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T细胞尼龙毛柱分离法

发表于由

上海金畔生物科技有限公司提供T细胞尼龙毛柱
简单介绍
在研究体内及体外的免疫系统时，分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清，所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用
了尼龙毛对B细胞的亲和力，从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。
 
T细胞尼龙毛柱分离法的详细介绍
T细胞尼龙毛柱分离法
在研究体内及体外的免疫系统时，分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清，所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用
了尼龙毛对B细胞的亲和力，从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。因为这个方法不像流式和磁珠费用昂贵，而且操作简便，所需要的条件也不高，是一种非常实用的方法
。
(在此我向各位解释一下，现在分离T细胞的方法主要是三种，流式，磁珠法，尼龙毛法。与前两种方法相比，尼龙毛法的优势在于无需特定的设备仪器，一般的实验室均有条件操作；价格相
对低廉；可以进行大量样本操作。)
首先要指出的是实验中所使用的是分离T细胞专用的尼龙毛(Nylon Fiber)，不是化工上的尼龙纤维，曾经有人问过我这种问题，如果你买错了，可是做不出来的！其次，现在市面上的尼龙毛
也是良隽不齐，也有同仁反应买到的尼龙毛加入缓冲液以后成了一团糨糊，根本没法使用，这个问题就要靠各位的慧眼了。
现在市面上有尼龙毛填料，也已经有了商品化的尼龙毛柱子，这两者的区别主要是以下两点：
1.       商品化的柱子的填料量是已经定好的，有一个确定的上样量范围。而自己买填料装柱可以控制填料量，也就是可以控制上样量，这对于样本量非常少，或是样本量非常大的实验需求
非常合适。
2.       商品化的柱子已经经过了无菌处理(一般是辐射灭菌)，而自己装柱当然就要自己灭菌了。
3.       商品化的柱子在实验的重复性上有着绝对的优势。自己装的柱子在填料的处理和装柱的松紧等方面不容易控制，差异性的控制就看你的实验技巧了。
操作方法：
1.秤取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃或一次性注射器内(要可以灭菌的)，填料的体积控制在15毫升左右(注射器上有标记，所以还是比较好控制的)，因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率，
所以要特别注意。注射器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。
2. 加入大量的PBS平衡柱子后，用铝箔包裹，并置于适当的容器内，高压灭菌15分钟。
（商品化尼龙毛柱以上步骤可以省略，经过无菌PBS平衡后直接进行下列步骤。）
3. 灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内，顶部以铝箔覆盖，避免污染。
4. 橡皮管，弹簧夹用无水酒精消毒后接注射器下端，打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。
5.首先，加入3-4倍柱体的无血培养基平衡；随后，之后加入相同体积的含有血清的培养基平衡（上述培养基都要预热），最后等培养基页面接近柱填料页面时，关闭弹簧夹。
6. 样本细胞悬浮液浓度控制在5×108cells/ml的，上样量一般是1/3-1/5柱体积(商品化的柱子一般都有推荐上样量)。样品加入之后，再加入少量培养液，然后关闭弹簧夹。
7. 柱上覆盖铝箔，移置于消毒过的容器中，37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。
8. 从培养箱中拿出柱子，置于超净台内，除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管，加入适当体积经37℃预热的培养基，打开弹簧夹控制流速在3-4 mL/min，流出约5ml之后，
流出的培养液基变得不透明，此时其中含有T细胞，收集这一部分培养基。
9. 基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度，实际上，收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集，因为即使收集更多的量，回收率几乎不会增加。
10 。参考数据：
样本：小鼠脾脏（T细胞含量在30-40%，B细胞含量在55-60%）
细胞回收率：13-25%
B细胞污染率：小于15%
 
样本：大鼠脾脏（T细胞含量在30-35%，B细胞含量在55-65%）
细胞回收率：大于25%
B细胞污染率：小于15%
 
样本：人或兔外周血
细胞回收率 : 20-30% (人)；25-35% (兔)
B细胞污染率：小于5% (人、兔)
 
（注）收集粘附于尼龙毛上的细胞时，将T细胞收集完毕后的尼龙毛在无菌操作的状态下取出，转移到适当的容器中，用镊子小心的将尼龙毛松开，粘附的细胞可以洗到培养基中。或者将注射
器芯插入注射器内，通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。
 
产品信息
品牌     品名                   规格
Wako  T细胞尼龙毛柱          0.5g*10  (推荐用于小鼠脾脏)
Wako  T细胞尼龙毛柱L型      1g*10   (推荐用于大鼠脾脏、人或兔子的外周血)
Wako  T细胞尼龙毛            2g*5   (可按照自己的需要装柱，控制上样量)
Wako  小鼠淋巴细胞分离试剂  30mL*5  用于从小鼠脾脏，淋巴结，淋巴结悬浮液中分离淋巴细胞
Wako  人淋巴细胞分离试剂  100ml*6  用于从人血中提取淋巴细胞
Wako  铁粉(羰基铁)Iron Powder, from Iron Carbonyl  25g   直径25um，用于清除巨噬细胞
Wako  κ-卡拉胶κ-Carrageenan  25g
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Cy5.5 NHS ester Cy7 NHS ester Cy7.5 NHS ester Sulfo-Cy7 NHS ester

