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Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |

Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |
 

NEBNext® Q5 热启动超保真 PCR 预混液是独创的 Q5 DNA 聚合酶热启动 NEBNext 剂型。在所有的 NEBNext Ultra 试剂盒中，均含有此剂型，用于 DNA 和 RNA 文库制备。

NEBNext Ultra II Q5 预混液（NEB #M0544）现已商售，它能够进一步提高文库扩增的一致性，即使在 GC 富集区域依然表现优异。

这两种预混液中均含有 Q5 超保真 DNA 聚合酶，它是一种具备热稳定性的新型 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，并且融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d 结构域。Q5 还具有最优异的保真度（比 Taq DNA 聚合酶高 280 倍），错配率极低。

这款便捷的 2X 预混液包含 dNTP、Mg++ 以及专有缓冲液，仅需加入引物和 DNA 模板，即可稳健扩增。加入热启动适配体后，可以更方便地在室温下建立反应体系。

覆盖深度与未扩增文库的相关性
Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |
使用 NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液进行文库扩增来对扩增的均一性进行评价。Y 轴表示以 hg19 为参考基因组，每 10 kb 的平均覆盖深度；X 轴表示 PCR-Free 文库的 reads 数。使用 NEBNext Ultra DNA 文库制备试剂盒（NEB #E7370）制备文库，并在 HiSeq® 2500 上进行测序，测序结果以 hg19 为参考基因组进行比对（Bowtie 2.1.0）、重复标记（Picard 1.56）以及向下抽样至 420M reads（Picard 1.56）。使用 Bedtools（2.19.1）统计 hg19 每个 10 kb 区间上的 reads，再将碱基 reads 除以间隔长度（10 kb）来计算平均覆盖度。
NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液可将 GC 偏好性降至最低
Next® Q5® 热启动超保真 PCR 预混液 |
未经 PCR 扩增的人类（IMR-90）或大肠杆菌 K12 基因组 DNA 文库和使用 NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液进行扩增的相应文库，同时在 Illumina MiSeq® 上测序。GC 偏差图已生成，X 轴为每 100 bp 的 GC 含量（%）。标准化后的覆盖度由蓝色圆圈表示，参考序列的 GC 含量（%）由红线表示，碱基质量由绿线表示。与 PCR-free 文库相比，使用 NEBNext 热启动超保真 PCR 预混液扩增的文库中也可以观察到类似的 GC 偏差。

反应条件
NEBNext Q5 热启动超保真PCR 预混液、DNA 模板和 0.5 μM 到 1.25 μM 的引物（视样品加入量而定），总反应体积为 50 μl。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带 Q5 DNA 聚合酶基因。

产品类别:
Q5® High-Fidelity DNA Polymerases Products,
Master Mixes Products,
Next Generation Sequencing Library Preparation Products

应用:
Polymerases for NGS Library Preparation,
Hot Start PCR,
Fast PCR,

Specialty PCR,
Routine PCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0543S     -20    
        NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix M0543SVIAL -20 1 x 1.25 ml Not Applicable
    • M0543L     -20    
        NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix M0543SVIAL -20 5 x 1.25 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    热失活

    否

  • 优势和特性

    应用特性

    • 二代测序文库扩增
    • 超保真 PCR
    • 难扩增片段
    • 高通量 PCR

  • 相关产品

    相关产品

    • NEBNext® Ultra 连接模块
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1（8 x 12 种双端 Index 引物）
    • NEBNext 多样本接头引物试剂盒 3（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 4（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒（96 种单端 Index 引物）

  • 注意事项

    1. To ensure optimal performance, themaster mix should be thawed and resuspendedprior to use. Stability testing using up to 30 freeze/thaw cycles has shown no negative effect onmaster mix performance. The NEBNext Q5 HotStart HiFi PCR Master Mix may be liquid at –20°C.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for a PCR reaction using NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix (M0543)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What’s New About NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    2. What types of beads can be used with NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    3. Is NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix the same as the Q5® Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix (M0494)?
    4. Is NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix the same as NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541)?
    5. Is NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix the same as NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541), or Q5 Hot Start High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0494)?
    6. Do I need to make any changes to the cycling conditions for my NGS library amplification I have previously been using with Phusion High-Fidelity PCR Master Mix?
    7. How many cycles of PCR should I perform with NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    8. Are the DNA products produced by NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix blunt-ended or do they have a single base 3’ overhang?
    9. What do I do if I see precipitation in the NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    10. What are the advantages of using NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix?
    11. Will NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix incorporate dUTPs?

