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产品信息
phi29-XT RCA(滚环扩增)试剂盒包含了灵敏高效实现滚环扩增(RCA)所需的全部试剂,这是一种等温扩增方法,通过产生环状序列的长重复拷贝来连续扩增环状 DNA。该试剂盒的特点是包含 phi29-XT DNA 聚合酶,该酶是经基因工程改造过的聚合酶,相较于野生型 phi29 DNA 聚合酶,可在更短反应时间内获得高产量的产物,并改善热稳定性和灵敏度。该试剂盒还包含 dNTPs 和核酸外切酶抗性的随机引物(含有硫代磷酸酯键),确保了扩增环状 DNA 序列的通用性。起始材料可以是纯化的环状 DNA(单链或双链),或者直接使用液体培养基培养物、琼脂平板菌落和甘油菌,而不需要额外进行 DNA 提取。RCA 产物可直接用于下游应用,如 DNA 测序、细胞游离 DNA 富集、无细胞蛋白表达和 DNA 生物传感器。
图 1:phi29-XT RCA(滚环扩增)试剂盒概述
phi29-XT RCA(滚环扩增)试剂盒(NEB #E1603)是一种快速、使用简单、用途广泛的试剂盒,该试剂盒中包含使用随机引物混合物进行滚环扩增(RCA)所需的全部试剂。该试剂盒可从纯化的环状 DNA 或细菌细胞等多种起始样本获得高得率的 DNA 产物。该试剂盒应用广泛,可用于 DNA 测序、细胞游离 DNA 富集、无细胞蛋白表达和 DNA 生物传感器。
图 2:在高温下,相较于野生型 phi29 DNA 聚合酶,phi29-XT DNA 聚合酶在更短的时间内能获得更多的产物
以 0.1 pg pUC19 质粒(NEB #N3041)作为起始样本,在指定温度下进行 RCA 反应 2小时,随后在 65℃ 下加热失活 10 分钟,平行重复反应三次。所有反应均含有 1 mM dNTPs 和 50 µM 核酸外切酶抗性随机引物。野生型 phi29 反应使用 10 单位 phi29 DNA 聚合酶(NEB #M0269)、1X phi29 DNA 聚合酶反应缓冲液和 0.1 mg/mL 重组白蛋白,phi29-XT 反应使用 1X phi29-XT DNA 聚合酶和 1X phi29-XT 反应缓冲液。使用 Quant-iT® PicoGreen® dsDNA 试剂测定反应产量(点),并求得平均值(线)以确定各个反应温度下的产量。野生型 phi29 DNA 聚合酶的反应温度在 30℃ 和 37℃ 之间,然而 phi29-XT DNA 聚合酶在 42℃ 能获得更多的产物。
CoA 文件包含单个批次产品的储存温度、有效期和质控,这些文件的命名规则如下: [货号]_[规格]_[版本]_[Lot#]
E1603L_v1_10183353
E1603S_v1_10183508
E1603S_v1_10190498
E1603S_v1_10191379
E1603S_v1_10194814
E1603S_v1_10198092
E1603L_v1_10202800
E1603L_v1_10212167
E1603S_v1_10213283
E1603S_v1_10221689
E1603S_v1_10234116
SDS
以下 SDS 文件可以帮助您安全地使用该产品
phi29-XT DNA Polymerase
phi29-XT Reaction Buffer
Exonuclease-Resistant Random Primers
dNTP 混合液
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