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上海金畔生物科技有限公司提供小动物活体成像用染料
Cy5.5 NHS ester
是近红外染料，除了用于标记多肽，蛋白和寡核苷酸氨基的活性染料，可用于后续的小动物活体成像实验。 该染料可代替Alexa Fluor 680 NHS ester和DyLight 680 NHS ester
分子结构：

一般性质：
外观：深蓝色粉末
分子量：716.31
分子式：C44H46ClN3O4
溶解性：溶于有机溶剂（DMSO,DMF,二氯甲烷），在水中不易溶解
质控：NMR 1H(95%) 13C,TLC,功能测试
保存条件：保存：-20℃，避光保存24个月。运输：常温下最多3周，避光，干燥。
光谱性质：
最大激发波长：673nm
在最大激发波长下的消光系数：209000Lmol-1cm-1
最大发射波长：707nm
荧光量子产率：0.2

Cy7 NHS ester

氨基活性的Cy7,近红外荧光染料。此试剂可被用于产生Cy7-标记的生物分子，用于后续的小动物活体成像研究，药物设计及相关实验。Cy7中心加强聚亚甲基链的结构特点，与母结构相比其量子产率提高了20%，增加了其荧光亮度。
分子结构：

一般性质：
外观：绿色粉末
分子量：682.29
分子式：C41H48ClN3O4
溶解性：溶于有机溶剂（DMSO,DMF,二氯甲烷），不易溶于水
质控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能测试
保存条件：保存：-20℃，避光保存24个月。运输：常温下最多3周，避光，干燥。
光谱性质：
最大激发波长：750nm
在最大激发波长下的消光系数：199000Lmol-1cm-1
最大发射波长：773nm
荧光量子产率：0.3

Cy7.5 NHS ester

穿透组织，可用于小动物活体成像实验。Cy7.5中心加强聚亚甲基链的结构特点，与母结构相比其量子产率提高了20%，增加了其荧光亮度。
分子结构：

一般性质：
外观：绿色粉末
分子量：782.41
分子式：C49H52ClN3O4
溶解性：溶于有机溶剂（DMSO,DMF,二氯甲烷），不易溶于水
质控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能测试
保存条件：保存：-20℃，避光保存24个月。运输：常温下最多3周，避光，干燥。
光谱性质：
最大激发波长：788nm
在最大激发波长下的消光系数：223000Lmol-1cm-1
最大发射波长：808nm
荧光量子产率：0.3

Sulfo-Cy7 NHS ester


一般性质：
外观：深绿色粉末
分子量：827.94
分子式：C41H46N3NaO10S2
溶解性：易溶于水,DMF,DMSO
质控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能测试
保存条件：保存：-20℃，避光保存24个月。运输：常温下最多3周，避光，干燥。
光谱性质：
最大激发波长：740nm
在最大激发波长下的消光系数：240600Lmol-1cm-1
最大发射波长：773nm

Cy7马来酰亚胺

近红外，巯基活性Cy7染料。此试剂可将近红外的Cy7染料连接到蛋白的巯基上，标记的蛋白可以用于近红外生物成像。
分子结构：

一般性质：
外观：绿色粉末
分子量：707.34
分子式：C48H51ClN4O3
溶解性：易溶于DMF,DMSO，二氯甲烷，不易溶于水
质控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能测试
保存条件：保存：-20℃，避光保存24个月。运输：常温下最多3周，避光，干燥。
光谱性质：
最大激发波长：750nm
在最大激发波长下的消光系数：199000Lmol-1cm-1
最大发射波长：773nm
荧光量子产率：0.3

Cy7.5马来酰亚胺



一般性质：
外观：绿色粉末
分子量：807.46
分子式：C51H55ClN4O3
溶解性：易溶于DMF,DMSO，二氯甲烷，不易溶于水
质控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能测试
保存条件：保存：-20℃，避光保存24个月。运输：常温下最多3周，避光，干燥。
光谱性质：
最大激发波长：788nm
在最大激发波长下的消光系数：223000Lmol-1cm-1
最大发射波长：808nm
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Echelon Lysophosphatidic Acid Competitive ELISA Kit

