直链淀粉/支链淀粉[胶淀粉]检测试剂盒

直链淀粉/支链淀粉[胶淀粉]检测试剂盒

名称:直链淀粉/支链淀粉(胶淀粉)检测试剂盒
产品货号:K-AMYL
产品品名:直链/支链淀粉检测试剂盒
英文品名:Amylose/Amylopectin assay Kit
规格型号:100 assays per kit
规格: 100次
产地:爱尔兰
用途:用于测量谷物和面粉中直链淀粉/支链淀粉的比例和淀粉含量。
标配:四玻璃瓶加两个塑料瓶
在水中的溶解度:易溶
pH值:中性
气味:无
状态:粉末和液体
保持期:10年以上(冰箱内)

      谷类淀粉的许多特性决定其最终用途,这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。这些特性包括糊化和凝胶化,溶解度,抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。因此,淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。

      最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势,电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。然而,这些方法具有不确定性。支链淀粉-碘复合物也可以形成,这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度,并且用比色法测量时,该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量,需要进行校正。Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。 支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法,而且不存在不确定性问题。在指定pH值,温度和离子强度的条件下,ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀,这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。因此,ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分,但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。

前言:
谷类淀粉的许多特性决定其最终用途,这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。这些特性包括糊化和凝胶化,溶解度,抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。因此,淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。
最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势,电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。然而,这些方法具有不确定性。支链淀粉-碘复合物也可以形成,这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度,并且用比色法测量时,该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量,需要进行校正。Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。
支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法,而且不存在不确定性问题。在指定pH值,温度和离子强度的条件下,ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀,这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。因此,ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分,但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。
此方法是Yun和Matheson改进的ConA方法。分析之前用乙醇预处理去除脂质。
直链淀粉/支链淀粉[胶淀粉]检测试剂盒  原理:
淀粉样品通过加热完全地溶解在二甲基亚砜(DMSO)里。用乙醇沉淀淀粉去除其中的脂质,回收沉淀的淀粉。用醋酸/盐溶液溶解沉淀的样品,加入ConA,特异性沉淀支链淀粉,离心去除沉淀。单位体积上清液中的直链淀粉用酶水解为D-葡萄糖,然后用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂进行测定。另外一份单位体积醋酸/盐溶液中的总淀粉同样用酶水解为D-葡萄糖,然后加入葡萄糖氧化酶/过氧化物酶,用比色法测定。
根据ConA沉淀样品的上清液和与总淀粉样品中的GOPOD在510 nm处的吸光光度值之比判断直链淀粉在总淀粉中的含量。
该方法适用于所有的纯淀粉和谷物粉。
精确性
样品如为纯淀粉,相对标准偏差为<5%。
样品如为谷物面粉,相对标准偏差为~10%。
Amylose/Amylopectin Kits
For the measurement of amylose/amylopectin ratio and content in cereal starches and flours. Based on a Con A precipitation procedure.
Content: 100 assays per kit
Appearance Four glass vials plus two plastic vials
Specific Gravity Not applicable
Solubility in Water Most components readily soluble.
pH Value neutral
Odour none
Form Powders and liquid.
Stability stable in a refrigerator for ten or more years
Ingredients
Name Proportion
Concanavelin A 1 vial (glass)
Amyloglucosidase/a-Amylase 1 vial (glass)
Glucose Buffer 1 vial (polypropylene)
Glucose Assay reagent 1 vial (glass)
Glucose standard and Starch reference 1 vial each (glass and plastic)

直链淀粉/支链淀粉(胶淀粉)检测试剂盒组成成分:

瓶子1:冻干的Con A (伴刀豆球蛋白 A concanavalin A) ,200 mg,-20℃下稳定性>5年。(玻璃)

瓶子2:淀粉葡糖苷酶(淀粉葡萄糖苷酶/α-淀粉酶)【200U,条件为消化对硝基苯基β-麦芽糖苷(也就是3300U,条件为pH4.5,40℃下消化淀粉)】加上真菌α-淀粉酶(500U ,条件为pH5.0,40℃下消化 Ceralpha 试剂),2mL,4℃下稳定性>5年。   (玻璃)

