快速连接™试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

在室温条件下（25℃），快速连接试剂盒可在 5 分钟内连接粘性末端或平末端 DNA 片段 。

如需了解 NEB DNA 连接酶产品质量控制的详细信息，请访问连接酶质控页面。

时间连接进程： 快速连接™试剂盒 |
LITMUS 28i 载体经 EcoRV（平末端）或 HindIII（粘性末端）切割后，用小牛肠磷酸酶进行处理和凝胶纯化。使用快速连接试剂盒将 HaeIII 消化后的 ΦX174 DNA 插入片段（平末端）和 HindIII 消化后的 λ DNA 插入片段（粘性末端）连接到各自的载体中，插入片段与载体的比例 3:1。将连接产物转化到化学感受态大肠杆菌 DH-5α 细胞中，并在 37℃ 条件下 LB-amp 平板上过夜培养。

1X 快速连接反应缓冲液：
66 mM Tris-HCl
10 mM MgCl2
1 mM DTT
1 mM ATP
7.5% 聚乙二醇（PEG6000）
pH 7.6，25℃

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产品类别:
DNA Ligases Products

应用:
Cloning Ligation,
Fast Cloning: Accelerate your cloning workflows with reagents from NEB

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M2200S     -20    
        Quick Ligase M2200SVIAL -20 1 x 0.03 ml Not Applicable
        Quick Ligation Reaction Buffer B2200SVIAL -20 1 x 1 ml 2 X
    • M2200L     -20    
        Quick Ligase M2200LVIAL -20 1 x 0.15 ml Not Applicable
        Quick Ligation Reaction Buffer B2200SVIAL -20 4 x 1 ml 2 X

  • 优势和特性

    应用特性

    克隆到载体
    文库构建
    T/A 克隆
    连接子连接
    线性 DNA 重新环化

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    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  • 注意事项

    1. 为确保成功连接和转化，应控制如下重要参数。
      细胞：感受态细胞的效率可能相差几个数量级。观察到的连接效率与用于转化的感受态细胞效率直接相关。转化未切割载体作为对照，以用于比较。
      电转化：电穿孔可以将转化效率提高几个数量级。在将快速连接反应的产物用于电转化之前，必须降低 PEG 浓度。我们推荐使用离心柱提法纯化。
      DNA：用于连接的纯化 DNA 可溶于 dH2O（推荐使用 Milli-Q™ 水或同等纯度的水）；也可使用 TE 或其它稀释缓冲液。为获得最佳连接效果，在添加 2X 快速连接缓冲液之前，DNA 和插入片段的体积应为 10 μl。若 DNA 体积大于 10 μl，则相应增加 2X 快速连接缓冲液的体积，使其体积为反应体系的 50%，并相应地增加连接酶的体积。为了实现有效连接，载体 + 插入片段的总浓度应在 1 – 10 μg/ml 之间。对于单片段插入，插入片段与载体的最佳比例为 2:1 至 6:1。低于 2:1 就会导致较低的连接效率，高于 6:1 则会导致多片段插入。如果无法确定 DNA 浓度，请以不同的比例进行多个平行的连接。
      时间：使用快速连接™试剂盒进行的大多数连接，在 25℃ 条件下温育 5 分钟或更短时间后即达到终点。温育时间过长并不会提高连接效率。事实上，转化效率反而在连接 1 小时后开始下降；如果反应体系以 25℃ 温育过夜，转化效率最多可降低 75%。
      生物学特性：大肠杆菌会选择丢失一些 DNA 结构，包括反向重复序列和串联重复序列。大肠杆菌无法耐受某些重组蛋白，因此可能会导致转化率较差或菌落数较小。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for the Quick Blunting Kit (E1201)
    2. Transformation Protocol
    3. Quick Ligation Protocol (M2200)

  • 使用指南

    • Tips for Maximizing Ligation Efficiencies

  • 应用实例

    • Efficient Adaptor Ligation for the Preparation of dsDNA Libraries using the Blunt/TA Ligase Master Mix
    • Quick Ligation Kit

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Ligase Selection Chart
    • NEB Diluent and Buffer Table
    • Properties of DNA and RNA Ligases
    • Substrate-based Ligase Selection Chart

  • Web 工具

    • NEBcloner®
    • NEBioCalculator®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What factors can cause incomplete ligation and/or transformation using the Quick Ligation Kit?
    2. Why is my transformation not working and what control reactions should be run?
    3. What is the concentration of T4 DNA Ligase provided in the Quick Ligation Kit?
    4. Can conventional T4 DNA Ligase (400,000 units/ml) be used with the Quick Ligation buffer?
    5. How to calculate the molarity of ends?
    6. The protocol for Quick Ligation Kit indicates the reaction should not beheat inactivated. How can I inactivate the ligation activity?

  • 问题解决指南

    • Troubleshooting Tips for Ligation Reactions