Next® 超保真 2X PCR 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Next® 超保真 2X PCR 预混液 |

Next® 超保真 2X PCR 预混液 |

NEBNext 超保真 2X PCR 预混液是含有 Q5 DNA 聚合酶的非热启动型 NEBNext 初始剂型。在适用于 Illumina 的第一代 NEBNext 标准流程文库制备试剂盒和适用于 Ion Torrent 的 NEBNext 文库制备试剂盒中，也包含此剂型。

NEBNext Ultra II Q5 预混液（NEB #M0544）现已商售，它能够进一步提高文库扩增的一致性，即使在 GC 富集区域依然表现优异。

这两种预混液中均含有 Q5 超保真 DNA 聚合酶，它是一种具备热稳定性的新型 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，并且融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d 结构域。Q5 还具有最优异的保真度（比 Taq DNA 聚合酶高 280 倍），错配率极低。

NEBNext 超保真 2X PCR 预混液包含 dNTP、Mg++ 以及专有缓冲液，仅需加入引物和 DNA 模板，即可稳健扩增。

图 1：已知低覆盖度区域中的不同 DNA 聚合酶的对比分析。
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使用人 IMR90 基因组 DNA 为样本制备文库，并根据 Index 将其拆分为单个样品进行文库扩增。使用 Phusion 超保真 DNA 聚合酶、KAPA HiFi™ HotStart ReadyMix 或 NEBNext® 超保真 2X PCR 预混液，进行 8 个循环的 PCR 扩增。使用 Illumina HiSeq® 2000 对文库进行测序。为了纠正每个文库有效 reads 数目的微小差异，从每个数据中随机抽取 1.8 亿个已对比到基因组上的 reads，平均覆盖度约为 6X。图中展示了每个文库中覆盖到人类基因组（Aird et. al. Genome Biology, 2011）不同低覆盖度区域的 reads 数。在三种酶/预混液的测试结果中，NEBNext 超保真 2X PCR 预混液展现最优性能。
图 2：不同 DNA 聚合酶的保真度对比。
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在基于 PCR 的突变筛查试验中使用 lacZ 方法（改良自 Kermekchiev 等人在 2003 年提出的方法），对 Taq DNA 聚合酶（在标准 Taq 缓冲液中）、KAPA HiFi HotStart ReadyMix 和 NEBNext 超保真 2X PCR 预混液的保真度同时进行测定。结果（n ≥ 2）为与 KAPA HiFi HotStart ReadyMix 的相对比值。NEBNext 超保真 2X PCR 预混液中的 Q5 超保真聚合酶的保真度水平是 KAPA HiFi HotStart ReadyMix 中的聚合酶的 10 倍以上。
图 3：针对不同 GC 含量（%）的基因组，DNA 聚合酶的对比分析。
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使用 NEBNext 超保真 2X PCR 预混液、Phusion 超保真 PCR 预混液（提供 HF 缓冲液）或 KAPA HiFi HotStart PCR ReadyMix，对流感嗜血杆菌、沼泽红假单胞菌及人类基因组 DNA 文库进行扩增，并在 Illumina® HiSeq 2000 上进行测序。GC 覆盖度图已生成，X 轴为每 100 bp 的 GC 含量（%）。标准化覆盖度由蓝色圆圈表示，GC 含量（%）的窗口由红线表示，GC 含量（%）的碱基质量由绿线表示。NEBNext 超保真 2X PCR 预混液大幅降低了三个基因组 DNA 样品的偏嗜性。
图 4：不同 GC 含量（%）下不同 DNA 聚合酶的对比分析。
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使用 Index 引物和 NEBNext 超保真 2X PCR 预混液、Phusion® 超保真 PCR 预混液（提供 HF 缓冲液）或 KAPA HiFi HotStart PCR ReadyMix，对人类基因组 DNA 文库进行扩增，并在 Illumina® HiSeq™ 2000 上进行测序。从每个数据集中随机选择相同数量的 reads，并根据 GC 含量绘制 reads 百分比图。NEBNext 超保真 2X PCR 预混液和 KAPA HiF HotStart ReadyMix 非常接近预期的读取频率（灰色阴影），Phusion 则不是。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带 Q5 超保真 DNA 聚合酶基因。

产品类别:
Q5® High-Fidelity DNA Polymerases Products

应用:
Polymerases for NGS Library Preparation,
Fast PCR,
High-Fidelity PCR,

Specialty PCR,
Routine PCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0541S     -20    
        NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix M0541SVIAL -20 1 x 1.25 ml 2 X
    • M0541L     -20    
        NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix M0541SVIAL -20 5 x 1.25 ml 2 X

  • 特性和用法

    热失活

    否

  • 优势和特性

    应用特性

    • 二代测序文库扩增
    • 超保真 PCR
    • 难扩增片段
    • 高通量 PCR

  • 相关产品

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  • 注意事项

    1. To ensure optimal performance, the master mix should be thawed and resuspended prior to use. Stability testing using up to 20 freeze/thaw cycles has shown no negative effect on master mix performance. The NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix may be liquid at -20°C.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. PCR Using NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are the advantages of using NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix?
    2. Is NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix the same as the Q5® High-Fidelity Master Mix?
    3. Do I need to make any changes to the cycling conditions for my NGS library amplification I have previously been using with Phusion High-Fidelity PCR Master Mix?
    4. How many cycles of PCR should I perform with NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix?
    5. Will NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix incorporate dUTPs?
    6. Are the DNA products produced NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix blunt-ended or do they have a single base 3’ overhang?

  • 问题解决指南

    • PCR Troubleshooting Guide