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

许多有校对功能的聚合酶来自古细菌家族 B型 DNA 聚合酶，在遇到 DNA 模板中的尿嘧啶碱基时停止复制(Wardle, J. et al. (2008) Nucleic Acids Res. 36 (3), 705-711)。Q5U 在尿嘧啶结合域含有突变，能够读取和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板。该特征可用于扩增重亚硫酸氢盐转化、脱氨基、或受损 DNA，用于防止 PCR 体系中携带污染（与 dUTP 和 UDG 一起使用），以及用于 USER 克隆方法。

Q5U 是一种热启动聚合酶，含有在室温下抑制聚合酶活性的独特适配体，可在经典 PCR 条件下达到最佳扩增。

图 1：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶的常见应用 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

古细菌家族 B 型聚合酶可以掺入/耐受多种修饰的核苷酸，但在遇到尿嘧啶和次黄嘌呤时会停止扩增。Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶是一种经过改造的 Q5 超保真 DNA 聚合酶，可有效地整合 dUTP 并扩增含尿嘧啶的模板。由 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶的常见应用如上图所示。

图 2：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶实现重亚硫酸氢盐转化 DNA 的优异扩增

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

使用 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶（Q5U）、Phusion U 热启动 DNA 聚合酶（P）和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 试剂盒（K）扩增重亚硫酸氢盐转化的人基因组 DNA 靶标。扩增子名称和片段长度标注在电泳胶上方。每 25 μl 反应物含有 12 ng 重亚硫酸氢盐转化的 DNA（Qiagen）。所有反应均根据制造商的推荐使用 35 个循环进行，通过微流体芯片 LabChip 分析展现。

图 3：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶能够高效扩增石蜡包埋正常肺样品 DNA 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

石蜡包埋正常肺样品 DNA（Biochain）。扩增片段长度标注在电泳胶上方，每个 25 μl 反应物含有 18 ng FFPE DNA（Biochain），循环条件与该样品类型的推荐一致，通过微流体芯片 LabChip 分析展现。

图 4：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶能够高效扩增酶促脱氨的 DNA 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

使用 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶（Q5U）、Phusion U 热启动 DNA 聚合酶（P）和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 试剂盒（K）扩增酶促脱氨（APOBEC）的基因组 DNA 靶标。扩增子名称和片段长度标注在电泳胶上方。 每个 50μl 反应物含有 12 ng 酶促脱氨基的 DNA。 所有反应均根据制造商的推荐使用 35 个循环进行，并通过微流体芯片 LabChip 分析展现。

图 5: USER® 克隆流程 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

在 USER 克隆中，通过 PCR 扩增出 DNA 靶分子和克隆载体，两个片段的同源序列设计为 8-12 个碱基。PCR 引物以 5’A 起始，并在同源区 3’端含有一个脱氧尿嘧啶（dU），可以设计为多片段组装，核苷酸替换，插入和/或缺失。我们建议使用 GeneDesign 软件为 USER 连接点设计引物。建议每种引物终浓度为 0.5 μM 即可得到最佳结果。

图 6：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶与 Taq 热启动 DNA 聚合酶相比，可更高效准确的用于USER克隆

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

使用 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶和热启动 Taq DNA 聚合酶做 USER 克隆，将 3 kb lacZ 基因连接到 pET21a 载体骨架中。菌落总数（A）和蓝色菌落的百分比（B）证明：有 Q5U 的反应展现了更高的组装效率和更高的准确度。使用 Sanger 测序进一步验证组装准确性，结果显示：普通 Taq 酶组装的 4 个蓝色克隆中有许多点突变，但使用 Q5U 的 4 个蓝色克隆中没有突变（C）。“X”表示用普通 Taq 酶产生的克隆中发现的点突变数量，与以前的研究结果同样证明了 lacZ 的高突变耐受性。(Barnes, W. M. (1992) Gene, 112, 29-35.) 