瓶子3:GOPOD 试剂缓冲液(葡萄糖缓冲液)。磷酸钾缓冲液(1M,pH7.4),对羟苯甲酸(0.22M)和叠氮化钠(0.02% W/W)。4℃下稳定性> 3年。(聚丙烯)

瓶子4:GOPOD试剂酶(葡萄糖检测试剂 )。葡糖氧化酶(>12,000U)加上过氧化物酶(>650U)和4-氨基安替比林(80mg)。冻干粉,-20℃下稳定性>5年。

瓶子5:D-葡萄糖标准溶液(5 mL,1.0mg/mL)溶于苯甲酸0.2%(w/v)。室温下稳定性>5年。(玻璃)

瓶子6:淀粉参考样品(含有特定含量的直链淀粉),室温下稳定性>5年。(塑料)

试剂制备的准备:

1、用50mlCon A试剂将瓶子1中药品溶解,分成适当的几部分存放在聚丙烯管中,尽可能在-20℃下使用或冷藏。-20℃下稳定性>2年。

2、用20ml醋酸钠缓冲液将瓶子2中的药品溶解,分成适当的几部分存放在聚丙烯管中,

3、用蒸馏水将中的药品(GOPOD 试剂缓冲液)稀释至1L。现配现用。

(注意:如果瓶子3意外存放在-20℃下,一些盐可能会结晶。配制时要确保所有的结晶物质都溶解在1L的蒸馏水中)

4、用20ml GOPOD 试剂缓冲液溶解GOPOD试剂酶,并定量的转移到存放GOPOD 试剂缓冲液的瓶子中,用铝箔封住瓶子,避光保存。这种试剂黑暗中保存,2-5℃下能保存大约3个月,-20℃下稳定性大于12个月。

5、按提供的方法使用D-葡萄糖标准溶液和淀粉参考样品,室温下稳定性>5年。

安全考虑:

1、DMSO对皮肤有刺激性,用的时候要格外小心。它通过皮肤被吸收,对皮肤和眼睛都有刺激性。穿保护装、戴手套,避免溶剂溅出。尽可能在通风橱中进行试验。

2、ConA通过呼吸、皮肤接触或摄入体内,对人体是十分有害的。这种伤害不可逆转,可能会致畸。在使用ConA结晶体球蛋白和含有ConA的溶剂时要穿保护装、戴手套和特制的面具。

3、叠氮化钠是有毒的化学试剂,必须要有专门的处理。它要添加特殊的缓冲液来充当防腐剂。毒性通过缓冲可以被消除,但是缓冲液必须在4℃下保存。

缓冲液或溶剂:

1、乙酸钠缓冲液(10mM,pH 4.5)

加5.9ml1.05g/ml的冰醋酸到900ml的蒸馏水中用4g/100ml的NaOH溶液调pH到4.5(大约30ml),加0.2g叠氮化钠,用蒸馏水定容至1L。室温下稳定性>2年。

2、ConA 浓缩液(600 mM, pH 6.4 乙酸钠缓冲液)

称取49.2g无水醋酸钠,175.5g氯化钠,0.5gCaCl2.2H2O ,0.7 gMgCl2.6H2O 和0.7 g MnCl2.4H2O ,用900 mL 蒸馏水将其溶解逐滴加入冰醋酸调pH为6.4,再用蒸馏水定容至1L。4℃下保存2周。(注意:配制这种复合缓冲液时,pH的调节特别重要,如果pH低于

6.4,就会有沉淀物形成,就算pH再调回来,沉淀物也不会溶解。结果会导致缓冲液必须丢弃重新配制。)

3、ConA 溶液(使用浓度)

将30ml ConA 浓缩液用蒸馏水稀释至100ml。现配现用。

4、DMSO

分析纯试剂。室温下可保存5年。

预处理:淀粉样品事先用乙醇进行预处理,除去脂质。如果样品没有用乙醇进行预处理,在某些样品中测得的直链淀粉含量会低50%。

实验步骤:

A、淀粉预处理

1、准确称取淀粉或面粉样品至10ml的样品管中。记录样品重量精确到0.1mg。

2、加1ml DMSO至试管,在漩涡混合器中慢速混匀,在沸水浴中加热直至分散(大约1分钟)确保淀粉没有结团结块。

3、密封试管,高速混匀。沸水浴加热15min,再高速间歇混匀。

4、室温放置大约5min,加2ml 95%乙醇,混匀,再加4ml乙醇,盖上盖子,颠倒混匀。形成淀粉沉淀物,将试管静止15min(条件允许过夜静止)。

5、2000r,5min离心,弃去上清液,倒置在纸巾上10min,确保乙醇全部挥发。在接下来直链淀粉和淀粉的测定中使用此沉淀物。

6、加2ml DMSO到淀粉沉淀物中,将试管沸水浴15min(间或混匀),确保没有块状。

7、从沸水浴中取出试管,立即加入4ml ConA 溶液,将试管中药品转移至25ml容量瓶中。用 ConA 溶液定容。

(整个过程必须在2h内完成)

B、支链淀粉- ConA 沉淀物和直链淀粉的测定

1、量取1mlA试剂到2ml的试管中,加0.54ml的ConA 溶液,盖上盖子,反复颠倒,混匀。避免样品起泡。

2、室温静置1h。14000r,10min,室温下离心。

3、转移1ml的上清液到15ml的离心管中,,加3ml100mM醋酸钠缓冲液,pH4.5,混合药品。轻轻塞住管口,沸水浴5min,使ConA变性。

4、将试管在40℃下水浴,平衡5min,,加1ml淀粉转葡萄糖苷酶和a-淀粉酶的混合物,40摄氏度下反应30min,2000r离心5min。

5、准确量取1ml上清液,加4ml GOPOD试剂,40摄氏度下反应20min,使空白试剂和D-葡萄糖标准液同时反应。

6、在510nm下测定每一个样品和D-葡萄糖标准液的吸光光度值。

C、总淀粉的测定

1、将0.5mlA溶液和4ml100mM乙酸钠溶液混合,pH 4.5

2、加1ml淀粉转葡萄糖苷酶和a-淀粉酶的混合物,40摄氏度下反应10min,

3、准确量取1ml上清液,加4ml GOPOD试剂,40摄氏度下反应20min。这个反应必须让样品和标准液按B部分同时进行。

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α-淀粉酶/液化酶/淀粉糖化酶检测试剂盒

α-淀粉酶/液化酶/淀粉糖化酶检测试剂盒

产品货号:K-CERA
产品品名:α-淀粉酶检测试剂盒
英文品名:Ceralpha: α-Amylase Assay Kit
规格型号:100 assays per kit
α-淀粉酶能水解淀粉中的α-1,4-葡萄糖苷键。能将淀粉切断成长短不一的短链糊精和少量的低分子糖类,从而使淀粉糊的黏度迅速下降,即起到降低稠度和“液化”的作用,所以此类淀粉酶又称为液化酶。
上海西宝生物提供原装进口:α-淀粉酶检测试剂盒,采用比色法(400nm)测定食品、饲料和发酵产品中a -淀粉酶,咨询热线:400-021-8158
原理:
反应时间:20min
检测限:0.05U/mL
适用样品:谷物粉,发酵液和其他原料
优点:
  成本低
所有试剂配制后的稳定性>2年
特异性高
方法简单
包含标准品
认证方法
AOAC(方法2002. 01),AACC(方法22. 02),ICC (标准号303),RACI(标准方法)和CCFRA(面粉检测工作组方法0018)
REFERENCES:
1. McCleary, B. V. & Sheehan, H. (1987). Measurement of Cereal α-Amylase: A New Assay Procedure. Journal of Cereal Science, 6, 237-251.
2. Sheehan, H. & McCleary, B. V. (1988). A New Procedure for the Measurement of Fungal and Bacterial α?Amylase.Biotechnology Techniques, 2, 289-292.
3. McCleary, B. V., McNally, M., Monaghan, D. & Mugford, D. C. (2002). Measurement of α-amylase activity in white wheat flour, milled malt, and microbial enzyme preparations using the Ceralpha Assay collaborative study. J. AOAC International, 85, 1096-1102.

