上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
产品信息
一种用于手动或自动少量分离和纯化多组氨酸标签(His 标签)融合蛋白的亲和介质。使用 Ni-NTA(镍-次氨基三乙酸)磁珠用于固定化金属亲和色谱法(IMAC)纯化蛋白时,无论是未变性或变性条件下,均可有效结合并纯化不溶性蛋白质、聚集在包涵体中的蛋白质、或具有隔离聚组氨酸亲和标记的三级结构的蛋白。被磁珠结合的 His 标签蛋白质可用于 pull-down 实验中捕获与其相互作用的蛋白质。
如有更大量的需求,可通过 NEB 的 OEM/Bulks 部门购买定制大包装产品。更多信息请联系 [email protected]。
- 产品类别:
- Nickel Purification (His-tag),
- Affinity Purification Products,
- Magnetic Beads and Racks Products,
Protein Purification Products
- 应用:
- MBP Affinity Tag,
- Fusion Protein Cleavage,
- Pull Down Assays,
- His-tagged Protein Expression & Purification,
- Affinity Purification & Expression Tags,
- Protein Purification,
- Protein Analysis Tools,
High-throughput cloning and automation solutions
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产品组分信息
本产品提供以下试剂或组分:
NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度 -
S1423S 4 NEBExpress® Ni-NTA Magnetic Beads S1423SVIAL 4 1 x 1 ml 10 % 2X IMAC Buffer B1076SVIAL 4 1 x 30 ml 2 X 2M Imidazole B1077SVIAL 4 1 x 2 ml 2 M
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S1423L 4 NEBExpress® Ni-NTA Magnetic Beads S1423SVIAL 4 5 x 1 ml 10 % 2X IMAC Buffer B1076SVIAL 4 5 x 30 ml 2 X 2M Imidazole B1077LVIAL 4 1 x 10 ml 2 M
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特性和用法
贮存溶液
20% Ethanol
支持介质
大小在 20-100 μm 的琼脂糖基超顺磁球形微粒。
结合容量
因纯化靶标不同而异,通常 1 ml 柱床体积结合 ≥ 7.5 mg His 标签融合蛋白。
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优势和特性
Features
- 在未变性或者变性条件下分离及纯化 His 标签融合蛋白,因为 IMAC 兼容各种条件,包括含有蛋白变性剂和洗涤剂时。
- 具有高特异性 His 标签蛋白结合能力,可与多种表达体系结合且纯度 > 95%。
- NTA 通过四个配位点牢固地结合金属离子,从而减少镍离子浸出。
- 可与常用的细胞裂解试剂和多种缓冲液添加剂一起使用。
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注意事项
- 请勿冷冻。
- 请勿贮存在含咪唑的缓冲液中。
- 多种大肠杆菌蛋白均能结合固定化金属亲和基质,亲和性由中到高。最常见的污染物包括 SlyD(28kDa)、GlmS(67kDa)、ArnA(74kDa)和碳酸酐酶(25 kDa)(1)。可以将 NiCo21(DE3)(NEB# C2529H)作为表达宿主,然后使用几丁质磁珠(NEB# E8036)(2)来进行第二步的结合,以去除 Ni-NTA 洗脱组分中的上述污染物。
- 蛋白产量和纯度取决于重组融合蛋白的表达水平、构象和溶解度特征。为了获得最佳结果,请先进行小量试验以估计每种 His 标签蛋白的表达水平并确定其溶解度。
- 请避免使用蛋白酶抑制剂或其它含螯合剂(如 EDTA)或强还原剂(如 DTT 或 β-巯基乙醇)的添加剂,它们会影响 NEBExpress™ Ni-NTA 磁珠的性能。
- 多组氨酸标签一般不会影响生物蛋白功能,或引起免疫反应,但如需切割 His 标签,推荐使用 TEV 蛋白酶(NEB# P8112)。
- NEBExpress™ NEBExpress Ni-NTA 磁珠的结合能力会因靶标和反应条件的不同而有很大差异。此产品的结合能力(≥ 7.5 mg/ml)通过从添加有 his 标签目的蛋白的粗细胞裂解物中进行模拟纯化确定。据报道,大多数商业化 IMAC 吸附剂的结合能力高达 40 mg/mL。然而,这些值指的是分离出的纯蛋白或合成混合物中的结合能力,对于从复杂来源中分离目的蛋白的结合能力一般较低。
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参考文献
- Bolanos-Garcia et al (2006). BBA. 1760, 1304-1313.
- Samuelson, J (2016). Purifying Recombinant His-Tagged Proteins. Genetic Engineering & Biotechnology News. 26-27.
操作说明、说明书 & 用法
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操作说明
- NEBExpress® Ni-NTA Magnetic Beads Typical Reaction Protocol
- Quick Start Protocol for NEBExpress® Ni-NTA Magnetic Beads
- His-tag removal from protein using TEV Protease
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应用实例
- NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System
工具 & 资源
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选择指南
- Purification Beads, Columns and Resins
FAQs & 问题解决指南
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FAQs
- Which E. coli strain do you recommend to reduce contaminating proteins?
- The recovery of the His-tagged target protein is low relative to contaminant proteins. Should I add more NEBExpress® Ni-NTA Magnetic Beads to improve recovery of my target protein?
- How can I reduce contaminating proteins in my Ni-NTA His-tag protein purification?
- My purification failed and/or why is my yield lower than expected?
- How can I remove imidazole from a protein sample?
- What is the minimum elution volume that should be used?
- Why is there is so much target protein in the column flow through?
- Why is there variability in my high throughput assay?
- Should the crude extract be diluted with lysis buffer to increase the volume for the binding step?
- What is a typical protocol for lysing cells?
- What are the recommendations for pH based elution, as opposed to imidazole?
- What are to the advantages of performing purification under denaturing conditions?