标签归档：耐盐

Salt-T4® 耐盐 DNA 连接酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

如需了解 NEB DNA 连接酶产品质量控制的详细信息，请访问连接酶质控页面。

Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶的耐盐突变体，可催化双链 DNA 或 RNA 中相邻的 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基末端形成磷酸二酯键，比野生型 T4 DNA 连接酶更耐受高盐条件。该酶在盐浓度高达 300 mM 的情况下仍能连接粘性末端，不会丧失任何活性。该酶对其它反应组分（载体或 DNA 插入片段）携带的盐不敏感，并允许连接反应在盐浓度较高的替代反应缓冲液（如 NEBuffer 3.1）中进行。

图 1：与 T4 DNA 连接酶相比，Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶对粘性末端底物表现出更高的耐盐性。

Salt-T4® 耐盐 DNA 连接酶 |

取 400 单位的 T4 DNA 连接酶（NEB #M0202）或 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶（NEB #M0467）与 0.12 μM 荧光标记的 HindIII 酶切片段（粘性末端），在盐量梯度（0 – 1000 mM NaCl）的 1X T4 DNA 连接酶缓冲液中 25℃ 温育 10 分钟。连接产物经毛细管电泳分析。
当盐浓度超过 200 mM 时，T4 DNA 连接酶的活性迅速丧失；当盐浓度高达 500 mM 时，Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶连接粘性末端底物的活性仍保留 > 60%以上。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有编码经基因工程改造的 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶基因的质粒。

产品类别:
DNA Ligases Products

应用:
BioBrick® Assembly,
Cloning Ligation,
NEBridge® Golden Gate Assembly

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0467S     -20    
        Salt-T4® DNA Ligase M0467SVIAL -20 1 x 0.05 ml 400,000 units/ml
        T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        StickTogether™ DNA Ligase Buffer B0535AVIAL -20 1 x 1 ml 2 X
        NaCl B5019AVIAL -20 1 x 1 ml 1,000 mM
    • M0467L     -20    
        Salt-T4® DNA Ligase M0467LVIAL -20 1 x 0.25 ml 400,000 units/ml
        T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        StickTogether™ DNA Ligase Buffer B0535AVIAL -20 3 x 1 ml 2 X
        NaCl B5019AVIAL -20 1 x 1 ml 1,000 mM

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 20 µl 反应体系中，含 100 mM NaCl 的 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液条件下，25℃ 温浴 30 分钟能连接 50% 的 6 µg HindIII 消化的 Lambda DNA 所需的酶量。

    反应条件

    1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
    Incubate at 25°C

    T4 DNA 连接酶反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM ATP
    10 mM DTT
    (pH 7.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

  • 优势和特性

    Features

    • 限制性酶切片段的克隆
    • 将连接子（linkers）和接头（adapters）连接到 DNA 片段的平末端

  • 相关产品

    相关产品

    • 快速末端平齐化™ 试剂盒
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）
    • T4 DNA Ligase
    • Nuclease-free Water

    单独销售的组分

    • T4 DNA 连接酶反应缓冲液

  • 注意事项

    1. ATP 是反应中必不可少的辅因子。这与需要 NAD 作为辅因子的 E. coli DNA 连接酶不同。
    2. 若需将 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶稀释随后以 -20℃ 储存，推荐使用含 50% 甘油的贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001S）；如稀释后立即使用，也可使用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液。

    3. 连接温度

      为方便起见，连接可在室温（20 – 25℃）条件下进行。连接粘性末端（1X T4 DNA 连接酶缓冲液）：在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶，反应 10 分钟。连接平末端或单碱基突出末端（1X StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液）：在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶，反应 10 分钟。切勿通过加热来终止反应，因为 StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液中的 PEG 受热会抑制转化。

  • 参考文献

    1. Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982). P.D. Boyer(Ed.), 5, San Diego: Academic Press.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Salt-T4® DNA Ligase (NEB #M0467)

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Ligase Selection Chart
    • NEB Diluent and Buffer Table
    • Properties of DNA and RNA Ligases
    • Substrate-based Ligase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are some causes of ligation reaction failure that can lead to transformation failure?
    2. When should Salt-T4 DNA Ligase be the enzyme of choice?
    3. Which buffer should I use with Salt-T4 DNA Ligase?
    4. What is the activity of Salt-T4 DNA Ligase in other buffers?
    5. Can this ligase be heat inactivated?
    6. What is the difference between the unit definitions of T4 DNA Ligase (NEB #M0202) and Salt-T4 DNA Ligase (NEB #M0467)?
    7. How much DNA should be used in a ligation using this ligase?
    8. Does Salt-T4 DNA Ligase have a higher tolerance to salt than other ligases?
    9. Can the ligation reaction produced by Salt-T4 DNA Ligase be directly used to transform electrocompetent cells?