标签归档：cpf

EnGen Lba Cas12a（Cpf1）核酸酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

EnGen® Lba Cas12a 核酸酶来自毛螺菌科细菌 ND2006（Lachnospiraceae bacterium ND2006），是一种位点特异性 DNA 核酸内切酶，由长度为 41-44 个核苷酸的单向导 RNA（gRNA）介导识别（1）。靶向识别需要一段与目标位点互补的 gRNA，以及位于目标序列对侧的 DNA 链上的 5’ TTTV PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列。EnGen Lba Cas12a 核酸酶的切割位点位于 PAM 序列 3´ 端约第 18 个碱基处，切割产物为 5´ 突出末端。EnGen Lba Cas12a 核酸酶蛋白的 N 端和 C 端都含有猴病毒 40（SV40）T 抗原核定位序列（NLS）。

 

Lba Cas12a 核酸酶序列识别与切割 DNA 示意图

EnGen Lba Cas12a（Cpf1）核酸酶 |

Lba Cas12a 核酸酶的活性温度范围更宽

EnGen Lba Cas12a（Cpf1）核酸酶 |

将纯化的 Lba 或 Asp Cas12a 蛋白与其标准向导 RNA 形成 RNP 复合物。目标 DNA 序列是 5´ 端标记 FAM 的单一 PCR 产物。在所示温度下，将 Lba 或 Asp Cas12a RNP 与目标 DNA 按 10:1 的比例温育 10 分钟。切割产物通过毛细管电泳分离，并通过整合完整片段和切割后片段产生的信号进行定量检测。所示数据为重复实验的平均值 +/- SD。

产品来源

EnGen Lba Cas12a 核酸酶，克隆自毛螺菌科细菌 ND2006（Lachnospiraceae bacterium ND2006），在大肠杆菌中表达，为 N 端含 6xHis 标签的融合蛋白。

产品类别:
Genome Editing Products,
Programmable Nucleases Products

应用:
Genome Editing Applications

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0653S     -20    
        EnGen® Lba Cas12a (Cpf1) M0653SVIAL -20 1 x 0.07 ml 1 µM
        NEBuffer™ r2.1 B6002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0653T     -20    
        EnGen® Lba Cas12a (Cpf1) M0653TVIAL -20 1 x 0.02 ml 100 µM
        EnGen Lba Cas12a Diluent B0653AVIAL -20 2 x 1 ml 1 X
        NEBuffer™ r2.1 B6002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    反应条件

    1X NEBuffer™ r2.1
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ r2.1
    50 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    500 mM NaCl
    20 mM sodium acetate
    0.1 mM EDTA
    0.1 mM TCEP
    50% Glycerol
    pH 6 @ 25°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

  • 注意事项

    1. 100 µM 等于 15.1 mg/ml EnGen Lba Cas12a 核酸酶。

  • 参考文献

    1. Zetsche, B., et. al. (2015). Cell. 163, 759-771.
    2. Moreno-Mateos, M.A., et al. (2017). Nat. Commun.. 8, 2024. PubMedID: 29222508

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Electroporation of Cas12a Ribonucleoprotein (RNP) into adherent cells using the Neon® Electroporation
    2. Protocol for Electroporation of Cas12a Ribonucleoprotein (RNP) into adherent cells using the Lonza 4D-Nucleofector®
    3. In vitro digestion of DNA with EnGen® Lba Cas12a (Cpf1) (M0653)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are the differences between EnGen® Lba Cas12a (Cpf1) (NEB #M0653) and EnGen Spy Cas9 NLS (NEB #M0646)?
    2. Which nuclear localization signal is fused to EnGen® Lba Cas12a (Cpf1)?
    3. Why am I observing limited or no digestion with EnGen® Lba Cas12a (Cpf1)?
    4. Why does digestion/editing efficiency differ between two different guide RNAs?
    5. Can mutations generated with EnGen Lba Cas12a (Cpf1) be detected using T7 Endonuclease I (NEB #M0302) or the EnGen Mutation Detection Kit (NEB #E3321S)?
    6. Can gRNA for use with EnGen Lba Cas12a (Cpf1) be generated using the EnGen sgRNA Synthesis Kit, S. pyogenes (NEB #E3322)?
    7. How do I design a guide RNA for use with EnGen Lba Cas12a?
    8. How do I dilute the enzyme to 1 μM for in vitro reactions?
    9. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?
    10. What is in EnGen Lba Cas12a Diluent (NEB #B0653A)?