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上海金畔生物科技有限公司提供Echelon试剂盒 抗体
Echelon试剂盒 抗体
1997年成立于美国犹他州的Echelon公司前身为美国国家细胞信号研究中心。其提供各种抗体、分析检测试剂盒和抑制剂等产品，主要擅长细胞信号、脂类代谢和标记物研究的相关产品，可为
癌症、糖尿病、炎症、感染和心脑血管疾病等各领域的研究提供全面有效的工具。
中华试剂网负责Echelon在中国市场的产品销售、技术应用与支持等各项业务。一如既往地为中国化学行业广大科研和生产用户提供卓越的产品与服务。
核心竞争力：
专注脂质代谢研究，产品齐全
可提供科研试剂和各类检测服务
特色产品：
PI3-Kinase PI3-激酶
Lysolipids 血溶性脂类
Sphingolipids 鞘脂类
Autotaxin(ATX) 自分泌运动因子
如果您需要更多产品资料请访问：www.echelon-inc.com
Echelon产品线
Lipid Kinases & Phosphatases
脂质激酶和***酸
 
Lipid-Protein Interaction Tools
脂蛋白质相互作用工具
 
Lipid-Specific Assay Kits
脂质特定检测试剂盒
 
Lipid-Specific Antibodies & Binding Proteins
脂质特定抗体和结合蛋白
 
Hyaluronic Acid & Collagen IV Assay Kits
透明质酸和IV型胶原检测试剂盒
 
Synthetic Inositol phosphates, Lipids, & Phospholipids
合成的***酸肌醇，脂和***脂
 
PI3-Kinase PI3-激酶
Echelon 可提供PI3-Kinase 实验解决全套方案，从分析服务到实验用抗体、酶和抑制剂等，全面满足科研需求。
专业系列
产品编号
特色产品
 
检测试剂盒
K-1000
PI3-K ELISA Kit
 
K-1000S
PI3-K ELISA: Pico Assay
 
K-1100
PI3-K Fluorescence Polarization Kit
 
K-1300
PI3-K AlphaScreen®
 
K-2700S
TRueFRET PI3-K Activity Assay
 
K-3000
Class III PI3-K ELISA Kit
 
抗体
Z-R015
Anti-huVps34 (Class III PI3-Kinase) Antibody for IP
 
Z-R016
Anti-huVps34 (Class III PI3-Kinase) Antibody for WB
 
抑制剂
B-0021
Resveratrol (Class IA PI3-K Inhibitor)
 
B-0222
Wortmannin (PI3-Kinase Inhibitor)
 
B-0294
PI3-Kinase Inhibitor (LY294002)
 
B-0301
PI3-Kinase Gamma Inhibitor 1 (AS605240)
 
B-0302
PI3-Kinase Gamma Inhibitor 2 (AS604850
 
B-0303
PI3-Kinase Alpha Inhibitor 1 (PI-103)
 
B-0304
PI3-Kinase Alpha Inhibitor 2
 
酶
P27-18H
PI3-K (p-110 alpha/p85 alpha) Active Enzyme
 
P28-10H
PI3-K (p-110 beta/p85 alpha) Active Enzyme
Lysolipids 血溶性脂类
Lysolipid Pathway                                            Synthetic Lysophosphatidic Acid (LPA)
Inhibitors 抑制剂系列                                      Labeled 标记物系列
Ligands 配体系列                                           Ligands 配体系列
Analogs 类似物系列                                         Saturated 底物系列
Unsaturated 不饱和系列
专业系列
产品标号
特色产品
 
Kits试剂盒
K-2800B
Lysophosphatidic Acid Competitive ELISA Kit
 
K-4100
Autotaxin Activity Assay
 
K-4200
Autotaxin Inhibitor Screening Kit
 
Enzymes酶
E-4000
Autotaxin Enzyme
 
Substrate底物
L-2000
FS-3 LysoPLD/Autotaxin Substrate
 
Inhibitors抑制剂
L-7416
LysoPLD/Autotaxin Inhibitor
 
Sphingolipids 鞘脂类
Synthetic Sphingolipids
Sphingosine 鞘氨醇          Ceramide 神经酰胺
Sphingosine 1 Phosphate (S1P ) 鞘氨醇***      Sphingomyelin 鞘***脂
FTY720P
专业系列
产品编号
特色产品
 
Kits试剂盒
K-1900
Sphingosine 1 Phosphate ELISA Kit (S1P)
 
K-3500
Sphingosine Kinase 1 Activity Assay
 
K-1800
Sphingomyelinase Assay Kit
 
K-3200
Acid Sphingomyelinase Assay Kit
 
Enzymes酶
E-K068
Sphingosine Kinase 1, active
 
E-K069
Sphingosine Kinase 2, active
 
Inhibitors抑制剂
B-0024
Sphingosine Kinase Inhibitor
Autotaxin(ATX) 自分泌运动因子
Echelon是世界上唯一完整全面提供Autotaxin(ATX) 和Autotaxin(ATX) 相关试剂的供应商。
产品编号
特色产品
 
S-400B
Sphingomyelin Biotin
 
P-B0SM
Sphingomyelin Beads
 
S-6100
Sphingosine Beads
 
S-6110
Sphingosine 1 Phosphate Beads
 
P-B00Ss
Sphingo Bead Sample Pack
 
G-SM01
Sphingomyelin Grip (Equinatoxin)
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