LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

LunaScript 反转录 SuperMix 为优化的反转录预混液，可用于第一链 cDNA 合成、扩增子测序，以及两步法 RT-qPCR。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶，可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂，以保护模板 RNA 免受降解。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液含有随机六聚体引物，Oligo-dT 引物，可均匀覆盖整个 RNA 靶标。此外，预混液还包含蓝色染料，可在两步法 RT-qPCR 起到示踪作用。样品起始量从高达 1 µg 到低至单拷贝 RNA，均能得到稳健、线性和灵敏的检测结果。

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） (NEB #E3025) 包含除引物外，第一链 cDNA 合成所需的所有组分，适用于 RT-PCR、RNA-seq 及其它应用。该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容，让 cDNA 合成更灵活。更多信息请点击这里。

与 LunaScript 试剂盒版本 (NEB #E3010) 相比，该 LunaScript 预混液版本不含无核酶水和 No-RT 对照。更多信息如下：

图 1：LunaScript 产品比较

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |

图 2：一步法和两步法 RT-qPCR 产品选择

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |

F图 3：LunaScript® SuperMix 反转录预混液在两步法 RT-qPCR 实验中展现了出色的灵敏度、线性关系和重复性
LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
在 20 μl 反应体系中，使用 1 X LunaScript 反转录 SuperMix预混液，在标准反应条件下（25℃/2 分钟，55℃/10 分钟，95℃/1 分钟）将 RNA 反转录为 cDNA。然后使用 1 μl cDNA 作为模板和 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB #M3003）进行 qPCR 定量，每种浓度做三个重复。

A. 将梯度稀释的 Jurkat 总 RNA（1 μg–1 pg）反转录为 cDNA，然后对 β-actin 进行 qPCR 定量。 

B. ERCC 对照（External RNA Controls Consortium）mix1 RNA 包含 50 – 5×109 拷贝的ERCC00130（10 fg–~10 ng），反转录为 cDNA 后进行 qPCR 进行定量。

图 4：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液可覆盖长转录本

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
在标准反应条件（25℃/2 min、55℃/10 min、95℃/1 min）下，20 μl反应体系中，使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 预混液，将 Jurkat 总 RNA (1 μg – 1 ng) 反转录为 cDNA。取 1 μl cDNA 产物做为模板，使用 Luna 通用 qPCR 预混液 (NEB #M3003) 和覆盖 HERC1 整个 15.2 kb 转录本的 8 对引物，对 cDNA 覆盖度进行 qPCR 评估。结果显示：所有扩增靶标在每个上样浓度的重复实验中，均有良好扩增。
图 5：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液对 RNA 靶标展现了出色的线性检测能力

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
使用市售的 cDNA 合成预混液，根据各厂商产品说明书，将 100 pg–1 μg 人（Jurkat）总 RNA 反转录为 cDNA。然后通过 8 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB #M3003）或 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB #M3004）进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq–最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90-110％，ΔCq≥3）。 

 

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图 6：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液的第一链 cDNA 合成时间最短，仅需 13 分钟。
LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
比较了不同厂家的 cDNA 合成方案。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液需要的反应时间最短，并可以耐受高温，避免了 RNA 复杂二级结构的影响。 
图 7：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液在室温条件下稳定性极佳 
LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 |
LunaScript 反转录 SuperMix 预混液与其它市售反转录产品在 25℃条件下放置 15 天，之后在说明书推荐反应条件下，以 100 pg–1 μg 人总 RNA (Jurkat) 为模板，反转录成为 cDNA。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB #M3003）对 8 个不同丰度、长度和 GC 含量的靶标进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90-110％，ΔCq≥3）。

 

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产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
Reverse Transcription (cDNA Synthesis),
DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M3010L     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010LVIAL -20 1 x 0.4 ml 5 X
    • M3010X     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010LVIAL -20 5 x 0.4 ml 5 X
    • M3010E     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010EVIAL -20 1 x 10 ml 5 X

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. LunaScript RT SuperMix Protocol (NEB #M3010)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualM3010

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I use RNA samples purified from different storage conditions such as RNALater in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    2. Can I add gene-specific primers in my LunaScript® cDNA synthesis reaction?
    3. Can I set up my cDNA synthesis reaction at room temperature when using the LunaScript® RT SuperMix?
    4. Can I use a shorter incubation time for my cDNA synthesis reaction when using the LunaScript® RT SuperMix?
    5. Can I use LunaScript cDNA products directly in qPCR? How much can I use for detection in a qPCR reaction?
    6. How much RNA template should I use in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    7. How should I store LunaScript® cDNA products?
    8. How should I choose between a one-step RT-qPCR or two-step RT-qPCR approach?
    9. Should I include a No-Reverse Transcriptase (RT) control reaction when setting up my cDNA synthesis reaction?
    10. What qPCR reagents do you recommend for detection of cDNA products?
    11. What temperature should I use for my LunaScript® cDNA synthesis reaction?
    12. Why do I have low cDNA yields?
    13. Will the blue dye in the LunaScript® RT SuperMix interfere with detection?
    14. How do I choose between the first strand cDNA synthesis kits from NEB?
    15. When using LunaScript cDNA products in downstream PCR (i.e., two-step RT-PCR), what volumes and PCR products can be used? 

    16. Can I use LunaScript RT SuperMix in RNA-seq workflows?

       

    17. How do I choose between LunaScript RT SuperMix Kit and ProtoScript first strand cDNA synthesis kits?
    18. How do I choose between Induro Reverse Transcriptase and the different LunaScript and ProtoScript products?
    19. How do I know whether my template RNA is of good quality?

质控、安全 & 法规

  • 质控分析

    每一新批次的 NEB 产品都要经过质控，以满足指定的质量标准，对特定产品的质量标准和每一批次的检测数据可以通过产品说明表格、COA、产品信息卡或者产品手册进行查阅或下载。关于 NEB 产品质控的详细信息，可从此处查阅。

  • 产品说明与变更通知

    产品说明表包含产品的储存温度、有效期和规格，这些文件的命名规则如下：[货号]_[规格]_[版本]

    • M3010S_L_v1
    • M3010S_L_X_E_v2

  • CoA 文件包含单个批次产品的储存温度、有效期和质控，这些文件的命名规则如下： [货号]_[规格]_[版本]_[Lot#]

    • M3010S_L_v1_0021802
    • M3010L_v1_10150534
    • M3010X_v1_10150532
    • M3010E_v0_10150533
    • M3010L_v2_10157441
    • M3010L_v2_10161042
    • M3010L_v2_10162605
    • M3010L_v2_10165055
    • M3010L_v2_10170219
    • M3010L_v2_10172243
    • M3010L_v2_10174344
    • M3010X_v2_10174491
    • M3010E_v2_10168316
    • M3010L_v2_10175570
    • M3010X_v2_10178239
    • M3010E_v2_10176598
    • M3010X_v2_10178622
    • M3010L_v2_10178623
    • M3010X_v2_10180395
    • M3010L_v2_10184152
    • M3010X_v2_10185446
    • M3010E_v2_10179802
    • M3010L_v2_10187464
    • M3010X_v2_10188138
    • M3010E_v2_10188665
    • M3010X_v2_10192464
    • M3010L_v2_10198155
    • M3010X_v2_10204071
    • M3010X_v2_10213276
    • M3010X_v2_10220037
    • M3010L_v2_10213279
    • M3010E_v2_10226684
    • M3010L_v2_10231229
    • M3010X_v2_10226687

  • SDS

    以下 SDS 文件可以帮助您安全地使用该产品

    • LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液

  • 法律 & 免责声明

    产品及内容受 New England Biolabs, Inc（NEB）所拥有或控制的一项或多项专利、商标和/或版权保护。文中使用商标符号并不一定表明其在出现的国家/地区注册为商标，仅表明已在创始地注册。如将本产品用于特定应用，用户可能需要获取第三方知识产权授权许可。了解更多信息，请邮件咨询 [email protected]。

    本产品仅用于科研。本产品不适用于人类或动物的治疗或诊断。

    New England Biolabs（NEB）致力于开展合乎伦理的科学研究 – 我们坚信，作为科研工作者，我们的工作是提出重要问题，解决这些问题，将有助于维护我们的生活质量和我们所生活的世界。然而，研究必须始终以安全且合乎道德的方式进行。了解更多。

    许可证

    The buyer/user has a non-exclusive license to use the vector for Research Purposes Only. Commercial use of this vector requires a license from New England Biolabs, Inc.

    U.S. Patent No. 5,643,758

    Appln. No. WO2007/120809