乳果糖检测试剂盒 Lactulose Assay Kit

乳果糖检测试剂盒 Lactulose Assay Kit

产品货号:K-LACTUL

品牌:Megazyme
产品品名:乳果糖检测试剂盒
英文品名:Lactulose Assay Kit
规格型号:50 assays

商品说明:
乳果糖快速检测方法—Megazyme乳果糖快速检测试剂盒
Megazyme乳果糖检测试剂盒采用酶法分析原理,可定量检测鲜奶、UHT奶、浓缩乳和奶粉等各种乳品中的乳果糖。
与农业部新标准采用相同的检测原理和方法
该试剂盒采用ISO方法11285:2004,经过改进后,更加快速和灵敏
灵敏度是传统己糖激酶法的两倍
成本低
试剂配制后可稳定保存2年
采用试剂盒形式,包含检测必需的所有酶
提供计算软件,使数据处理更方便
包含标准品
The Lactulose Assay Kit is suitable for the specific, rapid and sensitive measurement and analysis of lactulose in milk and milk-based samples. Reagents included in this kit may also be prepared for use in the procedure described by ISO Method 11285:2004.
UV-method for the determination of Lactulose in milk and
foodstuffs containing dairy products

Principle:
(β-galactosidase)
(1) Lactulose + H2O → D-galactose + D-fructose
(glucose oxidase + catalase + H2O2)
(2) D-Glucose + H2O + O2 → D-gluconic acid + H2O2
(hexokinase)
(3) D-Fructose + ATP → F-6-P + ADP
(phosphoglucose isomerase)
(4) F-6-P → G-6-P
(glucose-6-phosphate dehydrogenase)
(5) G-6-P + NADP+ → gluconate-6-phosphate + NADPH + H+
(gluconate-6-phosphate dehydrogenase)
(6) Gluconate-6-phosphate + NADP+ → ribulose-5-phosphate + NADPH
+ CO2 + H+

Kit size: 50 assays
Method: Spectrophotometric at 340 nm
Reaction time: ~ 120 min
Detection limit: 4.8 mg/L
Application examples:
Milk, dairy products and foods containing milk
Method recognition: Novel method
Advantages

  • Twice the sensitivity of traditional hexokinase based lactulose methods
  • Very cost effective
  • All reagents stable for > 2 years after preparation
  • Mega-Calc™ software tool is available from our website for hassle-free raw data processing
  • Standard included

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D-乳酸检测试剂盒,D-Lactic Acid Assay Kit

