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LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

LunaScript 反转录 SuperMix 为经过优化的预混液，可用于第一链 cDNA 合成、扩增子测序，以及两步法 RT-qPCR。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶，可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂，以保护模板 RNA 免受降解。LunaScript 反转录 SuperMix 混合液含有随机六聚体和 poly-dT 引物，可均匀覆盖整个 RNA 靶标。此外，混合液还包含蓝色染料，可在两步法 RT-qPCR 起到示踪作用。总 RNA 起始量从高达 1 µg 到低至单拷贝 RNA，均能得到稳定、线性和灵敏的检测结果。

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）（NEB #E3025）是经过优化的预混液产品，包含除引物外的第一链 cDNA 合成所需的所有组分，适用于 RT-PCR、RNA-seq 及其它应用。该混合液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容，让 cDNA 合成更灵活。更多信息请点击此处。

与 LunaScript 试剂盒版本（NEB #E3010）相比，此 LunaScript 产品不含无核酶水和 No-RT 对照混合液。更多信息如下：

图 1：LunaScript 产品比较

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |

图 2：一步法和两步法 RT-qPCR 实验产品选择

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |

图 3：LunaScript® 反转录 SuperMix 混合液在两步法 RT-qPCR 实验中展现了出色的灵敏度、线性关系和重复性

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
在 20 μl 反应体系中，使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 混合液，在标准反应条件下（25℃/2 分钟，55℃/10 分钟，95℃/1 分钟）将 RNA 转录为 cDNA。然后将 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）和 1 μl cDNA 作为模板，对 cDNA 进行 qPCR 定量；每种起始量浓度做三个重复。

 

A. 将梯度稀释的 Jurkat 总 RNA（1 μg – 1 pg）反转录为 cDNA，然后通过 qPCR 对 β-actin 靶标进行定量。

 

B. ERCC（External RNA Controls Consortium）对照 mix 1 RNA 包含 50 – 5×109 拷贝的 ERCC00130（~10 ng – 10 fg），反转录为 cDNA 后通过 qPCR 进行定量。

图 4：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液可覆盖长转录本

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
设计八对引物覆盖整个 15.2 kb HERC1 转录本。在 20 μl 反应体系中，使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 混合液，在标准反应条件下（25℃/2 分钟，55℃/10 分钟，95℃/1 分钟），将 Jurkat 总 RNA（1 μg – 1 ng）反转录为 cDNA。然后将 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB #M3003）和 1 μl cDNA 产物作为模板，对 cDNA 覆盖度进行 qPCR 评估；每个靶标的起始量浓度均做重复。
图 5：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液对 RNA 靶标展现了出色的线性检测能力

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
根据各厂商产品说明书使用市售的 cDNA 合成混合液，将 1 μg – 100 pg 人（Jurkat）总 RNA 反转录为 cDNA。然后通过 8 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR，对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）或 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB＃M3004）进行 qPCR 检测。从以下方面评估了反应结果：扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90 – 110%，ΔCq ≥ 3）。

 

详细了解此“Dots in Boxes”可视化荧光定量评价方法。

图 6：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液的第一链 cDNA 合成时间最短，仅需 13 分钟。

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
不同厂家的 cDNA 合成方案比较。LunaScript 反转录 SuperMix 混合液所需的反应时间最短，并且可以耐受高温，降低了 RNA 复杂二级结构的影响。
图 7：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液在室温条件下稳定性极佳

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
LunaScript 反转录 SuperMix 混合液与其它市售产品在 25℃ 条件下放置 15 天，之后根据各厂商产品说明书，将 1 μg – 100 pg 人（Jurkat）总 RNA 反转录成为 cDNA。然后通过 8 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR，对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）进行 qPCR 检测。从以下方面评估了反应结果：扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90 – 110%，ΔCq ≥ 3）。

 

详细了解此“Dots in Boxes”可视化荧光定量评价方法。

产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
Reverse Transcription (cDNA Synthesis)

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E3010S     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010SVIAL -20 1 x 0.1 ml 5 X
        No-RT Control Mix M3011SVIAL -20 1 x 0.1 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable
    • E3010L     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010LVIAL -20 1 x 0.4 ml 5 X
        No-RT Control Mix M3011LVIAL -20 1 x 0.4 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 4 x 1.5 ml Not Applicable

  • 相关产品

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    • Luna® 通用 qPCR 预混液
    • Luna® 通用探针法 qPCR 预混液
    • 南极热敏 UDG
    • Monarch® 总 RNA 小量提取试剂盒

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for LunaScript®  RT SuperMix Kit (E3010)
    2. Protocol for Two-step RT-qPCR using the LunaScript® RT SuperMix Kit (NEB #E3010) and the Luna® Universal qPCR Master Mix (NEB #M3003) or Luna Universal Probe qPCR Master Mix (NEB #M3004) 

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE3010

  • 应用实例

    • Facilitating Detection of SARS-CoV-2 Directly from Patient Samples: Precursor Studies with RT-qPCR and Colorimetric RT-LAMP Reagents

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I use RNA samples purified from different storage conditions such as RNALater in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    2. Can I add gene-specific primers in my LunaScript® cDNA synthesis reaction?
    3. Can I set up my cDNA synthesis reaction at room temperature when using the LunaScript® RT SuperMix?
    4. Can I use a shorter incubation time for my cDNA synthesis reaction when using the LunaScript® RT SuperMix?
    5. Can I use LunaScript cDNA products directly in qPCR? How much can I use for detection in a qPCR reaction?
    6. How much RNA template should I use in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    7. How should I store LunaScript® cDNA products?
    8. How should I choose between a one-step RT-qPCR or two-step RT-qPCR approach?
    9. Should I include a No-Reverse Transcriptase (RT) control reaction when setting up my cDNA synthesis reaction?
    10. What qPCR reagents do you recommend for detection of cDNA products?
    11. What temperature should I use for my LunaScript® cDNA synthesis reaction?
    12. Why do I have low cDNA yields?
    13. Will the blue dye in the LunaScript® RT SuperMix interfere with detection?
    14. How do I choose between the first strand cDNA synthesis kits from NEB?
    15. When using LunaScript cDNA products in downstream PCR (i.e., two-step RT-PCR), what volumes and PCR products can be used? 

    16. Can I use LunaScript RT SuperMix in RNA-seq workflows?

       

    17. How do I choose between LunaScript RT SuperMix Kit and ProtoScript first strand cDNA synthesis kits?
    18. Can I use a shorter incubation time for my cDNA synthesis reaction when using the LunaScript® RT Master Mix (Primer-free)? Does longer incubation increase the yield of cDNA?
    19. How do I choose between Induro Reverse Transcriptase and the different LunaScript and ProtoScript products?
    20. How do I know whether my template RNA is of good quality?

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

LunaScript 反转录 SuperMix 为优化的反转录预混液，可用于第一链 cDNA 合成、扩增子测序，以及两步法 RT-qPCR。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶，可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂，以保护模板 RNA 免受降解。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液含有随机六聚体引物，Oligo-dT 引物，可均匀覆盖整个 RNA 靶标。此外，预混液还包含蓝色染料，可在两步法 RT-qPCR 起到示踪作用。样品起始量从高达 1 µg 到低至单拷贝 RNA，均能得到稳健、线性和灵敏的检测结果。

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） (NEB #E3025) 包含除引物外，第一链 cDNA 合成所需的所有组分，适用于 RT-PCR、RNA-seq 及其它应用。该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容，让 cDNA 合成更灵活。更多信息请点击这里。

与 LunaScript 试剂盒版本 (NEB #E3010) 相比，该 LunaScript 预混液版本不含无核酶水和 No-RT 对照。更多信息如下：

图 1：LunaScript 产品比较

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |

图 2：一步法和两步法 RT-qPCR 产品选择

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |

F图 3：LunaScript® SuperMix 反转录预混液在两步法 RT-qPCR 实验中展现了出色的灵敏度、线性关系和重复性
LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
在 20 μl 反应体系中，使用 1 X LunaScript 反转录 SuperMix预混液，在标准反应条件下（25℃/2 分钟，55℃/10 分钟，95℃/1 分钟）将 RNA 反转录为 cDNA。然后使用 1 μl cDNA 作为模板和 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB #M3003）进行 qPCR 定量，每种浓度做三个重复。

A. 将梯度稀释的 Jurkat 总 RNA（1 μg–1 pg）反转录为 cDNA，然后对 β-actin 进行 qPCR 定量。 

B. ERCC 对照（External RNA Controls Consortium）mix1 RNA 包含 50 – 5×109 拷贝的ERCC00130（10 fg–~10 ng），反转录为 cDNA 后进行 qPCR 进行定量。

图 4：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液可覆盖长转录本

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
在标准反应条件（25℃/2 min、55℃/10 min、95℃/1 min）下，20 μl反应体系中，使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 预混液，将 Jurkat 总 RNA (1 μg – 1 ng) 反转录为 cDNA。取 1 μl cDNA 产物做为模板，使用 Luna 通用 qPCR 预混液 (NEB #M3003) 和覆盖 HERC1 整个 15.2 kb 转录本的 8 对引物，对 cDNA 覆盖度进行 qPCR 评估。结果显示：所有扩增靶标在每个上样浓度的重复实验中，均有良好扩增。
图 5：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液对 RNA 靶标展现了出色的线性检测能力

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
使用市售的 cDNA 合成预混液，根据各厂商产品说明书，将 100 pg–1 μg 人（Jurkat）总 RNA 反转录为 cDNA。然后通过 8 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB #M3003）或 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB #M3004）进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq–最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90-110％，ΔCq≥3）。 

 

请登陆了解更多“Dots in Boxes”可视化荧光定量评价方法。

图 6：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液的第一链 cDNA 合成时间最短，仅需 13 分钟。
LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
比较了不同厂家的 cDNA 合成方案。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液需要的反应时间最短，并可以耐受高温，避免了 RNA 复杂二级结构的影响。 
图 7：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液在室温条件下稳定性极佳 
LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
LunaScript 反转录 SuperMix 预混液与其它市售反转录产品在 25℃条件下放置 15 天，之后在说明书推荐反应条件下，以 100 pg–1 μg 人总 RNA (Jurkat) 为模板，反转录成为 cDNA。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB #M3003）对 8 个不同丰度、长度和 GC 含量的靶标进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90-110％，ΔCq≥3）。

 

请登陆了解更多“Dots in Boxes”可视化荧光定量评价方法。

产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
Reverse Transcription (cDNA Synthesis),
DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M3010L     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010LVIAL -20 1 x 0.4 ml 5 X
    • M3010X     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010LVIAL -20 5 x 0.4 ml 5 X
    • M3010E     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010EVIAL -20 1 x 10 ml 5 X

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. LunaScript RT SuperMix Protocol (NEB #M3010)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualM3010

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I use RNA samples purified from different storage conditions such as RNALater in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    2. Can I add gene-specific primers in my LunaScript® cDNA synthesis reaction?
    3. Can I set up my cDNA synthesis reaction at room temperature when using the LunaScript® RT SuperMix?
    4. Can I use a shorter incubation time for my cDNA synthesis reaction when using the LunaScript® RT SuperMix?
    5. Can I use LunaScript cDNA products directly in qPCR? How much can I use for detection in a qPCR reaction?
    6. How much RNA template should I use in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    7. How should I store LunaScript® cDNA products?
    8. How should I choose between a one-step RT-qPCR or two-step RT-qPCR approach?
    9. Should I include a No-Reverse Transcriptase (RT) control reaction when setting up my cDNA synthesis reaction?
    10. What qPCR reagents do you recommend for detection of cDNA products?
    11. What temperature should I use for my LunaScript® cDNA synthesis reaction?
    12. Why do I have low cDNA yields?
    13. Will the blue dye in the LunaScript® RT SuperMix interfere with detection?
    14. How do I choose between the first strand cDNA synthesis kits from NEB?
    15. When using LunaScript cDNA products in downstream PCR (i.e., two-step RT-PCR), what volumes and PCR products can be used? 

    16. Can I use LunaScript RT SuperMix in RNA-seq workflows?

       

    17. How do I choose between LunaScript RT SuperMix Kit and ProtoScript first strand cDNA synthesis kits?
    18. How do I choose between Induro Reverse Transcriptase and the different LunaScript and ProtoScript products?
    19. How do I know whether my template RNA is of good quality?

质控、安全 & 法规

  • 质控分析

    每一新批次的 NEB 产品都要经过质控，以满足指定的质量标准，对特定产品的质量标准和每一批次的检测数据可以通过产品说明表格、COA、产品信息卡或者产品手册进行查阅或下载。关于 NEB 产品质控的详细信息，可从此处查阅。

  • 产品说明与变更通知

    产品说明表包含产品的储存温度、有效期和规格，这些文件的命名规则如下：[货号]_[规格]_[版本]

    • M3010S_L_v1
    • M3010S_L_X_E_v2

  • CoA 文件包含单个批次产品的储存温度、有效期和质控，这些文件的命名规则如下： [货号]_[规格]_[版本]_[Lot#]

    • M3010S_L_v1_0021802
    • M3010L_v1_10150534
    • M3010X_v1_10150532
    • M3010E_v0_10150533
    • M3010L_v2_10157441
    • M3010L_v2_10161042
    • M3010L_v2_10162605
    • M3010L_v2_10165055
    • M3010L_v2_10170219
    • M3010L_v2_10172243
    • M3010L_v2_10174344
    • M3010X_v2_10174491
    • M3010E_v2_10168316
    • M3010L_v2_10175570
    • M3010X_v2_10178239
    • M3010E_v2_10176598
    • M3010X_v2_10178622
    • M3010L_v2_10178623
    • M3010X_v2_10180395
    • M3010L_v2_10184152
    • M3010X_v2_10185446
    • M3010E_v2_10179802
    • M3010L_v2_10187464
    • M3010X_v2_10188138
    • M3010E_v2_10188665
    • M3010X_v2_10192464
    • M3010L_v2_10198155
    • M3010X_v2_10204071
    • M3010X_v2_10213276
    • M3010X_v2_10220037
    • M3010L_v2_10213279
    • M3010E_v2_10226684
    • M3010L_v2_10231229
    • M3010X_v2_10226687

  • SDS

    以下 SDS 文件可以帮助您安全地使用该产品

    • LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液

  • 法律 & 免责声明

    产品及内容受 New England Biolabs, Inc（NEB）所拥有或控制的一项或多项专利、商标和/或版权保护。文中使用商标符号并不一定表明其在出现的国家/地区注册为商标，仅表明已在创始地注册。如将本产品用于特定应用，用户可能需要获取第三方知识产权授权许可。了解更多信息，请邮件咨询 [email protected]。

    本产品仅用于科研。本产品不适用于人类或动物的治疗或诊断。

    New England Biolabs（NEB）致力于开展合乎伦理的科学研究 – 我们坚信，作为科研工作者，我们的工作是提出重要问题，解决这些问题，将有助于维护我们的生活质量和我们所生活的世界。然而，研究必须始终以安全且合乎道德的方式进行。了解更多。

    许可证

    The buyer/user has a non-exclusive license to use the vector for Research Purposes Only. Commercial use of this vector requires a license from New England Biolabs, Inc.

    U.S. Patent No. 5,643,758

    Appln. No. WO2007/120809

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）包含经过优化后的 5X 预混液，以及 cDNA 第一链合成所需的所有组分（引物除外）。该预混液含有具备热稳定性的 Luna 反转录酶，可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂（保护模板 RNA 免受降解）和 dNTP。此外，组分中的蓝色示踪染料可在反转录和下游应用中起到示踪作用。

该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容，让 cDNA 合成更灵活。LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）合成的 cDNA 产物可用于多种下游应用。在实时定量 PCR 中，建议使用混有随机引物及 oligo dT 的混合引物合成 cDNA。与 LunaScript SuperMix 反转录试剂盒（NEB #E3010）一样，无论是 1 μg 总 RNA 还是低拷贝 RNA，该预混液均能提供稳健、线性和灵敏的检测。如需合成长片段或全长 cDNA，则建议使用 oligo dT 引物。仅需 55℃ 温育 10 分钟，LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）即可合成长达 9 kb 的 cDNA 产物。试剂盒还提供 No-RT 对照预混液，可快速建立对照反应体系。

