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产品信息
SNAP-tag 是用于蛋白研究的新型工具，能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子或经修饰的表面。SNAP-tag 是一种基于哺乳动物 O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（AGT）的蛋白。SNAP-tag 的底物是苄基嘌呤和苄基嘧啶的衍生物。在固定化反应中，SNAP-捕获磁珠的苄基部分被替换，与SNAP-tag 形成共价结合。
该体系包括两个步骤：亚克隆并表达与 SNAP-tag 融合的目的蛋白；使用 SNAP-捕获磁珠捕获和固定化该融合蛋白。
如有更大量的需求，可通过 NEB 的 OEM/Bulks 部门购买定制大包装产品。更多信息请联系 [email protected]。
- 产品类别:
- Snap Capture Products,
- Proteome Analysis Products,
- Protein Labeling Products
- 应用:
- Pull Down Assays,
- Protein Labeling Snap Clip,
- Cell Imaging
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产品组分信息
本产品提供以下试剂或组分：
NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度 -
S9145S 4 SNAP-Capture Magnetic Beads S9145SVIAL 4 2 x 1 ml Not Applicable
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特性和用法
需要但不提供的材料
- 含有作为 SNAP-tag 融合物表达的待固定蛋白质的蛋白质样本
- 磁性分离器
- 固定化和漂洗缓冲液
结合容量
使用 500 µl 大肠杆菌（含表达 SNAP-内含肽-几丁质结合域融合蛋白的质粒）粗提取物平衡 SNAP-捕获磁珠（20 µl），并在 25℃ 温育 1 小时，然后漂洗，切割并洗脱 SNAP-内含肽-CBD 融合蛋白。结合能力确定为每毫升床体积的目的蛋白 ≥1 mg。
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- 6 孔磁性分离架
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注意事项
- 磁珠贮存：请勿冷冻 SNAP-捕获磁珠。将未使用的磁珠贮存于 4℃ 。如贮存得当，磁珠可保持稳定至少两年。
- 妥善贮存和处理 SNAP-tag 融合蛋白，对于在固定化反应前保持 SNAP-tag 的活性至关重要。
- SNAP-tag 融合蛋白的纯化应在固定化反应之前，但固定化反应也可在非纯化蛋白溶液中进行，包括细胞裂解物。
- 向 SNAP-tag 融合蛋白的贮存缓冲液中加入 1 mM DTT。蛋白样本应贮存于 -20℃，如需长期贮存，请置于 -80℃。在 0℃ 以上处理样本时，应最大限度减少处理步骤：在即将使用前才解冻 SNAP-tag 蛋白样本，并将它们放在冰上直到进行固定化反应。
- 如果某一特定融合蛋白需要使用不含还原剂的缓冲液，请在标记反应前最大限度减少该蛋白在 4℃ 以上温度下的处理步骤。
- SNAP-tag 本身兼容多种缓冲液。缓冲液的选择应取决于目的蛋白对缓冲液的要求。推荐使用以下贮存缓冲液成分，尤其是在冷冻蛋白材料时：pH 7.0 – 8.0 之间，单价盐（例如氯化钠）50 mM – 250 mM 之间，并含有至少 1 mM DTT。如需要，可添加非离子洗涤剂，但应避免离子洗涤剂，因其会降低 SNAP-tag 的活性。冷冻贮存时添加甘油（通常为 20% v/v）对许多蛋白都有好处。
- 固定化的 SNAP-tag 融合蛋白应在 4℃ 贮存。可添加叠氮化钠至终浓度 2 mM，以防止细菌滋生。该条件下，固定化蛋白在 2 到 6℃ 下可保持稳定数月，具体取决于目的蛋白的稳定性。请勿冷冻 SNAP 捕获磁珠。
- SNAP-tag 融合蛋白通过共价键与 SNAP-捕获磁珠连接。因此，固定化蛋白与磁珠不可逆地结合在一起。但尽可能保持 SNAP-tag 融合蛋白的功能稳定性非常重要。我们建议在 4℃ 下处理和贮存固定化融合蛋白，在即将使用前才对其进行准备并且尽可能小心地进行操作。
操作说明、说明书 & 用法
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操作说明
- Use SNAP-Capture Magnetic Beads (S9145)
工具 & 资源
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选择指南
- Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP
FAQs & 问题解决指南
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FAQs
- Cellular Imaging and Analysis FAQs
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问题解决指南
- Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide