LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

在进行 RT-PCR 实验时，LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒为 cDNA 合成和 PCR 扩增提供了简化方案。其中的 5X 反应预混液含有 dNTP，经优化适用于多重靶标检测，且操作便捷。其中的 25X 酶预混液含有 Luna WarmStart 反转录酶和 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶。核酸适配体抑制酶活技术可对上述两种酶活进行双重温控，因此可在室温下建立反应体系，且预混体系可在室温下稳定保存 24 小时。该试剂盒具备强大的多重靶标扩增能力，适用于诊断、病原体检、病毒基因组测序等多种应用（例如：ARTIC SARS-CoV-2 测序方案，每个反应扩增 ~50 个扩增子）。

在单个 RT-PCR 反应中进行多重 RNA 靶标检测和鉴定

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒（NEB #E1555）仅需添加 RNA 模板和基因特异性引物，即可在一次反应中对多个 cDNA 靶标进行合成和扩增。扩增后的 cDNA 产物可通过下游应用进行检测或鉴定，包括：二代测序、DNA 芯片、片段分析、电泳和传统的克隆/测序。

LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒的灵敏度和多重检测性能卓越

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

使用 LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒（NEB #E1555）或 SuperScript IV One-Step RT-PCR System (Thermo Fisher Scientific) 对人脾总 RNA 的 7 个靶标（185 – 776 bp）进行扩增。取 40% 的 RT-PCR 反应产物进行琼脂糖凝胶（2%）电泳检测。LunaScript 使用标准反应条件：引物终浓度为 1 μM，退火时间为 1 分钟。SSIV 使用推荐反应条件无法扩增所有条带，因此还测试了其它关键参数：改变引物浓度和退火时间。结果显示：LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒可成功扩增不同起始量 RNA 模板中的所有 7 个靶标，但 SuperScript IV One-Step RT-PCR System 经调整反应条件，甚至增模板量，都无法扩增所有靶标。

LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒可完成 ARTIC SARS-CoV-2 测序方案

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

使用 LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒和来自 NEB（A）或 IDT（B）ARTIC V3 引物生成扩增子，扩增模板为 1,000 拷贝 SARS-CoV-2 病毒 gRNA（ATCC VR-1986），该模板掺入到 100 ng 通用人类参考 RNA（Thermo Fisher Scientific®，QS0639）中使用。将 cDNA 合成体系分成两份 12.5 μl 反应体系，分别使用引物库 1 和 2 进行扩增。反应条件为：55℃ 20 分钟（反转录），98℃ 1 分钟（RT 灭活/初始变性），之后进行 35 个循环的扩增：95℃ 15 秒，63℃ 5 分钟（退火和延伸）。

使用 NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒 – 含片段化酶（Illumina®）和 1.3 μl 的合并的扩增子的每个样品进行文库构建，使用 MiSeq® 仪器（2X75 bp）进行测序。为每个文库绘制每个扩增子的测序 reads。使用 seqtk（250,000 read pairs）向下抽样 reads 数，并使用 Bowtie 2 比对至 SARS-CoV-2 参考基因组（NCBI，NC_045512）。参考线表示 100 reads 的典型质量阈值。

试剂可在室温下放置长达 24 小时，在此期间 RNA 的检测效果仍然灵敏和稳定

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

使用 LunaScript 一步法多重 RT-PCR 试剂盒（NEB #E1555）对 GAPDH 靶标（570 bp）进行扩增，样品为 0.01 ng – 10 ng 的 Jurkat 总 RNA。反应体系在冰上建立并立即运行（对照）或在热循环前在室温下放置 1、4 或 24 小时。每个温育条件下都设有无模板对照（NTC）反应。结果显示：所有上样量均完成了高度灵敏和特异的靶标扩增，预混体系在室温下放置长达 24 小时后也达到了同样的效果。

LunaScript 与 OneTaq 一步法 RT-PCR 试剂盒的比较

LunaScript® 一步法多重 RT-PCR 试剂盒 |

 
产品类别:
RT-PCR Products,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
RT-PCR,
cDNA Synthesis,
RT-PCR & cDNA Synthesis

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E1555S     -20    
        LunaScript® Multiplex One-Step RT-PCR Enzyme Mix M1556SVIAL -20 1 x 0.05 ml 25 X
        LunaScript® Multiplex One-Step RT-PCR Reaction Mix M1557SVIAL -20 1 x 0.25 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable
    • E1555L     -20    
        LunaScript® Multiplex One-Step RT-PCR Enzyme Mix M1556LVIAL -20 1 x 0.25 ml 25 X
        LunaScript® Multiplex One-Step RT-PCR Reaction Mix M1557LVIAL -20 1 x 1.25 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 4 x 1.5 ml Not Applicable

  • 优势和特性

    Features

    • 使用 Luna WarmStart 反转录酶和 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶简化了一步法 RT-PCR 方案
    • 高度灵敏：可检测低至 0.01 pg 的人总 RNA
    • 多重检测性能卓越
    • 可在室温下放置长达 24 小时
     

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操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit Protocol (NEB #E1555)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE1555

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I set up my LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR reactions at room temperature?
    2. Can I add random hexamers or oligo (dT) primers to LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR reactions?
    3. Can I reduce the reaction volume in the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR reactions?
    4. How can I determine the annealing temperature for my LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR reactions? 
    5. Can I increase the reverse transcription time beyond the 10 minutes recommended in the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR protocol?
    6. Are the PCR products generated with the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit compatible with a TA cloning system?
    7. What is the lowest RNA input amount recommended for the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit?
    8. What can I do if a particular amplicon failed in a multiplex reaction using the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit?
    9. Can I use the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit to amplify long amplicons? 
    10. Can the LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit be used in the ARTIC workflow for RNA viral genome sequencing? 
    11. How do I choose between One-Step RT-PCR and Two-Step RT-PCR protocols?
    12. How do I choose between LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit and OneTaq One-Step RT-PCR Kit (NEB #E5315)?