D-乳酸检测试剂盒,D-Lactic Acid Assay Kit
名称:D-乳酸检测试剂盒
英文名:D-Lactic Acid Assay Kit
规格:50次
产地:爱尔兰
外观 :五玻璃瓶。
比重 :不适用
在水中的溶解度: 易溶
pH值: 7.0
气味: 无
粉末和液体形式
稳定性: 稳定 5年或以上(冷冻)
成分:
名称 比例
甘氨酰甘氨酸缓冲液 1瓶(玻璃)
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 1瓶(玻璃)
D-谷氨酸丙酮酸转氨酶 1瓶(玻璃)
D-乳酸脱氢酶酶 1瓶(玻璃)
D-乳酸的标准品 1瓶(玻璃)
许多食品和饮料中都发现有D-乳酸.  由乳酸菌产生, D-乳酸存在于牛奶的发酵产品中比如酸奶,腌菜,腌肉和腌鱼中。牛奶、肉、和果汁的质量可以通过测定D-乳酸的含量来确定。在葡萄酒生产中,D-乳酸的产生标志着酒被乳酸菌***。在化学工业中,D-乳酸和L-乳酸都是生产过程中聚合物的原料,比如聚交酯和一些生物学上可降解的聚合物。同时也应用在化妆品和医药品中。
原理:
D-乳酸的定量分析需要两步酶化反应。  第一个反应由D-乳酸脱氢酶(D-LDH)催化,D-乳酸在烟酰腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的催化下,被氧化成丙***酸
然而, 因为反应(1)的移动和D-乳酸和NAD+有着密切的关系,下一步反应需要消耗掉产生的丙***酸 在大量D-谷氨酸的存在下,通过在D-谷氨酸-丙***酸转氨酶(D-GPT)的作用下把丙***酸转化为D-丙氨酸和2-***戊二酸。(2).
以上两个反应中产生的 NADH 的量可以用来计量D-乳酸的量。  NADH的量通过340nm处增加的吸光率来测量。
特异性,敏感度, 线性和准确性:
此方法特异性检测D-乳酸.
此方法特异性检测D-乳酸和L-乳酸。在D-乳酸锂(MW=96.0)的检测中,大约可以预期结果为96%(W/W),L-乳酸锂可以得到98%(W/W)。
检测的灵敏度为0.005 个吸光度单位。相当于样品最大体积为1.50 mL 时,样品浓度为0.107 mg/L(或者 1.60 mg/L ,样品体积0.1 mL) 。检测限为 0.214 mg/L,这是在0.010的吸光度差异,样品最大体积为1.50 mL为得到的 。
D-乳酸检测的线性变化为0.5 到 30 μg 。在重复测定中,同一份样品溶液,可能产生0.005 到 0.010 个吸光光度值的差异。这就相当于样品1.50 mL,样品溶液中D-乳酸的浓度为0.107 到 0.214 mg/L 。如果样品在制备阶段被稀释过,结果要乘以稀释倍数F。如果样品制备阶段,称量过样品,比如10 g/L,可能会产生0.02 到 0.05 g/100 g 的差异。
干扰:
如果D-乳酸的转换在实验指定的时间内(大约5分钟)彻底完成,通常认为是没有发生任何干扰。不过,这个也可以进一步验证,通过在实验的完成时,向比色皿中加入D-乳酸混合物(大约每0.1mL15ug),吸光光度值有会明显增加。
样品中的干扰物质的分析可以通过加入一个内参来确定。需要进行一个标准品定量回收实验,通过这个回收实验(也就是在最初的提取步骤中向样品中加入D-乳酸)可以算出样品在处理和提取过程中的损失量。
D-Lactic Acid (D-Lactate) (Rapid)
For the rapid and specific assay of D-lactic acid in wine, beer, juice, milk, cheese, vinegar and meat products.
Catalogue Number: K-DATE
Content: 50 assays per kit
Appearance Five glass vials.
Specific Gravity not applicable
Solubility in Water Readily soluble.
pH Value 7.0
Odour none
Form powders and liquids
Stability stable in a freezer for five or more years
Ingredients Name CAS Proportion
Glycylglycine buffer 1 vial (glass)
Nicotinamide adenine dinucleotide 1 vial (glass)
D-Glutamate pyruvate transaminase enzyme 1 vial (glass)
D-Lactate Dehydrogenase enzyme 1 vial (glass)
D-Lactic acid standard solution 1 vial (glass)
K-DATE  D-乳酸快速检测试剂盒
乙醛检测试剂盒K-ACHYD13
乙酸 (ACS;分析仪格式)检测试剂盒K-ACETAF13
乙酸(ACS;手工格式)检测试剂盒K-ACET14
乙酸(AK;分析仪格式)检测试剂盒K-ACETAK14
乙酸(RM;快速手工格式)检测试剂盒K-ACETRM15
α-淀粉酶(“Ceralpha”方法)检测试剂盒K-CERA15
氨检测试剂盒K-AMIA16
氨(快速)检测试剂盒K-AMIAR16
直链淀粉 /支链淀粉检测试剂盒K-AMYL17
阿拉伯糖检测试剂盒K-ARAB17
L-阿拉伯糖/ D-半乳糖(快速)检测试剂盒K-ARGA18
阿拉伯木聚糖检测试剂盒K-ARAXYL18
L-精氨酸 /尿素 /氨(快速)检测试剂盒K-LARGE19
L-抗坏血酸检测试剂盒K-ASCO19
L-天冬酰胺酸/ L-谷氨酸酰胺/氨(快速)检测试剂盒K-ASNAM20
阿斯巴甜检测试剂盒K-ASPTM20
可用碳水化合物 /膳食纤维检测试剂盒K-ACHDF21
?-淀粉酶(“Betamyl”方法)检测试剂盒K-BETA21
β-(Mixedlinkage)检测试剂盒K-BGLU22
β-检测试剂盒K-YBGL22
β-葡聚糖酶(麦芽和微生物)检测试剂盒K-MBGL23
K-DATE  D-乳酸快速检测试剂盒
胆固醇检测试剂盒K-CHOL23
柠檬酸检测试剂盒K-CITR24
乙醇检测试剂盒K-ETOH24
蚁酸检测试剂盒K-FORM25
果糖(己糖激酶格式)检测试剂盒K-FRUCHK25
果糖(PAHBAH格式)检测试剂盒K-FRUC26
D-果糖 / D-葡萄糖检测试剂盒K-FRUGL26
D-果糖 / D-葡萄糖 (MegaQuant格式)检测试剂盒K-FRGLMQ27
半乳甘露聚糖检测试剂盒K-GALM27
葡甘露聚糖检测试剂盒K-GLUM28
D-葡萄糖酸 / D-葡萄糖酸内酯检测试剂盒K-GATE28
D-葡糖胺检测试剂盒K-GAME29
D-葡萄糖 (GOPOD格式)检测试剂盒K-GLUC29
D-葡萄糖(己糖激酶格式)检测试剂盒K-GLUHKR/L30
葡糖氧化酶检测试剂盒K-GLOX30
L-谷氨酰胺 /氨(快速)检测试剂盒K-GLNAM31
L-谷氨酸 (MSG)检测试剂盒K-GLUT31
甘油检测试剂盒K-GCROL32
D-3-羟丁酸检测试剂盒K-HDBA32
D-异柠檬酸检测试剂盒K-ISOC33
D-乳酸检测试剂盒K-DATE33
D-/L-乳酸检测试剂盒K-DLATE34
K-DATE  D-乳酸快速检测试剂盒
L-乳酸检测试剂盒K-LATE34
乳糖 / D-半乳糖(快速)检测试剂盒K-LACGAR35
乳糖/蔗糖 / D-半乳糖检测试剂盒K-LACSU35
乳果糖检测试剂盒K-LACTUL36
D-苹果酸检测试剂盒K-DMAL36
L-苹果酸检测试剂盒K-LMALR/L37
L-苹果酸 (Analyser格式)检测试剂盒K-LMALAF37
L-苹果酸(MegaQuant格式)检测试剂盒K-LMALMQ38
麦芽糖/蔗糖/ D-葡萄糖检测试剂盒K-MASUG38
D-甘露醇 / L-阿拉伯糖醇检测试剂盒K-MANOL39
D-甘露糖 / D-果糖 / D-葡萄糖检测试剂盒K-MANGL39
果胶鉴定检测试剂盒K-PECID40
植酸检测试剂盒K-PHYT40
Primary氨基氮 (NOPA)检测试剂盒K-PANOPA41
丙酮酸检测试剂盒K-PYRUV41
棉籽糖/ D-半乳糖检测试剂盒K-RAFGA42
棉籽糖 /蔗糖 / D-葡萄糖检测试剂盒K-RAFGL42
抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR43
D-山梨醇 /木糖醇检测试剂盒K-SORB43
破损淀粉检测试剂盒K-SDAM44
琥珀酸检测试剂盒K-SUCC44
蔗糖 / D-果糖 / D-葡萄糖检测试剂盒K-SUFRG45
K-DATE  D-乳酸快速检测试剂盒
蔗糖 / D-葡萄糖 (GOPOD格式)检测试剂盒K-SUCGL45
总膳食纤维检测试剂盒K-TDFR46
总淀粉 (GOPOD格式)检测试剂盒K-TSTA46
总淀粉(己糖激酶格式)检测试剂盒K-TSTAHK47
海藻糖检测试剂盒K-TREH47
尿素/氨(快速)检测试剂盒K-URAMR48
木聚糖酶 (Azo-Wax格式)检测试剂盒K-AZOWAX48
木聚糖酶(木聚糖酶 AX格式)检测试剂盒K-XYLS49
D-木糖检测试剂盒K-XYLOSE49