产品类别:
Q5® High-Fidelity DNA Polymerases Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
Applications of USER® and Thermolabile USER II Enzymes,
Bisulfite Sequencing,
DNA Methylation Analysis,

USER® Cloning,
PCR,
Epigenetics,
High-Fidelity PCR,
Multiplex PCR,

DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0515S     -20    
        Q5U® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase M0515SVIAL -20 1 x 0.05 ml 2,000 units/ml
        Q5U®  Reaction Buffer B9037SVIAL -20 1 x 1.5 ml 5 X
    • M0515L     -20    
        Q5U® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase M0515LVIAL -20 1 x 0.25 ml 2,000 units/ml
        Q5U®  Reaction Buffer B9037SVIAL -20 4 x 1.5 ml 5 X

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. PCR Using Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase (NEB #M0515)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How do I enable carryover contamination prevention with Q5U?
    2. Can I use Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase to amplify bisulfite-treated DNA? 
    3. What are the general recommendations for designing primers for bisulfite-treated/deaminated DNA?
    4. Can I use Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase for USER® cloning methods?
    5. Can I use Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase to amplify FFPE DNA? 
    6. What ends will my PCR products have?
    7. What are Hot Start and WarmStart® polymerases and when would I use them?
    8. How should I determine the appropriate annealing temperature for my reaction?
    9. What are the properties of this polymerase (fidelity, product ends, max amplicon, modified base incorporation, etc.)?
    10. My results are not as expected. Where can I find troubleshooting help?
    11. What are the differences between the numerous Q5® Polymerase products available?
    12. When and how should I use the Q5® High GC Enhancer?
    13. Can I use Q5 Reaction Buffer with this enzyme?
    14. How can I optimize my product yield using Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase?

Next® 超保真 2X PCR 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Next® 超保真 2X PCR 预混液 |

Next® 超保真 2X PCR 预混液 |

NEBNext 超保真 2X PCR 预混液是含有 Q5 DNA 聚合酶的非热启动型 NEBNext 初始剂型。在适用于 Illumina 的第一代 NEBNext 标准流程文库制备试剂盒和适用于 Ion Torrent 的 NEBNext 文库制备试剂盒中，也包含此剂型。

NEBNext Ultra II Q5 预混液（NEB #M0544）现已商售，它能够进一步提高文库扩增的一致性，即使在 GC 富集区域依然表现优异。

这两种预混液中均含有 Q5 超保真 DNA 聚合酶，它是一种具备热稳定性的新型 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，并且融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d 结构域。Q5 还具有最优异的保真度（比 Taq DNA 聚合酶高 280 倍），错配率极低。

NEBNext 超保真 2X PCR 预混液包含 dNTP、Mg++ 以及专有缓冲液，仅需加入引物和 DNA 模板，即可稳健扩增。

图 1：已知低覆盖度区域中的不同 DNA 聚合酶的对比分析。
Next® 超保真 2X PCR 预混液 |
使用人 IMR90 基因组 DNA 为样本制备文库，并根据 Index 将其拆分为单个样品进行文库扩增。使用 Phusion 超保真 DNA 聚合酶、KAPA HiFi™ HotStart ReadyMix 或 NEBNext® 超保真 2X PCR 预混液，进行 8 个循环的 PCR 扩增。使用 Illumina HiSeq® 2000 对文库进行测序。为了纠正每个文库有效 reads 数目的微小差异，从每个数据中随机抽取 1.8 亿个已对比到基因组上的 reads，平均覆盖度约为 6X。图中展示了每个文库中覆盖到人类基因组（Aird et. al. Genome Biology, 2011）不同低覆盖度区域的 reads 数。在三种酶/预混液的测试结果中，NEBNext 超保真 2X PCR 预混液展现最优性能。
图 2：不同 DNA 聚合酶的保真度对比。
Next® 超保真 2X PCR 预混液 |
在基于 PCR 的突变筛查试验中使用 lacZ 方法（改良自 Kermekchiev 等人在 2003 年提出的方法），对 Taq DNA 聚合酶（在标准 Taq 缓冲液中）、KAPA HiFi HotStart ReadyMix 和 NEBNext 超保真 2X PCR 预混液的保真度同时进行测定。结果（n ≥ 2）为与 KAPA HiFi HotStart ReadyMix 的相对比值。NEBNext 超保真 2X PCR 预混液中的 Q5 超保真聚合酶的保真度水平是 KAPA HiFi HotStart ReadyMix 中的聚合酶的 10 倍以上。
图 3：针对不同 GC 含量（%）的基因组，DNA 聚合酶的对比分析。
Next® 超保真 2X PCR 预混液 |
使用 NEBNext 超保真 2X PCR 预混液、Phusion 超保真 PCR 预混液（提供 HF 缓冲液）或 KAPA HiFi HotStart PCR ReadyMix，对流感嗜血杆菌、沼泽红假单胞菌及人类基因组 DNA 文库进行扩增，并在 Illumina® HiSeq 2000 上进行测序。GC 覆盖度图已生成，X 轴为每 100 bp 的 GC 含量（%）。标准化覆盖度由蓝色圆圈表示，GC 含量（%）的窗口由红线表示，GC 含量（%）的碱基质量由绿线表示。NEBNext 超保真 2X PCR 预混液大幅降低了三个基因组 DNA 样品的偏嗜性。
图 4：不同 GC 含量（%）下不同 DNA 聚合酶的对比分析。
Next® 超保真 2X PCR 预混液 |
使用 Index 引物和 NEBNext 超保真 2X PCR 预混液、Phusion® 超保真 PCR 预混液（提供 HF 缓冲液）或 KAPA HiFi HotStart PCR ReadyMix，对人类基因组 DNA 文库进行扩增，并在 Illumina® HiSeq™ 2000 上进行测序。从每个数据集中随机选择相同数量的 reads，并根据 GC 含量绘制 reads 百分比图。NEBNext 超保真 2X PCR 预混液和 KAPA HiF HotStart ReadyMix 非常接近预期的读取频率（灰色阴影），Phusion 则不是。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带 Q5 超保真 DNA 聚合酶基因。

