产品信息

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  M0304S     -20       Endonuclease IV M0304SVIAL -20 1 x 0.1 ml 10,000 units/ml   NEBuffer™ 3 B7003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
  M0304L     -20       Endonuclease IV M0304LVIAL -20 1 x 0.5 ml 10,000 units/ml   NEBuffer™ 3 B7003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点* 的 34 bp 寡核苷酸双链所需的酶量。

  * AP 位点创建方法：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。

  反应条件

  1X NEBuffer™ 3
  Incubate at 37°C

  1X NEBuffer™ 3
  100 mM NaCl
  50 mM Tris-HCl
  10 mM MgCl₂
  1 mM DTT
  (pH 7.9 @ 25°C)

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  250 mM NaCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 µg/ml BSA
  50% Glycerol
  0.15% Triton® X-100
  pH 7.4 @ 25°C

  热失活

  85°C for 20 minutes

  单位活性检测条件

  10 μl 总反应体系，含 1X NEBuffer 3 和 10 pmol 荧光标记寡核苷酸双链。

• 优势和特性

  应用特性

  • 单细胞凝胶电泳（彗星试验）（2,3,4）
  • 碱洗脱（5）
  • 碱解旋（6）

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  • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  单独销售的组分

  • NEBuffer 3

• 注意事项

  1. 彗星试验的推荐稀释倍数：1.10⁴ 到 1:10⁵（2,3,4,7）。具体操作说明请登陆：http://cometassay.com
  2. 核酸内切酶 IV 的最适缓冲液是 1X NEBuffer 3（NEB #B7003）。该酶在 NEBuffer 2（NEB #B7002）中的活性为 100%，在 CutSmart 缓冲液（NEB #B7204）中的活性为 25%。不建议在 NEBuffer 1（NEB #B7001）中使用核酸内切酶 IV。
  3. 该酶在 ThermoPol® 反应缓冲液（NEB #B9005）中也有活性。

• 参考文献

  1. Levin, J. et al. (1988). J. Gen. Physiol. . 33, 349-362.
  2. Singh, N. et al. (1961). Experimental Cell  Research . 175, 184-191.
  3. Collins, A. etal. (1993). Carcinogenesis . 14, 1733-1735.
  4. Collins, A. et al. (1996). Environmental Health Perspectives . 104, 465-469.
  5. Pflaum, M. et al. (1998). Free Rad. Res. 29, 585-594.
  6. Hartwig, A. et al. (1996). Toxicology Letters. 88, 85-90.
  7. Marks, K., New England Biolabs, Inc. unpublished observations.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Protocol for Endonuclease IV (M0304)

• 使用指南

  • DNA Damage and PreCR

工具 & 资源

• 选择指南

  • Activities of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
  • DNA Repair Enzymes on Damaged and Non-standard Bases
  • Properties of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What is the activity of Endonuclease IV in the NEBuffers?
  2. What is the molecular weight for Endonuclease IV?
  3. Does Endonuclease IV cleave ssDNA?
  4. Will the 5′ terminus left by an Endonuclease IV cleavage be suitable for subsequent ligation by T4 DNA ligase?
  5. In addition to AP sites, does Endonuclease IV have cleavage activity on other types of DNA damage?
  6. Can an abasic site be created and then cleaved with Endonuclease IV in the same reaction? How active is Uracil-DNA-Glycosylase (cat# M0280S) in Endonuclease IV buffer?