标签归档：dam

dam–/dcm– E. coli 感受态细胞 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

缺失甲基转移酶的化学感受态大肠杆菌细胞，适合扩增无 Dam 和 Dcm 甲基化修饰的质粒。请注意，不建议将 dam– 菌株作为初级克隆/连接的宿主细胞。dam 突变会导致细胞内突变率增加和转化效率降低。DNA 应保持在 dam+ 菌株中，除非对无 Dam 或 Dcm 甲基化 DNA 有特定需求。

重点

  • 扩增无 Dam 和 Dcm 甲基化修饰的质粒
  • 无动物来源
  • 抗 T1 噬菌体（fhuA31）
  • 去除了非特异性核酸内切酶 I（endA1）的活性，以获得最高质量的质粒制备
  • K12 菌株

基因型

ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22 mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) TetS endA1 rspL136 (StrR) dam13::Tn9 (CamR) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

产品类别:
Cloning Competent Cell Strains Products

应用:
High-throughput cloning and automation solutions,
Transformation

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C2925H     -80    
        pUC19 Vector N3041AVIAL -20 1 x 0.025 ml 50 pg/µl
        SOC Outgrowth Medium B9020SVIAL 4 1 x 25 ml Not Applicable
        dam–/dcm– Competent E. coli C2925HVIAL -80 20 x 0.05 ml Not Applicable
    • C2925I     -80    
        pUC19 Vector N3041AVIAL -20 1 x 0.025 ml 50 pg/µl
        SOC Outgrowth Medium B9020SVIAL 4 1 x 25 ml Not Applicable
        dam–/dcm– Competent E. coli C2925IVIAL -80 6 x 0.2 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

    抗生素耐药性

    • str
    • nit
    • cam

  • 优势和特性

    Features

    • 扩增无 Dam/Dcm 甲基转移酶的质粒

    应用特性

    热激时间对 dam–/dcm– E. coli 感受态细胞转化效率的影响：dam–/dcm– E. coli 感受态细胞 |
    按照所提供的高效级转化操作流程，用 100 pg pUC19 对照 DNA 转化 50 μl 感受态细胞，热激时间的变化范围为 0 至 80 秒。
    DNA 温育时间对 dam–/dcm– E. coli 感受态细胞转化效率的影响：dam–/dcm– E. coli 感受态细胞 |
    按照所提供的高效级转化操作流程，用 100 pg pUC19 对照 DNA 转化 50 μl 感受态细胞，DNA 温育时间的变化范围为 0 至 40 分钟。
    细胞复苏培养基对转化效率的影响：dam–/dcm– E. coli 感受态细胞 |
    按照所提供的高效级转化操作流程，用 100 pg pUC19 对照 DNA 转化 50 μl -/dcm– E.coli 感受态细胞，其中不同反应之间使用的细胞复苏培养基不同。NEB SOC Outgrowth 培养基的转化效率最高。

  • 相关产品

    相关产品

    • NEB® 10-beta E. coli 感受态细胞（高效级）
    • NEB® 5-alpha E. coli 感受态细胞（亚克隆效级）
    • NEB® 5-alpha F’ Iq E. coli 感受态细胞（高效级）
    • NEB® Turbo E. coli 感受态细胞（高效级）
    • NEB® 5-alpha E. coli 感受态细胞（高效级）
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

    单独销售的组分

    • SOC Outgrowth 培养基

  • 注意事项

    1. 注意：本产品含危险物质 DMSO。处理前请先查看 MSDS。
    2. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 条件下贮存。-20℃ 条件下贮存会显著降低转化效率。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Transformation Protocol (C2925)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Chemical Transformation Tips
    • Competent E. coli Genome Sequences Tool
    • Genetic Markers
    • Making Unmethylated (Dam- Dcm-) DNA
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes

  • 应用实例

    • Enhancing Transformation Efficiency

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Product Comparison
    • Competent Cell Selection Guide

  • Web 工具

    • Competitor Cross-Reference Tool
    • NEBcloner®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I transform unmethylated DNA into dam–/dcm– competent E.coli (C2925)?
    2. Does New England Biolabs offer a methyltransferase free strain of Competent E.coli?
    3. How long should I incubate cells on ice after DNA has been added (NEB #C2925H and NEB #C2925I)?
    4. Is dam–/dcm– (NEB #C2925H/C2925I) resistant to kanamycin?
    5. Is the DNA yield lower using dam–/dcm– strain (C2925)?
    6. What are the solutions/recipes (C2925)?
    7. What are the strain properties (C2925)?
    8. What is the difference between NEB #C2925H and NEB #C2925I?
    9. What is the optimal heat shock time for this strain (NEB #C2925H and NEB #C2925I)?
    10. Which strain of Competent E.coli should I use for general cloning?
    11. Why were the colonies at different size after transformation of dam–/dcm– competent E.coli (C2925)?
    12. How should I calculate the transformation efficiency (C2925)?
    13. Can I store competent cells at -20°C instead of -80°C?
    14. Which kind of transformation tubes should be used?
    15. What volume of DNA can be added into competent cells?
    16. What is the shelf life for this strain (NEB #C2925H and NEB #C2925I)?
    17. Are NEB’s competent cells compatible with the “Mix & Go” protocol?
    18. How should I store SOC Outgrowth Medium? The SOC I received with my competent cells recommends storage at either room temperature or 4°C, however, when I purchase it as a stand alone product, it recommends storing it at 4°C. Which is better?
    19. How should fragments be prepared for assembly using NEBuilder HiFi?

Dam 甲基转移酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

dam 甲基转移酶修饰 GATC 序列中的腺嘌呤残基（N6）。

产品来源

大肠杆菌菌株携带有 pTP166 质粒，该质粒携带克隆自大肠杆菌的 dam 修饰基因

产品类别:
Methyltransferases for Epigenetics Products,
Methyltransferases Products

应用:
Methylated DNA Analysis Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0222S     -20    
        dam Methyltransferase M0222SVIAL -20 1 x 0.063 ml 8,000 units/ml
        dam Methyltransferase Reaction Buffer B0222SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        S-adenosylmethionine (SAM) B9003SVIAL -20 1 x 0.1 ml 32 mM
    • M0222L     -20    
        dam Methyltransferase M0222LVIAL -20 1 x 0.31 ml 8,000 units/ml
        dam Methyltransferase Reaction Buffer B0222SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        S-adenosylmethionine (SAM) B9003SVIAL -20 1 x 0.1 ml 32 mM

  • 特性和用法

    单位定义

    1 个单位是指在 37℃ 条件下，10 µl 反应体系中，1 小时内能保护 1 µg（dam-）Lambda DNA 不被 MboI 限制性内切酶切割所需的酶量。

    反应条件

    1X dam 甲基转移酶反应缓冲液
    Supplement with 80 µM S-腺苷甲硫氨酸（SAM）
    Incubate at 37°C

    1X dam 甲基转移酶反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    5 mM β-ME
    10 mM EDTA
    (pH 7.5 @ 25°C)

    对照保护实验

    dam 甲基转移酶与 1 µg（dam-）Lambda DNA 在 10 µl 补充了 80 µM S-腺苷甲硫氨酸的 1X dam 甲基转移酶缓冲液中于 37℃ 温育 1 小时，后于 65℃ 温育 15 分钟。然后添加 40 µl 补充了 10 mM MgCl2 和 10 个单位 MboI 限制性内切酶的 NEBuffer 3，通过 MboI 酶切实验确定甲基化的保护能力。37℃ 条件下温育 1 小时后用琼脂糖凝胶电泳分析。

    贮存溶液

    50 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    10 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

  • 相关产品

    单独销售的组分

    • S-腺苷甲硫氨酸（SAM）

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Recommended Protocol for 3H labeling of DNA
    2. Recommended Protocol for Methylation of Genomic DNA

  • 使用指南

    • Dam and Dcm Methylases of E. coli

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Is S-adenosylmethionine (SAM) supplied with the Methyltransferase?
    2. What should be considered if the methylation is not going to completion?
    3. Can dam Methyltransferase be heat inactivated?
    4. Does dam Methyltransferase require MgCl2?
    5. Is dam Methyltransferase sensitive to salt?
    6. Will DpnI cleave dam methylated DNA?
    7. Will any NEB methyltransferases (methylases) work on RNA?

  • 实验技巧

    务必在即将进行甲基化反应前才将 SAM 添加到反应缓冲液中，因为 SAM 在水溶液中不稳定。

    -20℃ 冷冻贮存 SAM 可延长其保质期；新鲜配置的 SAM 对实现最佳甲基化反应很重要。

Lambda DNA (dam-) |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

双链 DNA 分离自 lambda 噬菌体（cI857ind 1 Sam 7）。该噬菌体以不含腺嘌呤甲基化酶 (dam–) 的大肠杆菌为宿主。因此，其脱氧腺苷位点不会被甲基化。而在野生型大肠杆菌宿主中，该位点则被甲基化。该 DNA 可以被那些对 dam 甲基化敏感的限制性内切酶完全酶切。Lambda DNA (dam-) 的长度为 48,502 bp。

来源

该噬菌体分离自热诱导溶源性大肠杆菌 (dam–)。使用苯酚抽提纯化的噬菌体 DNA，并用 10 mM Tris-HCl（pH 8.0）、1 mM EDTA 透析。

产品类别:
DNA Plasmids & Substrates Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • N3013S     -20    
        Lambda DNA (dam-) N3013SVIAL -20 1 x 0.5 ml 500 µg/ml
    • N3013L     -20    
        Lambda DNA (dam-) N3013LVIAL -20 2 x 1.25 ml 500 µg/ml

  • 特性和用法

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    1 mM EDTA
    pH 8 @ 25°C

  • 相关产品

    相关产品

    • Lambda DNA
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  • 注意事项

    1. 该 DNA 的优点在于它可以被部分限制性内切酶（如 BclI、MboI、DpnII 等）完全酶切，在大多数大肠杆菌菌株中，这些酶的识别位点仅被部分修饰。

  • 参考文献

    1. Daniels, D.L. et al. (1983). Appendix II: Complete Annotated Lambda Sequence. R.W. Hendrix, J.W. Roberts, F.W. Stahl and R.A. Weisberg(Ed.), Lambda-II. 519-676. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the DNA sequence of this product?
    2. Are the Lambda DNA (NEB #N3011) and Lambda DNA (dam-) (NEB #N3013) methylated?

Lambda DNA (dam-) | NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

Lambda DNA (dam-)

  • Lambda DNA is a commonly used DNA substrate
  • Isolated from a dam- E.coli strain, this DNA can be digested with restriction endonucleases that are sensitive to dam methylation
  • View sequence details

Lambda DNA (dam-) | NEB酶试剂 New England Biolabs

库存
货号 浓度 规格 目录价 北京 上海 广州 成都 苏州
N3013S 500 µg/ml 250 µg ¥869.00 无 无 无 无 无
N3013L 500 µg/ml 1,250 µg ¥3,349.00 无 无 无 无 无
如何订购
Please enter a quantity for at least one size

产品信息

Duplex DNA is isolated from bacteriophage lambda (cI857ind 1 Sam 7). The bacteriophage is grown in an E. coli host which is deficient in adenine methylase (dam–). Therefore, those deoxyadenosine positions which are methylated in a wild type E. coli host are not methylated in the dam– host. This DNA gives complete digests with restriction endonucleases that are sensitive to dam methylation. Lambda DNA (dam-) is 48,502 base pairs in length.

来源

The phage is isolated from a heat-inducible E. coli(dam–) lambda lysogen. The DNA is isolated from purified phage by phenol extraction and dialyzed against 10 mM Tris-HCl (pH 8.0)and 1 mM EDTA.

产品类别:
DNA Plasmids & Substrates Products

  • 产品组分信息

    产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • N3013S     -20    
        Lambda DNA (dam-) N3013SVIAL -20 1 x 0.5 ml 500 µg/ml
    • N3013L     -20    
        Lambda DNA (dam-) N3013LVIAL -20 2 x 1.25 ml 500 µg/ml

  • 特性和用法

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    1 mM EDTA
    pH 8 @ 25°C

  • 相关产品

    相关产品

    • Lambda DNA
    • Monarch® Plasmid Miniprep Kit 
    • Monarch® DNA Gel Extraction Kit
    • Monarch® PCR & DNA Cleanup Kit (5 μg)

  • 注意事项
    1. The advantage of this DNA is that it gives complete digests with those restriction endonucleases (BclI, MboI, DpnII, etc.) whose recognition sites are partially modified by most E. coli strains.

  • 参考文献
    1. Daniels, D.L. et al. (1983). Appendix II: Complete Annotated Lambda Sequence. R.W. Hendrix, J.W. Roberts, F.W. Stahl and R.A. Weisberg(Ed.), Lambda-II. 519-676. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs
    1. Is the Lambda DNA (N3011) methylated?
    2. What is the DNA sequence of this product?

引用 & 技术文献

  • 引用文献

    产品引用文献查找工具

    Lambda DNA (dam-) | NEB酶试剂 New England Biolabs Powered by Bioz See more details on Bioz

质控、安全 & 法规

  • 质控分析
    每一新批次的 NEB 产品都要经过质控，以满足指定的质量标准，对特定产品的质量标准和每一批次的检测数据可以通过产品说明表格、COA、产品信息卡或者产品手册进行查阅或下载。关于 NEB 产品质控的详细信息，可从此处查阅。

  • 产品说明与变更通知

    产品说明与变更通知

    产品说明表包含产品的储存温度、有效期和规格，这些文件的命名规则如下：[货号]_[规格]_[版本]

    • N3013S_L_v1

  • CoA
    CoA 文件包含单个批次产品的储存温度、有效期和质控，这些文件的命名规则如下： [货号]_[规格]_[版本]_[Lot#]

    • N3013S_L_v1_0481401
    • N3013S_L_v1_0481407
    • N3013S_L_v1_0481412
    • N3013S_L_v1_0491412
    • N3013S_L_v1_0491505
    • N3013S_L_v1_0491511
    • N3013S_L_v1_0491603
    • N3013S_L_v1_0491608
    • N3013S_L_v1_0491612
    • N3013S_L_v1_0491704
    • N3013S_L_v1_0491705
    • N3013S_L_v1_0491707
    • N3013S_L_v1_0501802
    • N3013S_L_v1_0501804
    • N3013L_v1_10007983
    • N3013L_v1_10019245
    • N3013S_v1_10019247
    • N3013L_v1_10032407
    • N3013L_v1_10035202
    • N3013S_v1_10032410
    • N3013L_v1_10055063
    • N3013S_v1_10058088
    • N3013L_v1_10067002
    • N3013S_v1_10067003
    • N3013L_v2_10071277
    • N3013S_v2_10089320
    • N3013L_v2_10114564
    • N3013L_v2_10115054
    • N3013S_v2_10119138
    • N3013L_v2_10139395
    • N3013S_v2_10140439
    • N3013L_v2_10140441
    • N3013S_v2_10157758

  • SDS
    以下 SDS 文件可以帮助您安全地使用该产品

    • Lambda DNA (dam-)