产品类别:
Q5® High-Fidelity DNA Polymerases Products

应用:
Polymerases for NGS Library Preparation,
Fast PCR,
High-Fidelity PCR,

Specialty PCR,
Routine PCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0541S     -20    
        NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix M0541SVIAL -20 1 x 1.25 ml 2 X
    • M0541L     -20    
        NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix M0541SVIAL -20 5 x 1.25 ml 2 X

  • 特性和用法

    热失活

    否

  • 优势和特性

    应用特性

    • 二代测序文库扩增
    • 超保真 PCR
    • 难扩增片段
    • 高通量 PCR

  • 相关产品

    相关产品

    • NEBNext® 末端修复模块
    • NEBNext® 加 dA 尾模块
    • NEBNext® 快速连接模块
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1（8 x 12 种双端 Index 引物）
    • NEBNext 多样本接头引物试剂盒 3（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 4（12 种单端 Index 引物）
    • NEBNext® 多样本接头引物试剂盒（96 种单端 Index 引物）

  • 注意事项

    1. To ensure optimal performance, the master mix should be thawed and resuspended prior to use. Stability testing using up to 20 freeze/thaw cycles has shown no negative effect on master mix performance. The NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix may be liquid at -20°C.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. PCR Using NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are the advantages of using NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix?
    2. Is NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix the same as the Q5® High-Fidelity Master Mix?
    3. Do I need to make any changes to the cycling conditions for my NGS library amplification I have previously been using with Phusion High-Fidelity PCR Master Mix?
    4. How many cycles of PCR should I perform with NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix?
    5. Will NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix incorporate dUTPs?
    6. Are the DNA products produced NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix blunt-ended or do they have a single base 3’ overhang?

  • 问题解决指南

    • PCR Troubleshooting Guide

Q5® 超保真 2X 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Q5® 超保真 2X 预混液 |

 

Q5 超保真 2X 预混液采用方便的预混液形式，且高效、高保真。Q5 超保真 2X 预混液是一种热稳定的高保真 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，并且融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d 结构域，能够进行稳定的 DNA 扩增。Q5 超保真 DNA 聚合酶的错配率不到 Taq DNA 聚合酶的二百八十分之一，是克隆的理想选择，可用于长片段或难扩增片段的扩增。这款便捷的预混液剂型浓度为 2X。 本预混液包含 dNTP、Mg++ 以及应用广泛的专有缓冲液，不论模板 GC 含量多少，仅需加入引物和 DNA 模板即可进行高效扩增。终浓度为 1X（推荐使用）时，Q5 超保真预混液含有 2 mM Mg++。 Q5 超保真 DNA 聚合酶不同于常规的较低保真度的 PCR 酶。强烈建议使用 NEB Tm Calculator，确定给定引物组的最佳退火温度。

