O-糖苷酶 & 神经氨酸苷酶套装 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

该套装试剂盒包含 200 万单位 O-糖苷酶和 2,000 单位神经氨酸苷酶。

O-糖苷酶即内切-α-N-乙酰半乳糖胺酶，催化切割糖蛋白上 O-连接二糖结构，核心 1 和核心 3 结构。

神经氨酸苷酶是乙酰神经氨酸水解酶（唾液酸酶）的俗称。该酶催化水解糖蛋白和寡糖上的 α2-3、α2-6、α2-8 连接的 N-乙酰-神经氨酸残基。

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产品来源

O--糖苷酶克隆自粪肠球菌（Enterococcus faecalis），在E.coli中表达（1）。神经氨酸苷酶克隆自产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）（2），在E.coli中过表达（3）。

产品类别:
Endoglycosidases Products

应用:
Expression Systems,
Glycan Sequencing,
Protein Digestion,

Proteomics,
Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E0540S     -20    
        α2-3,6,8 Neuraminidase P0720SVIAL -20 1 x 0.04 ml 50,000 units/ml
        O-Glycosidase P0733SVIAL -20 1 x 0.05 ml 4.0E7 units/ml
        GlycoBuffer 2 B3704SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        NP-40 B2704SVIAL -20 1 x 1 ml 10 %
        Glycoprotein Denaturing Buffer B1704SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位 O-糖苷酶指 100 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内从 5 mg 神经氨酸苷酶酶解后的非变性胎球蛋白中去除 0.68 nmol O-连接二糖单位所需的酶量（1 单位 O-糖苷酶和 PNGase F 可以分别去除等摩尔的 O-连接二糖单位和 N-连接寡糖）。

    O-糖苷酶的非变性单位定义：
    在 1X GlycoBuffer 2 反应缓冲液中，5 mg 神经氨酸苷酶酶解后的胎球蛋白和两倍梯度稀释的 O-糖苷酶。37℃ 条件下温育 1 小时。通过 Morgan-Elson 检测法测定 O-连接二糖碳水化合物的含量（4）。注意：在变性条件下，酶的活性提高两倍。该观察结果因底物而异。

    神经氨酸苷酶的单位定义：
    1 单位神经氨酸苷酶指 10 µl 反应体系中，37℃ 条件下，5 分钟内将 1 nmol Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95%的末端 α-Neu5Ac 水解所需的酶量。

    1X 糖蛋白变性缓冲液
    0.5% SDS
    40 mM DTT

    1X NP-40
    1% NP-40（溶解于 MilliQ-H2O）

    反应条件

    1X GlycoBuffer 2
    Incubate at 37°C

    1X GlycoBuffer 2
    50 mM Sodium Phosphate
    (pH 7.5 @ 25°C)

  • 相关产品

    相关产品

    • α2-3,6,8 神经氨酸苷酶
    • p0733-o-glycosidase
    • p0704-pngase-f
    • p0705-pngase-f-glycerol-free
    • p0702-endo-h
    • p0703-endo-hf

  • 注意事项

    1. SDS 会抑制 O-糖苷酶活性，因此反应混合物中须含有 NP-40 来抵消 SDS 的抑制作用。目前还不清楚这种非离子洗涤剂抵消 SDS 抑制作用的机理。要使用糖苷内切酶 H 进行双酶切，须含有 NP-40（NP-40 不会抑制糖苷内切酶 H 的活性）。
    2. 要使非变性糖蛋白去糖基化，建议增加酶量并延长温育时间。

  • 参考文献

    1. Koutsioulis, D., Landry, D. and Guthrie, E.P. (2008). Glycobiology. 18, 799-805.
    2. Roggentin, P. et al. (1988). FEBS Lett. 238, 31-34.
    3. Guan, C. unpublished observations. New England Biolabs.
    4. Morgan, W.T.J. and Elson, L.A. (1934). Biochem. J. 28, 988-995.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. O-Glycosidase Application Note 1 (P0733)
    2. O-Glycosidase (P0733)

  • 使用指南

    • Detailed Characterization of Several Glycosidase Enzymes

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Endoglycosidase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are the typical reaction conditions for O-Glycosidase?
    2. Is it necessary to treat my glycoprotein concomitantly with Neuraminidase and O-Glycosidase?
    3. What is the difference between PNGase F, Endo H and O-Glycosidase?
    4. How much O-Glycosidase should I use to remove my carbohydrate under native conditions?
    5. How do I inhibit O-Glycosidase?
    6. What is a good positive control for O-Glycosidase?
    7. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
    8. Do detergents inhibit O-Glycosidase?
    9. I tried using O-Glycosidase on my glycoprotein and didn’t see removal of the carbohydrate. What could be the problem?