纤维素酶检测试剂盒

纤维素酶检测试剂盒[CellG5法], Cellulase Assay Kit (CellG5 Method)

货号:K-CellG5
中文品名:纤维素酶检测试剂盒[CellG5法]
品名:Cellulase Assay Kit (CellG5 Method)
规格1:K-CellG5-4V 120/240次(手工)/480次(自动分析仪)
规格2:K-CellG5-2V 60/120次(手工)/240次(自动分析仪)
说明:CellG5检测试剂盒用于检测纤维素内切酶(1,4 -β-葡聚糖内切酶)包含两种组分:1) 4,6-O-(3-Ketobutylidene)-4-nitrophenyl-β-D-cellopentaoside (BPNPG5) 和 2)热稳定的β-葡萄糖苷酶。 酮阻断基团可阻止β-葡萄糖苷酶对BPNPG5的水解。通过纤维素内切酶的培养可生成非阻断的显色寡糖,被β-葡萄糖苷酶迅速水解。产生4-硝基苯酚的速率与β-葡萄糖苷酶水解BPNPG5直接相关。加入Tris缓冲液(pH 9.0)后可终止反应,并形成苯酚显色产物。
CellG5检测法代表了代表了纤维素酶测量方法的巨大进步。传统的纤维素酶检测依赖于酶底物,例如羧甲基纤维素,微晶纤维素,纤维低聚糖,CMC滤纸,染色多糖,包括CMC刚果红或纤维素天青。
应用:纤维素酶检测试剂盒[CellG5法]。

原理:
比色法测定酶制剂、发酵产品中1,4 -β-葡聚糖内切酶(纤维素酶)的含量。
纤维素酶检测试剂盒 (K-CellG5)检测原理
检测方法:分光光度法 @400 nm
反应时间:10min
检测限:3.5 x 10-4 U/mL
应用案例:
发酵液,工业酶制剂和生物燃料研究。
方法识别:
新方法
试剂盒组成:
Bottle 1: (x2) 或 (x4) 每瓶含有4,6-O-(3-Ketobutylidene)-4-nitrophenyl-β-D-cellopentaoside (BPNPG5)溶于3毫升含有0.02% w/v叠氮钠的10% DMSO水溶液。
-20°C下稳定超过4年。
Bottle 2: (x 2) 热稳定的β-葡萄糖苷酶(0.50 mL, 600 U/mL)溶于含有0.02% w/v叠氮钠的 50% w/v 硫酸铵溶液。
4°C下稳定超过4年。
Bottle 3: 木霉纤维素酶标准溶液 (5 mL, ~ 3 U/mL; 准确至见瓶标签) 溶于含有0.02% w/v叠氮钠的50% 的丙三醇水溶液。
-20°C下稳定超过4年。
优点:

所有试剂可稳定超过4年
价格非常具有竞争力
完全针对纤维素酶(1,4-葡聚糖内切酶)
常规操作,非常灵敏
检测方法十分简单,适合仪器分析
包含标准
参考文献:
Novel substrates for the measurement of endo-1,4-β-glucanase (endo-cellulase). McCleary, B. V., Mangan, D., Daly, R., Fort, S., Ivory, R. & McCormack, N. (2014). Carbohydrate Research, 385, 9-17.
Quantitative fluorometric assay for the measurement of endo-1,4-β-glucanase. Mangan, D., McCleary, B. V., Liadova, A., Ivory, R. & McCormack, N. (2014). Carbohydrate Research, 395, 47-51.
A novel automatable enzyme-coupled colorimetric assay for endo-1,4-β-glucanase (cellulase). Mangan, D., Cornaggia, C., McKie, V., Kargelis. T. & V. McCleary, B. V. (2016). Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408(15), 4159-4168.
说明书下载地址:https://secure.megazyme.com/files/Booklet/K-CellG5_DATA.pdf

