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Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |

Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |
 

NEBNext® Q5 热启动超保真 PCR 预混液是独创的 Q5 DNA 聚合酶热启动 NEBNext 剂型。在所有的 NEBNext Ultra 试剂盒中，均含有此剂型，用于 DNA 和 RNA 文库制备。

NEBNext Ultra II Q5 预混液（NEB #M0544）现已商售，它能够进一步提高文库扩增的一致性，即使在 GC 富集区域依然表现优异。

这两种预混液中均含有 Q5 超保真 DNA 聚合酶，它是一种具备热稳定性的新型 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，并且融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d 结构域。Q5 还具有最优异的保真度（比 Taq DNA 聚合酶高 280 倍），错配率极低。

这款便捷的 2X 预混液包含 dNTP、Mg++ 以及专有缓冲液，仅需加入引物和 DNA 模板，即可稳健扩增。加入热启动适配体后，可以更方便地在室温下建立反应体系。

覆盖深度与未扩增文库的相关性
Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |
使用 NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液进行文库扩增来对扩增的均一性进行评价。Y 轴表示以 hg19 为参考基因组，每 10 kb 的平均覆盖深度；X 轴表示 PCR-Free 文库的 reads 数。使用 NEBNext Ultra DNA 文库制备试剂盒（NEB #E7370）制备文库，并在 HiSeq® 2500 上进行测序，测序结果以 hg19 为参考基因组进行比对（Bowtie 2.1.0）、重复标记（Picard 1.56）以及向下抽样至 420M reads（Picard 1.56）。使用 Bedtools（2.19.1）统计 hg19 每个 10 kb 区间上的 reads，再将碱基 reads 除以间隔长度（10 kb）来计算平均覆盖度。
NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液可将 GC 偏好性降至最低
Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |
未经 PCR 扩增的人类（IMR-90）或大肠杆菌 K12 基因组 DNA 文库和使用 NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液进行扩增的相应文库，同时在 Illumina MiSeq® 上测序。GC 偏差图已生成，X 轴为每 100 bp 的 GC 含量（%）。标准化后的覆盖度由蓝色圆圈表示，参考序列的 GC 含量（%）由红线表示，碱基质量由绿线表示。与 PCR-free 文库相比，使用 NEBNext 热启动超保真 PCR 预混液扩增的文库中也可以观察到类似的 GC 偏差。

反应条件
NEBNext Q5 热启动超保真PCR 预混液、DNA 模板和 0.5 μM 到 1.25 μM 的引物（视样品加入量而定），总反应体积为 50 μl。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带 Q5 DNA 聚合酶基因。

产品类别:
Q5® High-Fidelity DNA Polymerases Products,
Master Mixes Products,
Next Generation Sequencing Library Preparation Products

应用:
Polymerases for NGS Library Preparation,
Hot Start PCR,
Fast PCR,

Specialty PCR,
Routine PCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0543S     -20    
        NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix M0543SVIAL -20 1 x 1.25 ml Not Applicable
    • M0543L     -20    
        NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix M0543SVIAL -20 5 x 1.25 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    热失活

    否

  • 优势和特性

    应用特性

    • 二代测序文库扩增
    • 超保真 PCR
    • 难扩增片段
    • 高通量 PCR

  • 相关产品

    相关产品

    • NEBNext® Ultra 连接模块
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1（8 x 12 种双端 Index 引物）
    • NEBNext 多样本接头引物试剂盒 3（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 4（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒（96 种单端 Index 引物）

  • 注意事项

    1. To ensure optimal performance, themaster mix should be thawed and resuspendedprior to use. Stability testing using up to 30 freeze/thaw cycles has shown no negative effect onmaster mix performance. The NEBNext Q5 HotStart HiFi PCR Master Mix may be liquid at –20°C.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for a PCR reaction using NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix (M0543)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What’s New About NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    2. What types of beads can be used with NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    3. Is NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix the same as the Q5® Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix (M0494)?
    4. Is NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix the same as NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541)?
    5. Is NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix the same as NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541), or Q5 Hot Start High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0494)?
    6. Do I need to make any changes to the cycling conditions for my NGS library amplification I have previously been using with Phusion High-Fidelity PCR Master Mix?
    7. How many cycles of PCR should I perform with NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    8. Are the DNA products produced by NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix blunt-ended or do they have a single base 3’ overhang?
    9. What do I do if I see precipitation in the NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    10. What are the advantages of using NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    11. Will NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix incorporate dUTPs?

Hot-Start Gene Taq 热启动基因Taq酶

发表于由

Hot-Start Gene Taq

热启动基因Taq酶

品牌：Nippon Gene
CAS No.：
储存条件：-20℃
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

 等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

315-07043

 – 250U×4 – 咨询 – –


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

Hot-Start Gene Taq NT 热启动Taq NT

发表于由

Hot-Start Gene Taq NT

热启动Taq NT

品牌：Nippon Gene
CAS No.：
储存条件：-20℃
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

 等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

315-07521

 – 50units – 咨询 – –


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

许多有校对功能的聚合酶来自古细菌家族 B型 DNA 聚合酶，在遇到 DNA 模板中的尿嘧啶碱基时停止复制(Wardle, J. et al. (2008) Nucleic Acids Res. 36 (3), 705-711)。Q5U 在尿嘧啶结合域含有突变，能够读取和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板。该特征可用于扩增重亚硫酸氢盐转化、脱氨基、或受损 DNA，用于防止 PCR 体系中携带污染（与 dUTP 和 UDG 一起使用），以及用于 USER 克隆方法。