图 1：SuperMix、预混液和 cDNA 合成试剂盒的比较

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） |

图 2：LunaScript 第一链 cDNA 合成时间最短，仅需 13 分钟

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） |

不同厂家的 cDNA 合成方案比较。LunaScript SuperMix 反转录试剂盒和 LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）所需反应时间最短，并可以耐受高温，降低了 RNA 复杂二级结构的影响。

图 3：LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）支持多种下游应用

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） |

通过使用不同的引物（例如：随机引物混合液 d（T）23VN 寡核苷酸或随机六聚体引物），LunaScript 反转录预混液试剂盒合成的 cDNA可适于不同下游应用（例如：RT-qPCR、RT-PCR 和 RNA-seq）。

图 4：在两步法 RT-qPCR 定量中，LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）功效稳健

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） |

A.使用随机引物混合液（NEB #S1330）和 LunaScript 反转录预混液（无引物）对 1 µg 至 100 pg RNA 进行反转录，并进行两步法 RT-qPCR 检测，结果显示：与 LunaScript（NEB #E3010）一致，合成 cDNA 产量均展现出良好的线性度。

B.对于常规转录本，使用 d（T）23VN 引物获得的 cDNA 覆盖度与随机引物混合液一致。但对于长转录本（例如：SMG1），随机引物混合液能更好地覆盖靶基因 5´ 端，右下角图框所示：RT-qPCR 的靶基因位于 SMG1（16 kb）转录本的 5´ 端；与随机引物混合液（随机六聚体引物和 dT 锚定引物的混合物）相比，单独使用 dT 锚定引物 [d（T）23VN] 的 Cq 值延迟。

图 5：在两步法 RT-qPCR 中，LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）性能更优异

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） |

A.根据各厂商产品说明书，使用几种市售第一链 cDNA 合成试剂盒合成 cDNA，所用引物为随产品提供的随机引物。通过 8 个靶基因（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB #M3004）对 cDNA 产物进行 qPCR 检测。从扩增效率和 ΔCq 方面评估了结果，其中 ΔCq 衡量痕量样本检测和无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90 – 110%，ΔCq ≥ 3）。关于该可视化分析方法的详细信息，请在 NEB 官网搜索 Development of a high-throughput data analysis method for quantitative real-time PCR (qPCR)。

B.根据上述 4 个靶基因（两个经典内参基因和两个其它基因）的 Cq 值和上样量绘制曲线。结果显示：与其它商品化试剂盒相比，LunaScript 的 Cq 值最低。

图 6：在常规 PCR 或超保真 PCR 中，LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）能够合成各种长度范围 cDNA

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） |

使用 LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）将 1 µg Jurkat 总 RNA 反转录成 cDNA，引物为 d（T）23VN，使用标准反应条件 55℃ 温育 10 分钟，95℃ 温育 1 分钟。之后使用不同 PCR 扩增试剂对 cDNA 合成产物进行检测。对于 5 kb 以内的常规应用，建议使用 OneTaq 2X 预混液（NEB #M0482）。如需高保真度，建议使用 Q5 热启动超保真 2X 预混液（NEB #M0494）。如需长片段 PCR 扩增有较佳产量，建议使用 LongAmp Taq 2X 预混液（NEB #M0287）（数据未显示）。
 
产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products,
RT-PCR Products,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
RT-PCR,
cDNA Synthesis,
Reverse Transcription (cDNA Synthesis),

RT-PCR & cDNA Synthesis

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E3025S     -20    
         LunaScript® RT Master Mix (Primer-free) M3025SVIAL -20 1 x 0.1 ml 5 X
        No-RT Control Mix (Primer-free) M3026SVIAL -20 1 x 0.1 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable
    • E3025L     -20    
         LunaScript® RT Master Mix (Primer-free) M3025LVIAL -20 1 x 0.4 ml 5 X
        No-RT Control Mix (Primer-free) M3026LVIAL -20 1 x 0.4 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 4 x 1.5 ml Not Applicable

  • 优势和特性

    Features

    • 不含引物的混合液可让用户更灵活地选择引物，以达到 cDNA 合成最佳效果
    • 15 分钟内即可完成第一链 cDNA 合成
    • 提供 No-RT 对照预混液，增加实验可信度
     

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    • OneTaq® 2X 预混液（提供标准缓冲液）
    • OneTaq® 热启动 2X 预混液（提供 GC 缓冲液）
    • LongAmp® Taq 2X 预混液
    • Luna® 通用 qPCR 预混液
    • Luna® 通用探针法 qPCR 预混液

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. LunaScript RT Master Mix Kit Protocols (NEB #E3025)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE3025

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I use RNA samples purified from different storage conditions such as RNALater in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    2. Can I set up my cDNA synthesis reaction at room temperature when using the LunaScript® RT SuperMix?
    3. Can I use LunaScript cDNA products directly in qPCR? How much can I use for detection in a qPCR reaction?
    4. How much RNA template should I use in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    5. How should I store LunaScript® cDNA products?
    6. How should I choose between a one-step RT-qPCR or two-step RT-qPCR approach?
    7. Should I include a No-Reverse Transcriptase (RT) control reaction when setting up my cDNA synthesis reaction?
    8. What qPCR reagents do you recommend for detection of cDNA products?
    9. Why do I have low cDNA yields?
    10. Will the blue dye in the LunaScript® RT SuperMix interfere with detection?
    11. How do I choose between the first strand cDNA synthesis kits from NEB?
    12. When using LunaScript cDNA products in downstream PCR (i.e., two-step RT-PCR), what volumes and PCR products can be used? 
    13. How do I choose primers for cDNA synthesis using LunaScript RT Master Mix (Primer-free)?
    14. Can I use LunaScript RT Master Mix in RNA-seq workflows?
    15. What temperature should I use for my LunaScript® cDNA synthesis reaction?
    16. How do I choose between Induro Reverse Transcriptase and the different LunaScript and ProtoScript products?
    17. How do I know whether my template RNA is of good quality?

  • 问题解决指南

    • Troubleshooting Guide for LunaScript RT Master Mix (Primer-free) Kit (NEB #E3025)

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

在进行 RT-PCR 实验时，LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒为 cDNA 合成和 PCR 扩增提供了简化方案。其中的 5X 反应预混液含有 dNTP，经优化适用于多重靶标检测，且操作便捷。其中的 25X 酶预混液含有 Luna WarmStart 反转录酶和 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶。核酸适配体抑制酶活技术可对上述两种酶活进行双重温控，因此可在室温下建立反应体系，且预混体系可在室温下稳定保存 24 小时。该试剂盒具备强大的多重靶标扩增能力，适用于诊断、病原体检、病毒基因组测序等多种应用（例如：ARTIC SARS-CoV-2 测序方案，每个反应扩增 ~50 个扩增子）。

在单个 RT-PCR 反应中进行多重 RNA 靶标检测和鉴定

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒（NEB #E1555）仅需添加 RNA 模板和基因特异性引物，即可在一次反应中对多个 cDNA 靶标进行合成和扩增。扩增后的 cDNA 产物可通过下游应用进行检测或鉴定，包括：二代测序、DNA 芯片、片段分析、电泳和传统的克隆/测序。

LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒的灵敏度和多重检测性能卓越

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

使用 LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒（NEB #E1555）或 SuperScript IV One-Step RT-PCR System (Thermo Fisher Scientific) 对人脾总 RNA 的 7 个靶标（185 – 776 bp）进行扩增。取 40% 的 RT-PCR 反应产物进行琼脂糖凝胶（2%）电泳检测。LunaScript 使用标准反应条件：引物终浓度为 1 μM，退火时间为 1 分钟。SSIV 使用推荐反应条件无法扩增所有条带，因此还测试了其它关键参数：改变引物浓度和退火时间。结果显示：LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒可成功扩增不同起始量 RNA 模板中的所有 7 个靶标，但 SuperScript IV One-Step RT-PCR System 经调整反应条件，甚至增模板量，都无法扩增所有靶标。

LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒可完成 ARTIC SARS-CoV-2 测序方案

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

使用 LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒和来自 NEB（A）或 IDT（B）ARTIC V3 引物生成扩增子，扩增模板为 1,000 拷贝 SARS-CoV-2 病毒 gRNA（ATCC VR-1986），该模板掺入到 100 ng 通用人类参考 RNA（Thermo Fisher Scientific®，QS0639）中使用。将 cDNA 合成体系分成两份 12.5 μl 反应体系，分别使用引物库 1 和 2 进行扩增。反应条件为：55℃ 20 分钟（反转录），98℃ 1 分钟（RT 灭活/初始变性），之后进行 35 个循环的扩增：95℃ 15 秒，63℃ 5 分钟（退火和延伸）。

使用 NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒 – 含片段化酶（Illumina®）和 1.3 μl 的合并的扩增子的每个样品进行文库构建，使用 MiSeq® 仪器（2X75 bp）进行测序。为每个文库绘制每个扩增子的测序 reads。使用 seqtk（250,000 read pairs）向下抽样 reads 数，并使用 Bowtie 2 比对至 SARS-CoV-2 参考基因组（NCBI，NC_045512）。参考线表示 100 reads 的典型质量阈值。

试剂可在室温下放置长达 24 小时，在此期间 RNA 的检测效果仍然灵敏和稳定

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

使用 LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒（NEB #E1555）对 GAPDH 靶标（570 bp）进行扩增，样品为 0.01 ng – 10 ng 的 Jurkat 总 RNA。反应体系在冰上建立并立即运行（对照）或在热循环前在室温下放置 1、4 或 24 小时。每个温育条件下都设有无模板对照（NTC）反应。结果显示：所有上样量均完成了高度灵敏和特异的靶标扩增，预混体系在室温下放置长达 24 小时后也达到了同样的效果。

LunaScript 与 OneTaq 一步法 RT-PCR 试剂盒的比较

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

 
产品类别:
RT-PCR Products,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
RT-PCR,
cDNA Synthesis,
RT-PCR & cDNA Synthesis

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E1555S     -20    
        LunaScript® Multiplex One-Step RT-PCR Enzyme Mix M1556SVIAL -20 1 x 0.05 ml 25 X
        LunaScript® Multiplex One-Step RT-PCR Reaction Mix M1557SVIAL -20 1 x 0.25 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable
    • E1555L     -20    
        LunaScript® Multiplex One-Step RT-PCR Enzyme Mix M1556LVIAL -20 1 x 0.25 ml 25 X
        LunaScript® Multiplex One-Step RT-PCR Reaction Mix M1557LVIAL -20 1 x 1.25 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 4 x 1.5 ml Not Applicable

  • 优势和特性

    Features

    • 使用 Luna WarmStart 反转录酶和 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶简化了一步法 RT-PCR 方案
    • 高度灵敏：可检测低至 0.01 pg 的人总 RNA
    • 多重检测性能卓越
    • 可在室温下放置长达 24 小时
     

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操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit Protocol (NEB #E1555)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE1555

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I set up my LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR reactions at room temperature?
    2. Can I add random hexamers or oligo (dT) primers to LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR reactions?
    3. Can I reduce the reaction volume in the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR reactions?
    4. How can I determine the annealing temperature for my LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR reactions? 
    5. Can I increase the reverse transcription time beyond the 10 minutes recommended in the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR protocol?
    6. Are the PCR products generated with the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit compatible with a TA cloning system?
    7. What is the lowest RNA input amount recommended for the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit?
    8. What can I do if a particular amplicon failed in a multiplex reaction using the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit?
    9. Can I use the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit to amplify long amplicons? 
    10. Can the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit be used in the ARTIC workflow for RNA viral genome sequencing? 
    11. How do I choose between One-Step RT-PCR and Two-Step RT-PCR protocols?
    12. How do I choose between LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit and OneTaq One-Step RT-PCR Kit (NEB #E5315)?