产品信息

β-N-乙酰氨基己糖苷酶 _f 是 β-N-乙酰氨基己糖苷酶（1）和麦芽糖结合蛋白融合表达的重组蛋白。具有与 β-N-乙酰氨基葡糖苷酶相同的活性。β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 _f 可催化水解寡糖末端 β-D-N-乙酰氨基半乳糖及氨基葡糖残基。β-N-乙酰氨基己糖苷酶 _f 可用于去除 O-GlcNAc（丝氨酸/苏氨酸上的 N-乙酰氨基葡糖苷酶）（4）。

底物特异性：

重点

• 表观遗传学应用：O-GlcNac（连接丝氨酸或苏氨酸的 N-乙酰氨基己糖苷酶）是核蛋白功能的重要调节因子。β-N-乙酰氨基己糖苷酶 _f 可去除转录因子、组蛋白、RNA 结合蛋白等中的 O-GlcNAc。

产品来源

克隆自褶皱链霉菌（Streptomyces plicatus），在 E. coli 中过表达。

产品类别:

Exoglycosidases Products

应用:

Glycan Sequencing,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0721S     -20       β-N–Acetylhexosaminidasef P0721SVIAL -20 1 x 0.1 ml 5,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指 10 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol GalNAcβ1-4Galβ1-4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 β-D-N-乙酰氨基半乳糖水解所需要的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  50 mM NaCl
  20 mM Tris-HCl
  5 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  75°C for 10 minutes

  分子量

  理论上的: 100000 Da

  末端单糖

  • N-乙酰氨基半乳糖及 N-乙酰氨基葡糖残基

  单位活性检测条件

  在 10 µl 1X GlycoBuffer 1 反应体系中，将两倍稀释的 β-N-乙酰氨基己糖苷酶 _f 与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（3）。

• 参考文献

  1. Robbins, P. et al. (1992). Gene. 111, 69-76.
  2. Guan, C. and Wong, S. New England Biolabs.. Unpublished observation
  3. Wong-Madden, S.T. and Landry D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.
  4. Magnelli, P.E. et al Methods Molecular Biology. 801, 189-211.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for β-N-Acetylhexosaminidasef (P0721)

• 使用指南

  • Glycobiology Unit Conversion Chart

• 应用实例

  • Analysis of a Fusion Protein using the Protein Deglycosylation Mix II and Mass Spectrometry

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. How much exoglycosidase should be used?
  2. Do detergents inhibit exoglycosidases/endoglycosidases?
  3. What is a good positive control for β-N-Acetylhexosaminidase_f?
  4. What are Glycosidases and their uses?
  5. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
  6. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  ßpNP-GlcNAc 是 Hexf 的阳性对照底物。

  1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。

产品信息

β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 是一种具有高度特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖非还原性末端 β-N-乙酰氨基葡糖残基。

特异性

详细特异性
β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 能够有效地切割二分支型 β-N-乙酰氨基葡糖苷酶残基。

产品来源

该酶克隆自肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae），在 E. coli 中表达。

产品类别:

Exoglycosidases Products,

Proteome Analysis Products

应用:

Expression Systems,

Glycan Sequencing,

Protein Digestion,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0744S     4       β-N-Acetylglucosaminidase S P0744SVIAL 4 1 x 0.025 ml 4,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
  P0744L     4       β-N-Acetylglucosaminidase S P0744LVIAL 4 1 x 0.125 ml 4,000 units/ml   GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol GlcNAcβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc-7-amino-4-methylcoumarin（AMC）中超过 95% 的末端非还原型 β-N-乙酰氨基葡糖水解所需要的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 1
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 1
  5 mM CaCl₂
  50 mM sodium acetate
  (pH 5.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  50 mM NaCl
  20 mM Tris-HCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  否

  分子量

  实际: 125000 Da

  单位活性检测条件

  在 10 μl 1X GlycoBuffer 1 中，将两倍稀释的 β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

• 注意事项

  1. 如需更大反应体积，可按比例扩大反应体系。
  2. 酶切底物不同，所需糖苷外切酶的量也不同。在 10–25 μl 的反应体系中，1 μg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的起始量范围为 1–2 μl。如果酶切不完全，可让反应过夜。
  3. β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 不能热失活。

• 参考文献

  1. Wong-Madden, S. T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Typical Reaction Conditions for β-N-Acetylglucosaminidase S (P0744)

• 应用实例

  • Analysis of a Fusion Protein using the Protein Deglycosylation Mix II and Mass Spectrometry
  • Detailed Characterization of Antibody Glycan Structure using the N-Glycan Sequencing Kit

工具 & 资源

• Web 工具

  • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What are Glycosidases and their uses?
  2. What is the difference between β-N-Acetylglucosaminidase and β-N-Acetylglucosaminidase S (NEB# P0744)?
  3. Can I use β-N-Acetylglucosaminidase S in a cocktail with Endo H/H_f or PNGase F?
  4. What is a good positive control for β-N-Acetylglucosaminidase S?
  5. Can I use β-N-Acetylglucosaminidase S in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
  6. Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
  7. What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
  8. Do detergents inhibit glycosidases?
  9. How much exoglycosidase should be used?
  10. How much exoglycosidase should be used?

• 实验技巧

  • 反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。
  • 1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。
  • pNP-GlcNAc 是 β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 的阳性对照底物。
  • β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 不是普通的 ß-己糖苷酶，而是一种具有高度特异性的糖苷外切酶，催化水解寡糖的末端非还原型 ß-N-乙酰氨基葡糖（ß-GlcNAc）残基的所有键。
  • β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 能够有效地切割二分支型 β-N-乙酰氨基葡糖残基。
  • β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 不能热失活。