上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
产品信息
特异性
详细特异性
β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 能够有效地切割二分支型 β-N-乙酰氨基葡糖苷酶残基。
产品来源
该酶克隆自肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae),在 E. coli 中表达。
- 产品类别:
- Exoglycosidases Products,
- Proteome Analysis Products
- 应用:
- Expression Systems,
- Glycan Sequencing,
- Protein Digestion,
- Recombinant Glycoprotein Expression,
Glycoprotein Analysis
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产品组分信息
本产品提供以下试剂或组分:
NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度 -
P0744S 4 β-N-Acetylglucosaminidase S P0744SVIAL 4 1 x 0.025 ml 4,000 units/ml GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
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P0744L 4 β-N-Acetylglucosaminidase S P0744LVIAL 4 1 x 0.125 ml 4,000 units/ml GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
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特性和用法
单位定义
1 单位指 10 μl 反应体系中,37℃ 条件下,1 小时内将 1 nmol GlcNAcβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc-7-amino-4-methylcoumarin(AMC)中超过 95% 的末端非还原型 β-N-乙酰氨基葡糖水解所需要的酶量。
反应条件
1X GlycoBuffer 1
Incubate at 37°C1X GlycoBuffer 1
5 mM CaCl2
50 mM sodium acetate
(pH 5.5 @ 25°C)贮存溶液
50 mM NaCl
20 mM Tris-HCl
1 mM EDTA
pH 7.5 @ 25°C热失活
否
分子量
实际: 125000 Da
单位活性检测条件
在 10 μl 1X GlycoBuffer 1 中,将两倍稀释的 β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况(1)。
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注意事项
- 如需更大反应体积,可按比例扩大反应体系。
- 酶切底物不同,所需糖苷外切酶的量也不同。在 10–25 μl 的反应体系中,1 μg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时,酶的起始量范围为 1–2 μl。如果酶切不完全,可让反应过夜。
- β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 不能热失活。
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参考文献
- Wong-Madden, S. T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.
操作说明、说明书 & 用法
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操作说明
- Typical Reaction Conditions for β-N-Acetylglucosaminidase S (P0744)
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应用实例
- Analysis of a Fusion Protein using the Protein Deglycosylation Mix II and Mass Spectrometry
- Detailed Characterization of Antibody Glycan Structure using the N-Glycan Sequencing Kit
工具 & 资源
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Web 工具
- Glycan Analyzer
FAQs & 问题解决指南
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FAQs
- What are Glycosidases and their uses?
- What is the difference between β-N-Acetylglucosaminidase and β-N-Acetylglucosaminidase S (NEB# P0744)?
- Can I use β-N-Acetylglucosaminidase S in a cocktail with Endo H/Hf or PNGase F?
- What is a good positive control for β-N-Acetylglucosaminidase S?
- Can I use β-N-Acetylglucosaminidase S in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
- Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
- What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
- Do detergents inhibit glycosidases?
- How much exoglycosidase should be used?
- How much exoglycosidase should be used?
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实验技巧
- 反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。
- 1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时,酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。
- pNP-GlcNAc 是 β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 的阳性对照底物。
- β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 不是普通的 ß-己糖苷酶,而是一种具有高度特异性的糖苷外切酶,催化水解寡糖的末端非还原型 ß-N-乙酰氨基葡糖(ß-GlcNAc)残基的所有键。
- β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 能够有效地切割二分支型 β-N-乙酰氨基葡糖残基。
- β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 S 不能热失活。