产品信息

TriDye™ 超低分子量 DNA Ladder 是一种预混合的即用型分子量 Marker，内含三种示踪染料。在非变性琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺电泳过程中，这些染料可用作监测迁移进度的可视化辅助。
 
DNA Ladder 包含 13 个大小在 10 bp 到 700 bp 范围的条带，其中大部分条带是使用限制性内切酶消化专有质粒所得。50 bp 和 300 bp 条带的强度更高，可用作参照带。此 ladder 适合用于非变性聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶电泳。

• 推荐凝胶百分比范围：4% TBE 琼脂糖，10% 到 20% TBE 聚丙烯酰胺

 

电泳过程中 TriDye 染料的迁移*

凝胶	二甲苯蓝	溴酚蓝	橙黄 G
4% 琼脂糖	150 bp	20 bp	5 bp
5% 琼脂糖	100 bp	15 bp	5 bp
6% PAGE	400 bp	50 bp	15 bp
10% PAGE	200 bp	30 bp	10 bp
4% – 20% PAGE	300 bp	20 bp	10 bp
20% PAGE	200 bp	20 bp	10 bp

*上述迁移速度均为近似值，会随迁移条件（TAE/TBE 缓冲液、缓冲液 pH 值、电压等）发生变化。

 

产品类别:

DNA Markers & Ladders Products

应用:

DNA Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  N0558S     4       TriDye™ Ultra Low Range DNA Ladder N0558SVIAL 4 1 x 1.25 ml 100 µg/ml

• 特性和用法

  碱基

  Fragment	Mass (ng)	bp
  1	49	700
  2	46	650
  3	28	400
  4	63	300
  5	28	200
  6	11	150
  7	14	100
  8	21	75
  9	70	50
  10	10	35
  11	16	25
  12	19	15
  13	125	10

  有效大小范围

  10bp to 700bp

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  10 mM EDTA
  10% Glycerol
  0.006% Xylene Cyanol
  0.006% bromophenol blue
  0.06% Orange G
  pH 8 @ 25°C

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• 注意事项

  1. DNA 制备：
     双链 DNA 以适当的限制性内切酶完全消化，经苯酚抽提，再在储存缓冲液中平衡。

  2. 上样建议：

     • 对于聚丙烯酰胺凝胶，每个泳道上样 5 µl（0.5 µg）的 TriDye™ 超低分子量 DNA Ladder。
     • 对于琼脂糖凝胶，每个泳道上样 10 µl（1 µg）的 TriDye™ 超低分子量 DNA Ladder。
  3. 用法建议：
     • 在琼脂糖凝胶上使用 DNA Ladder 时，建议在电泳胶和迁移缓冲液中使用 0.5 µg/ml 的溴化乙锭，以便清晰地显示最小的 DNA 片段。此外，建议灌制的凝胶厚度不要超过 5 mm，因为太厚的话，较小的 DNA 片段可能更易于扩散，并且更难有效染色。
     • 建议在琼脂糖凝胶和电泳缓冲液中使用 TBE 缓冲液，因为 TBE 缓冲液能更好地显示较小的 DNA 片段。使用 TAE 缓冲液时，15 bp 以下的片段可能无法有效分离。
     • 不建议使用 GelRed® 或 SYBR® 染料作为预制凝胶染料，因为这些染料可能会影响最小的 DNA 片段的迁移，导致条带异常。建议仅将这些染料作为电泳后染料。为了清晰地显示所有 DNA 片段，可能需要进行优化。某些条带的强度可能有所变化。
     • 如果使用宽电泳梳（10 mm）进行琼脂糖凝胶电泳，建议每个凝胶泳道上样 15 µl（1.5 µg）的 TriDye™ 超低分子量 DNA Ladder，以便有效地显示最小的 DNA 片段。
     • 为了清晰显示所有条带，建议尽量使用紫外线直接照射电泳胶，而不使用灌制托盘。即使是透紫外线托盘，也会使 DNA 片段在紫外线照射下变得模糊。
  4. 用法说明：
     • 在琼脂糖凝胶上使用 DNA Ladder 时，建议在电泳胶和迁移缓冲液中使用 0.5 µg/ml 的溴化乙锭，以便清晰地显示最小的 DNA 片段。此外，建议灌制的凝胶厚度不要超过 5 mm，因为太厚的话，较小的 DNA 片段可能更易于扩散，并且更难有效染色。
     • 建议在琼脂糖凝胶和电泳缓冲液中使用 TBE 缓冲液，因为 TBE 缓冲液能更好地显示较小的 DNA 片段。使用 TAE 缓冲液时，15 bp 以下的片段可能无法有效分离。
     • 不建议使用 GelRed® 或 SYBR® 染料作为预制凝胶染料，因为这些染料可能会影响最小的 DNA 片段的迁移，导致条带异常。建议仅将这些染料作为电泳后染料。为了清晰地显示所有 DNA 片段，可能需要进行优化。某些条带的强度可能有所变化。
     • 如果使用宽电泳梳（10 mm）进行琼脂糖凝胶电泳，建议每个凝胶泳道上样 15 µl（1.5 µg）的 TriDye™ 超低分子量 DNA Ladder，以便有效地显示最小的 DNA 片段。
     • 为了清晰显示所有条带，建议尽量使用紫外线直接照射电泳胶，而不使用灌制托盘。即使是透紫外线托盘，也会使 DNA 片段在紫外线照射下变得模糊。

• 参考文献

  1. Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. (1989). Molecular cloning: A Laboratory Manual, (2nd ed.). 10.51-10.67. Cold Spring Harbor Laboratory Press.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Protocol for loading TriDye™ Ultra Low Range DNA Ladder (NEB #N0558)

工具 & 资源

• 选择指南

  • DNA Markers & Ladders Selection Tool

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. How much of the TriDye™ Ultra Low Range DNA Ladder should I load?
  2. Why do I only see 12 bands in the Ultra Low DNA Ladder?
  3. Should I use TBE or TAE buffer for my agarose gels?
  4. Can I use the TriDye™ Ultra Low Range DNA Ladder with GelRed^® or SYBR^® Dyes?
  5. Which polyacrylamide gels can I use?
  6. Why are some of the bands in the DNA Ladder fainter at the bottom of the gel?
  7. Why is the 10bp fragment fainter than the other fragments?