Q5® 超保真 2X 预混液 |
Q5 超保真 2X 预混液，一种剂型即可对多种靶标进行高效扩增。

Q5® 超保真 2X 预混液 |
使用 Q5 超保真 2X 预混液扩增从低到高不同 GC 含量的人基因组 DNA。所有反应均为 30 个循环，并通过 LabChip® 微流控分析技术观察结果。

Q5® 超保真 2X 预混液 |

产品来源

大肠杆菌菌株，携带 Q5 超保真 DNA 聚合酶基因。

产品类别:
Q5® High-Fidelity DNA Polymerases Products,
Master Mixes Products

应用:
Long Range PCR,
Fast PCR,
High-Fidelity PCR,

Multiplex PCR,
Specialty PCR,
Routine PCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR,
PCR,

Fast Cloning: Accelerate your cloning workflows with reagents from NEB

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0492S     -20    
        Q5® High-Fidelity 2X Master Mix M0492SVIAL -20 2 x 1.25 ml 2 X
    • M0492L     -20    
        Q5® High-Fidelity 2X Master Mix M0492SVIAL -20 10 x 1.25 ml 2 X

  • 特性和用法

    热失活

    否

  • 优势和特性

    应用特性

    • 超保真 PCR
    • 克隆
    • 长片段或难扩增片段的扩增
    • 高通量 PCR

  • 相关产品

    相关产品

    • dNTP 混合液
    • dNTP 套装
    • Q5® 超保真 DNA 聚合酶
    • Q5® 热启动超保真 2X 预混液
    • Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶
    • Q5® 反应缓冲液套装

  • 注意事项

    1. A precipitate (most noticeable after the first 1–2 freeze/thaw cycles) is not uncommon. To ensure optimal performance, the master mix should be thawed and resuspended prior to use. Stability testing using up to 15 freeze/thaw cycles has shown no negative effect on master mix performance.
    2. Product specifications for individual components in the Q5 High-Fidelity 2X Master Mix are available separately.

  • 参考文献

    1. Anastassia Voronova Erin Coyne, Ashraf Al Madhoun, Joel V. Fair, Neven Bosiljcic, Catherine St-Louis, Grace Li, Sherry Thurig, Valerie A. Wallace, Nadine Wiper-Bergeron, and Ilona S. Skerjanc. (2013). Hedgehog Signaling Regulates MyoD Expression and Activity. J Biol Chem. 288(6), 4389–4404. PubMedID: PMC3567689
    2. Lieve Naesens, Luke Guddat, Dianne Keough, André B.P. van Kuilenburg, Judith Meijer, Johan Vande Voorde and Jan Balzarini (2013). ROLE OF HUMAN HYPOXANTHINE GUANINE 
      PHOSPHORIBOSYLTRANSFERASE IN ACTIVATION 
      OF THE ANTIVIRAL AGENT T-705 (FAVIPIRAVIR). Molecular Pharmacology Fast Forward. 87247,
    3. Hicham Bouabe, Klaus Okkenhaug (2013). A Protocol for Construction of Gene Targeting Vectors and Generation of Homologous Recombinant Embryonic Stem Cells. Methods in Molecular Biology. 1064, 337-354.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Q5® High-Fidelity 2X Master Mix

  • 使用指南

    • Activity of Restriction Enzymes in PCR Buffers
    • Guidelines for PCR Optimization with Thermophilic DNA Polymerases

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Polymerase Selection Chart

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are the advantages of using Q5® High-Fidelity DNA Polymerase?
    2. What are the differences between the numerous Q5® Polymerase products available?
    3. My results are not as expected. Where can I find troubleshooting help?
    4. What ends will my PCR products have?
    5. What does exonuclease activity mean for a DNA polymerase?
    6. What are the properties of this polymerase (fidelity, product ends, max amplicon, modified base incorporation, etc.)?
    7. Does Q5® High-Fidelity DNA Polymerase exhibit a strand displacement activity?
    8. How should I determine the appropriate annealing temperature for my reaction?
    9. What should the final primer concentration be in my PCR?
    10. When and how should I use the Q5® High GC Enhancer?
    11. There is a precipitate in the bottom of the buffer tube. Is this normal?

  • 问题解决指南

    • PCR Troubleshooting Guide