内切纤维素酶检测试剂盒

内切纤维素酶检测试剂盒

英文名:Cellulase Assay Kit (CELLG3 Method)
货号:K-CELLG3
规格:180 / 360 assays per kit / 720 (auto-analyser)
市场价: 5537

 纤维素酶是一种重要的酶产品,是一种复合酶,主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成,还有很高活力的木聚糖酶。
提供内切纤维素酶检测试剂盒,色度法(400 nm)测定酶制品和发酵产品中的纤维素酶(内切-1,4-β-葡聚糖酶)。
内切纤维素酶检测试剂盒(CELLG3方法) K-CELLG3
使用高纯度β-葡萄糖苷酶和苯亚甲基阻断,2 – 氯-4 – 硝基苯基-β-Dcellotrioside(BClPNPβ-G3)。 β-葡萄糖苷酶的能力确保测定的可靠的最大的灵敏度。BClPNPβ-G3的水解为苯亚甲基,通过纤维素酶阻断纤维二糖和2-氯-4 -硝基苯基-β-D-葡萄糖, 2-Cl-4-硝基苯基-β-D-葡萄糖通过β-葡萄糖苷酶立即裂解为D-葡萄糖和游离的2 – 氯-4 – 硝基苯酚(ClPNP)。
反应时间:16min
适用样品:酶制品和发酵产品
优点:
价格低廉(每次检测成本)
特异性高
方法简单
包含标准品
 
The CELLG3 assay reagent for the measurement of endo-cellulase (endo-1,4-β-glucanase) contains two components;

1) 4,6-O-benzylidene-2-chloro-4-nitrophenyl-β-D-cellotrioside (BCNPG3) and 2) thermostable β-glucosidase. The benzylidene blocking group prevents any hydrolytic action by the β-glucosidase on BCNPG3.  Incubation with an endo-cellulase generates a non-blocked colourimetric oligosaccharide that is rapidly hydrolysed by the ancillary β-glucosidase.  The rate of formation of 2-chloro-4-nitrophenol is therefore directly related to the hydrolysis of BCNPG3 by the endo-cellulase.  The reaction is terminated and the phenolate colour is developed on addition of Tris buffer solution (pH 9.0).
Please note that a new assay kit (K-CELLG5) is now available for the measurement of endo-cellulase.  The CELLG5 reagent contains a cellopentaose core and exhibits vastly improved sensitivity for some cellulases.  In addition, the exchange of the benzylidene blocking group in CELLG3 for 3-keto-butylidene in CELLG5 improves the substrate’s water solubility significantly, allowing for a reduction in the concentration of DMSO required in the assay.  As DMSO is known to inhibit certain cellulases, this is another benefit in using CELLG5.  Megazyme now recommends the use of K-CELLG5 for all assays for the measurement of endo-cellulase.
Colourimetric method for the determination of 
endo
-1,4-β-glucanase (cellulase) in enzyme preparations and fermentationproducts
Principle:
(endo-1,4-β-glucanase)
(1) 3-Ketobutylidene-G5-β-PNP + H2O → Blocked-GX + G(5-X)-β-PNP
(thermostable β-glucosidase)
(2) G(5-X)-β-PNP + H2O → D-glucose + PNP
(alkaline solution)
(3) PNP → phenolate ion (yellow colour)
Note: PNP = 4-nitrophenol

Kit size:
K-CELLG5-4V 120 / 240 assays (manual) / 480 (auto-analyser)
or
K-CELLG5-2V 60 / 120 assays (manual) / 240 (auto-analyser)
Method:                         Spectrophotometric at 400 nm
Total assay time:           10 min
Detection limit:                3.5 x 10-4 U/mL
Application examples:
Fermentation broths, industrial enzyme preparations, biofuels research
Method recognition:     Novel method

 

直链淀粉/支链淀粉[胶淀粉]检测试剂盒

直链淀粉/支链淀粉[胶淀粉]检测试剂盒

名称:直链淀粉/支链淀粉(胶淀粉)检测试剂盒
产品货号:K-AMYL
产品品名:直链/支链淀粉检测试剂盒
英文品名:Amylose/Amylopectin assay Kit
规格型号:100 assays per kit
规格: 100次
产地:爱尔兰
用途:用于测量谷物和面粉中直链淀粉/支链淀粉的比例和淀粉含量。
标配:四玻璃瓶加两个塑料瓶
在水中的溶解度:易溶
pH值:中性
气味:无
状态:粉末和液体
保持期:10年以上(冰箱内)

      谷类淀粉的许多特性决定其最终用途,这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。这些特性包括糊化和凝胶化,溶解度,抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。因此,淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。

      最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势,电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。然而,这些方法具有不确定性。支链淀粉-碘复合物也可以形成,这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度,并且用比色法测量时,该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量,需要进行校正。Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。 支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法,而且不存在不确定性问题。在指定pH值,温度和离子强度的条件下,ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀,这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。因此,ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分,但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。

前言:
谷类淀粉的许多特性决定其最终用途,这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。这些特性包括糊化和凝胶化,溶解度,抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。因此,淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。
最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势,电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。然而,这些方法具有不确定性。支链淀粉-碘复合物也可以形成,这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度,并且用比色法测量时,该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量,需要进行校正。Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。
支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法,而且不存在不确定性问题。在指定pH值,温度和离子强度的条件下,ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀,这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。因此,ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分,但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。
此方法是Yun和Matheson改进的ConA方法。分析之前用乙醇预处理去除脂质。
直链淀粉/支链淀粉[胶淀粉]检测试剂盒  原理:
淀粉样品通过加热完全地溶解在二甲基亚砜(DMSO)里。用乙醇沉淀淀粉去除其中的脂质,回收沉淀的淀粉。用醋酸/盐溶液溶解沉淀的样品,加入ConA,特异性沉淀支链淀粉,离心去除沉淀。单位体积上清液中的直链淀粉用酶水解为D-葡萄糖,然后用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂进行测定。另外一份单位体积醋酸/盐溶液中的总淀粉同样用酶水解为D-葡萄糖,然后加入葡萄糖氧化酶/过氧化物酶,用比色法测定。
根据ConA沉淀样品的上清液和与总淀粉样品中的GOPOD在510 nm处的吸光光度值之比判断直链淀粉在总淀粉中的含量。
该方法适用于所有的纯淀粉和谷物粉。
精确性
样品如为纯淀粉,相对标准偏差为<5%。
样品如为谷物面粉,相对标准偏差为~10%。
Amylose/Amylopectin Kits
For the measurement of amylose/amylopectin ratio and content in cereal starches and flours. Based on a Con A precipitation procedure.
Content: 100 assays per kit
Appearance Four glass vials plus two plastic vials
Specific Gravity Not applicable
Solubility in Water Most components readily soluble.
pH Value neutral
Odour none
Form Powders and liquid.
Stability stable in a refrigerator for ten or more years
Ingredients
Name Proportion
Concanavelin A 1 vial (glass)
Amyloglucosidase/a-Amylase 1 vial (glass)
Glucose Buffer 1 vial (polypropylene)
Glucose Assay reagent 1 vial (glass)
Glucose standard and Starch reference 1 vial each (glass and plastic)

直链淀粉/支链淀粉(胶淀粉)检测试剂盒组成成分:

瓶子1:冻干的Con A (伴刀豆球蛋白 A concanavalin A) ,200 mg,-20℃下稳定性>5年。(玻璃)

瓶子2:淀粉葡糖苷酶(淀粉葡萄糖苷酶/α-淀粉酶)【200U,条件为消化对硝基苯基β-麦芽糖苷(也就是3300U,条件为pH4.5,40℃下消化淀粉)】加上真菌α-淀粉酶(500U ,条件为pH5.0,40℃下消化 Ceralpha 试剂),2mL,4℃下稳定性>5年。   (玻璃)

瓶子3:GOPOD 试剂缓冲液(葡萄糖缓冲液)。磷酸钾缓冲液(1M,pH7.4),对羟苯甲酸(0.22M)和叠氮化钠(0.02% W/W)。4℃下稳定性> 3年。(聚丙烯)

瓶子4:GOPOD试剂酶(葡萄糖检测试剂 )。葡糖氧化酶(>12,000U)加上过氧化物酶(>650U)和4-氨基安替比林(80mg)。冻干粉,-20℃下稳定性>5年。

瓶子5:D-葡萄糖标准溶液(5 mL,1.0mg/mL)溶于苯甲酸0.2%(w/v)。室温下稳定性>5年。(玻璃)

瓶子6:淀粉参考样品(含有特定含量的直链淀粉),室温下稳定性>5年。(塑料)

试剂制备的准备:

1、用50mlCon A试剂将瓶子1中药品溶解,分成适当的几部分存放在聚丙烯管中,尽可能在-20℃下使用或冷藏。-20℃下稳定性>2年。

2、用20ml醋酸钠缓冲液将瓶子2中的药品溶解,分成适当的几部分存放在聚丙烯管中,

3、用蒸馏水将中的药品(GOPOD 试剂缓冲液)稀释至1L。现配现用。

(注意:如果瓶子3意外存放在-20℃下,一些盐可能会结晶。配制时要确保所有的结晶物质都溶解在1L的蒸馏水中)

4、用20ml GOPOD 试剂缓冲液溶解GOPOD试剂酶,并定量的转移到存放GOPOD 试剂缓冲液的瓶子中,用铝箔封住瓶子,避光保存。这种试剂黑暗中保存,2-5℃下能保存大约3个月,-20℃下稳定性大于12个月。

5、按提供的方法使用D-葡萄糖标准溶液和淀粉参考样品,室温下稳定性>5年。

安全考虑:

1、DMSO对皮肤有刺激性,用的时候要格外小心。它通过皮肤被吸收,对皮肤和眼睛都有刺激性。穿保护装、戴手套,避免溶剂溅出。尽可能在通风橱中进行试验。

2、ConA通过呼吸、皮肤接触或摄入体内,对人体是十分有害的。这种伤害不可逆转,可能会致畸。在使用ConA结晶体球蛋白和含有ConA的溶剂时要穿保护装、戴手套和特制的面具。

3、叠氮化钠是有毒的化学试剂,必须要有专门的处理。它要添加特殊的缓冲液来充当防腐剂。毒性通过缓冲可以被消除,但是缓冲液必须在4℃下保存。

缓冲液或溶剂:

1、乙酸钠缓冲液(10mM,pH 4.5)

加5.9ml1.05g/ml的冰醋酸到900ml的蒸馏水中用4g/100ml的NaOH溶液调pH到4.5(大约30ml),加0.2g叠氮化钠,用蒸馏水定容至1L。室温下稳定性>2年。

2、ConA 浓缩液(600 mM, pH 6.4 乙酸钠缓冲液)

称取49.2g无水醋酸钠,175.5g氯化钠,0.5gCaCl2.2H2O ,0.7 gMgCl2.6H2O 和0.7 g MnCl2.4H2O ,用900 mL 蒸馏水将其溶解逐滴加入冰醋酸调pH为6.4,再用蒸馏水定容至1L。4℃下保存2周。(注意:配制这种复合缓冲液时,pH的调节特别重要,如果pH低于

6.4,就会有沉淀物形成,就算pH再调回来,沉淀物也不会溶解。结果会导致缓冲液必须丢弃重新配制。)

3、ConA 溶液(使用浓度)

将30ml ConA 浓缩液用蒸馏水稀释至100ml。现配现用。

4、DMSO

分析纯试剂。室温下可保存5年。

预处理:淀粉样品事先用乙醇进行预处理,除去脂质。如果样品没有用乙醇进行预处理,在某些样品中测得的直链淀粉含量会低50%。

实验步骤:

A、淀粉预处理

1、准确称取淀粉或面粉样品至10ml的样品管中。记录样品重量精确到0.1mg。

2、加1ml DMSO至试管,在漩涡混合器中慢速混匀,在沸水浴中加热直至分散(大约1分钟)确保淀粉没有结团结块。

3、密封试管,高速混匀。沸水浴加热15min,再高速间歇混匀。

4、室温放置大约5min,加2ml 95%乙醇,混匀,再加4ml乙醇,盖上盖子,颠倒混匀。形成淀粉沉淀物,将试管静止15min(条件允许过夜静止)。

5、2000r,5min离心,弃去上清液,倒置在纸巾上10min,确保乙醇全部挥发。在接下来直链淀粉和淀粉的测定中使用此沉淀物。

6、加2ml DMSO到淀粉沉淀物中,将试管沸水浴15min(间或混匀),确保没有块状。

7、从沸水浴中取出试管,立即加入4ml ConA 溶液,将试管中药品转移至25ml容量瓶中。用 ConA 溶液定容。

(整个过程必须在2h内完成)

B、支链淀粉- ConA 沉淀物和直链淀粉的测定

1、量取1mlA试剂到2ml的试管中,加0.54ml的ConA 溶液,盖上盖子,反复颠倒,混匀。避免样品起泡。

2、室温静置1h。14000r,10min,室温下离心。

3、转移1ml的上清液到15ml的离心管中,,加3ml100mM醋酸钠缓冲液,pH4.5,混合药品。轻轻塞住管口,沸水浴5min,使ConA变性。

4、将试管在40℃下水浴,平衡5min,,加1ml淀粉转葡萄糖苷酶和a-淀粉酶的混合物,40摄氏度下反应30min,2000r离心5min。

5、准确量取1ml上清液,加4ml GOPOD试剂,40摄氏度下反应20min,使空白试剂和D-葡萄糖标准液同时反应。

6、在510nm下测定每一个样品和D-葡萄糖标准液的吸光光度值。

C、总淀粉的测定

1、将0.5mlA溶液和4ml100mM乙酸钠溶液混合,pH 4.5

2、加1ml淀粉转葡萄糖苷酶和a-淀粉酶的混合物,40摄氏度下反应10min,

3、准确量取1ml上清液,加4ml GOPOD试剂,40摄氏度下反应20min。这个反应必须让样品和标准液按B部分同时进行。

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