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EpiSightTM Bisulfite Conversion Kit Ver.2
DNA 重亚硫酸盐转化试剂盒
Enhanced Bisulfite Reaction 抑制因亚硫酸氢钠反应的 DNA 分解，扩增长链长度。
通过添加专利产品 Bisulfite 溶液和反应促进剂（Enhancer），能抑制模板 DNA 的分解，能让胞嘧啶转化为尿嘧啶的效率大幅度上升。使用离心柱能使 DNA 纯化操作更加简便。
结合专用的 Taq DNA Polymerase，即使是亚硫酸氢钠反应后，PCR 扩增比较困难的碱基序列也能稳定且高效地扩增。
◆特点
● 离心柱操作简单
● 专利的 Enhancer 抑制 DNA 分解
● 有效扩增富含 CpG 的序列
● 热启动聚合酶防止非特异性扩增
有以下需求的可以考虑使用本产品
● 扩增长链进行高效分析
● 非甲基化胞嘧啶不转换为尿嘧啶的情况
● 甲基化胞嘧啶转换为尿嘧啶的情况
● 想提高 PCR 扩增效率
◆试剂盒内容（kit 内容）
EpiSightTM Bisulfite Conversion Kit Ver.2（20次）
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Bisulfite solution |
11.8 mL×1 |
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Enhancer |
100 µL×1 |
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吸附缓冲液 |
10 mL×1 |
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洗涤液 |
4.8 mL×1 |
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Desulfonation buffer（脱磺缓冲液） |
1 mL×1 |
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洗脱缓冲液 |
500 µL×1 |
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离心柱 |
20个 |
EpiSightTMBisulTaqTM DNA Polymerase,recombinant,Solution Ver.2（20次）
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BisulTaqTM DNA Polymerase,recombinant,Solution Ver.2 |
10 µL×1 |
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10×反应缓冲液 |
100 µL×1 |
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dNTPs溶液（各 2 mmol/L） |
100 µL×1 |
◆使用例1
以小鼠 ES 细胞（胚胎干细胞）和 M1细胞（白血病衍生细胞）的基因组 DNA 为模板，经过亚硫酸盐处理后，PCR 扩增干细胞未分化标记FGF4启动子区。PCR 扩增的链长是 521bp，CpG 二核苷酸数为 61 位，对于亚硫酸氢钠 PCR 扩增链较长，因为 GC 含量高，被认为是对三维结构影响较大的区域。
ES 细胞有干细胞未分化标记 FGF4 的 mRNA 表达，启动子区为非甲基化状态；M1 细胞没有用于体细胞分化的 Fgf4 的 mRNA 表达，被认为启动子区处于甲基化状态。
● 样本：小鼠 ES 细胞和小鼠 M1 细胞的基因组 DNA、
● PCR 扩增链长：521bp（小鼠 Fgf4 启动子区）
● CpG：61 位
● PCR 扩增区域 GenBank Accession No.
● AC_149593 : 230224–230744
结果
ES 细胞和 M1细胞的 PCR 扩增产物在克隆后，得到分析 11 个样本的碱基序列。小鼠 ES 细胞的 Fgf4 启动子区为非甲基化状态。小鼠 M1细胞的 Fgf4 启动子区为甲基化状态。
◆使用例2
以 Lambda DNA 为模板，通过使用该试剂盒和 DNA 聚合酶在 Bisulfite 反应后，扩增 910bp 目的区域，分析碱基序列。Lambda DNA 中所有的胞嘧啶都是非甲基化，Bisulfite 反应后全部被转化为尿嘧啶，预测 PCR 扩增产物中不存在胞嘧啶。
● 样本：Lambda DNA
● 非甲基化胞嘧啶：150个
● PCR 扩增链长：910pb
● PCR 扩增区域 GenBank Accession No NC_001416 : 26062–269
结果
下图所示，不存在胞嘧啶，150 处的胞嘧啶全部转化为胸腺嘧啶。
以往的 Bisulfite 法中，DNA 分解严重，条件设置困难，本产品能简单地成功实现 900 bp 以上的 PCR 产物扩增。
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| 291-78501 | EpiSight™BisulfiteConversion Kit Ver.2 | 20次 | 遗传因子研究用 |
| 293-78701 | EpiSight™ BisulTaq™ DNA Polymerase, recombinant, Solution Ver.2 | 20次 | 遗传因子研究用 |
