟纯化确定。据报道，大多数商业化 IMAC 吸附剂的结合能力高达 40 mg/mL。然而，这些值指的是分离出的纯蛋白或合成混合物中的结合能力，对于从复杂来源中分离目的蛋白的结合能力一般较低。

• 参考文献

  1. Bolanos-Garcia et al (2006). BBA. 1760, 1304-1313.
  2. Samuelson, J (2016). Purifying Recombinant His-Tagged Proteins. Genetic Engineering & Biotechnology News. 26-27.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. NEBExpress^® Ni-NTA Magnetic Beads Typical Reaction Protocol
  2. Quick Start Protocol for NEBExpress^® Ni-NTA Magnetic Beads
  3. His-tag removal from protein using TEV Protease

• 应用实例

  • NEBExpress^® Cell-free E. coli Protein Synthesis System

工具 & 资源

• 选择指南

  • Purification Beads, Columns and Resins

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Which E. coli strain do you recommend to reduce contaminating proteins?
  2. The recovery of the His-tagged target protein is low relative to contaminant proteins. Should I add more NEBExpress^® Ni-NTA Magnetic Beads to improve recovery of my target protein?
  3. How can I reduce contaminating proteins in my Ni-NTA His-tag protein purification?
  4. My purification failed and/or why is my yield lower than expected?
  5. How can I remove imidazole from a protein sample?
  6. What is the minimum elution volume that should be used?
  7. Why is there is so much target protein in the column flow through?
  8. Why is there variability in my high throughput assay?
  9. Should the crude extract be diluted with lysis buffer to increase the volume for the binding step?
  10. What is a typical protocol for lysing cells?
  11. What are the recommendations for pH based elution, as opposed to imidazole?
  12. What are to the advantages of performing purification under denaturing conditions?