Q5U 是一种热启动聚合酶，含有在室温下抑制聚合酶活性的独特适配体，可在经典 PCR 条件下达到最佳扩增。

图 1：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶的常见应用 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

古细菌家族 B 型聚合酶可以掺入/耐受多种修饰的核苷酸，但在遇到尿嘧啶和次黄嘌呤时会停止扩增。Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶是一种经过改造的 Q5 超保真 DNA 聚合酶，可有效地整合 dUTP 并扩增含尿嘧啶的模板。由 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶的常见应用如上图所示。

图 2：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶实现重亚硫酸氢盐转化 DNA 的优异扩增

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

使用 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶（Q5U）、Phusion U 热启动 DNA 聚合酶（P）和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 试剂盒（K）扩增重亚硫酸氢盐转化的人基因组 DNA 靶标。扩增子名称和片段长度标注在电泳胶上方。每 25 μl 反应物含有 12 ng 重亚硫酸氢盐转化的 DNA（Qiagen）。所有反应均根据制造商的推荐使用 35 个循环进行，通过微流体芯片 LabChip 分析展现。

图 3：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶能够高效扩增石蜡包埋正常肺样品 DNA 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

石蜡包埋正常肺样品 DNA（Biochain）。扩增片段长度标注在电泳胶上方，每个 25 μl 反应物含有 18 ng FFPE DNA（Biochain），循环条件与该样品类型的推荐一致，通过微流体芯片 LabChip 分析展现。

图 4：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶能够高效扩增酶促脱氨的 DNA 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

使用 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶（Q5U）、Phusion U 热启动 DNA 聚合酶（P）和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 试剂盒（K）扩增酶促脱氨（APOBEC）的基因组 DNA 靶标。扩增子名称和片段长度标注在电泳胶上方。 每个 50μl 反应物含有 12 ng 酶促脱氨基的 DNA。 所有反应均根据制造商的推荐使用 35 个循环进行，并通过微流体芯片 LabChip 分析展现。

图 5: USER® 克隆流程 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

在 USER 克隆中，通过 PCR 扩增出 DNA 靶分子和克隆载体，两个片段的同源序列设计为 8-12 个碱基。PCR 引物以 5’A 起始，并在同源区 3’端含有一个脱氧尿嘧啶（dU），可以设计为多片段组装，核苷酸替换，插入和/或缺失。我们建议使用 GeneDesign 软件为 USER 连接点设计引物。建议每种引物终浓度为 0.5 μM 即可得到最佳结果。

图 6：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶与 Taq 热启动 DNA 聚合酶相比，可更高效准确的用于USER克隆

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

使用 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶和热启动 Taq DNA 聚合酶做 USER 克隆，将 3 kb lacZ 基因连接到 pET21a 载体骨架中。菌落总数（A）和蓝色菌落的百分比（B）证明：有 Q5U 的反应展现了更高的组装效率和更高的准确度。使用 Sanger 测序进一步验证组装准确性，结果显示：普通 Taq 酶组装的 4 个蓝色克隆中有许多点突变，但使用 Q5U 的 4 个蓝色克隆中没有突变（C）。“X”表示用普通 Taq 酶产生的克隆中发现的点突变数量，与以前的研究结果同样证明了 lacZ 的高突变耐受性。(Barnes, W. M. (1992) Gene, 112, 29-35.) 

产品类别:
Q5® High-Fidelity DNA Polymerases Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
Applications of USER® and Thermolabile USER II Enzymes,
Bisulfite Sequencing,
DNA Methylation Analysis,

USER® Cloning,
PCR,
Epigenetics,
High-Fidelity PCR,
Multiplex PCR,

DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0515S     -20    
        Q5U® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase M0515SVIAL -20 1 x 0.05 ml 2,000 units/ml
        Q5U®  Reaction Buffer B9037SVIAL -20 1 x 1.5 ml 5 X
    • M0515L     -20    
        Q5U® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase M0515LVIAL -20 1 x 0.25 ml 2,000 units/ml
        Q5U®  Reaction Buffer B9037SVIAL -20 4 x 1.5 ml 5 X

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. PCR Using Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase (NEB #M0515)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How do I enable carryover contamination prevention with Q5U?
    2. Can I use Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase to amplify bisulfite-treated DNA? 
    3. What are the general recommendations for designing primers for bisulfite-treated/deaminated DNA?
    4. Can I use Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase for USER® cloning methods?
    5. Can I use Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase to amplify FFPE DNA? 
    6. What ends will my PCR products have?
    7. What are Hot Start and WarmStart® polymerases and when would I use them?
    8. How should I determine the appropriate annealing temperature for my reaction?
    9. What are the properties of this polymerase (fidelity, product ends, max amplicon, modified base incorporation, etc.)?
    10. My results are not as expected. Where can I find troubleshooting help?
    11. What are the differences between the numerous Q5® Polymerase products available?
    12. When and how should I use the Q5® High GC Enhancer?
    13. Can I use Q5 Reaction Buffer with this enzyme?
    14. How can I optimize my product yield using Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase?