产品信息

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  M0222S     -20       dam Methyltransferase M0222SVIAL -20 1 x 0.063 ml 8,000 units/ml   dam Methyltransferase Reaction Buffer B0222SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   S-adenosylmethionine (SAM) B9003SVIAL -20 1 x 0.1 ml 32 mM
  M0222L     -20       dam Methyltransferase M0222LVIAL -20 1 x 0.31 ml 8,000 units/ml   dam Methyltransferase Reaction Buffer B0222SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X   S-adenosylmethionine (SAM) B9003SVIAL -20 1 x 0.1 ml 32 mM

• 特性和用法

  单位定义

  1 个单位是指在 37℃ 条件下，10 µl 反应体系中，1 小时内能保护 1 µg（dam-）Lambda DNA 不被 MboI 限制性内切酶切割所需的酶量。

  反应条件

  1X dam 甲基转移酶反应缓冲液
  Supplement with 80 µM S-腺苷甲硫氨酸（SAM）
  Incubate at 37°C

  1X dam 甲基转移酶反应缓冲液
  50 mM Tris-HCl
  5 mM β-ME
  10 mM EDTA
  (pH 7.5 @ 25°C)

  对照保护实验

  dam 甲基转移酶与 1 µg（dam-）Lambda DNA 在 10 µl 补充了 80 µM S-腺苷甲硫氨酸的 1X dam 甲基转移酶缓冲液中于 37℃ 温育 1 小时，后于 65℃ 温育 15 分钟。然后添加 40 µl 补充了 10 mM MgCl₂ 和 10 个单位 MboI 限制性内切酶的 NEBuffer 3，通过 MboI 酶切实验确定甲基化的保护能力。37℃ 条件下温育 1 小时后用琼脂糖凝胶电泳分析。

  贮存溶液

  50 mM Tris-HCl
  50 mM KCl
  1 mM DTT
  10 mM EDTA
  200 µg/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 20 minutes

• 相关产品

  单独销售的组分

  • S-腺苷甲硫氨酸（SAM）

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Recommended Protocol for ³H labeling of DNA
  2. Recommended Protocol for Methylation of Genomic DNA

• 使用指南

  • Dam and Dcm Methylases of E. coli

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Is S-adenosylmethionine (SAM) supplied with the Methyltransferase?
  2. What should be considered if the methylation is not going to completion?
  3. Can dam Methyltransferase be heat inactivated?
  4. Does dam Methyltransferase require MgCl₂?
  5. Is dam Methyltransferase sensitive to salt?
  6. Will DpnI cleave dam methylated DNA?
  7. Will any NEB methyltransferases (methylases) work on RNA?

• 实验技巧

  务必在即将进行甲基化反应前才将 SAM 添加到反应缓冲液中，因为 SAM 在水溶液中不稳定。

  -20℃ 冷冻贮存 SAM 可延长其保质期；新鲜配置的 SAM 对实现最佳甲基化反应很重要。