膳食纤维总量检测试剂盒 Total Dietary Fibre Assay Kit

膳食纤维总量检测试剂盒 Total Dietary Fibre Assay Kit

       在生命科学领域,上海金畔生物为业界提供了丰富的实验室和生物医药生产研发的产品。庆祝上海金畔生物正式成为膳食纤维总量检测试剂盒 Total Dietary Fibre Assay Kit的签约代理商,在这里要感谢广大客户多年来对上海金畔生物科技有限公司的支持和厚爱,我们将一如既往的为广大客户带来膳食纤维总量检测试剂盒 Total Dietary Fibre Assay Kit高品质的产品和服务,欢迎广大新老客户来电咨询。
膳食纤维总量检测试剂盒 Total Dietary Fibre Assay Kit
规格:200 assays per kit
库存状态:现货
      膳食纤维是一种多糖,它既不能被消化吸收,也不能产生能量。因此,曾一度被认为是一种“无营养物质”。后来发现了膳食纤维具有相当重要的生理作用。并被营养学界补充认定为第七类营养素,和传统的六类营养素——蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质与水并列。

1.可溶性膳食纤维(来源于果胶、藻胶、魔芋等。魔芋盛产于我国四川等地,主要成分为葡甘聚糖)
2.不可溶性膳食纤维(全谷类粮食,其中包括麦麸、麦片、全麦粉及糙米、燕麦全谷类食物、豆类、蔬菜和水果等。)
  1. 简介:

膳食纤维是指碳水化合物及其相类似物质的总和,包括多糖、寡糖、木质素以及相关的植物物质。主要有纤维素、半纤维素、果胶及亲水胶体物质,如树胶、海藻多糖等组分;另外还包括植物细胞壁中所含有的木质素;不被人体消化酶所分解的物质,如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纤维素、黏质、寡糖以及少量相关成分,如蜡纸、角质、软木脂等。
总膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43,AOAC 985.29,AACC32-07和AACC 32-05方法开发的,也适用于其它方法,如AACC Method 32-21,AACC method32-06。

  1. 检测原理

脱脂(如大于10%)干燥后的样品经热稳定a-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化,酶解液通过乙醇沉淀、过滤,乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重,得到总膳食纤维(TDF)残渣;
酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣,干燥后称重,得到不溶性膳食纤维(IDF)残渣;
滤液用乙醇沉淀,过滤、干燥、称重,得到可溶性膳食纤维(SDF)残渣。
TDF、IDF和SDF的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。
该检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶,酶的活力是标准化的,而标准化的a-淀粉酶的活力在测量抗性淀粉是公认的。
淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶,而其他常用的酶制剂中常含有这种污染物,这将导致溶解和低估β-葡聚糖。
该试剂盒提供的酶都是稳定的液体,可以保存到试剂盒有效期,并且是直接应用液,不需要使用前再溶解。

  1. 用途

适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品中的总膳食纤维(TDF)、不溶性
膳食纤维(IDF)和可溶性膳食纤维(SDF)的检测。

  1. 提供试剂及材料

每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200个试验,如另外需要可单独订货:
Bottle 1 ,1瓶:
热稳定a-淀粉酶(20mL,~ 3,000 U/mL,Ceralpha method;~ 10,000 U/mL on
soluble starch。).
Bottle 2,1瓶:
纯化的蛋白酶(20mL,50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。)
Bottle 3,2瓶:
淀粉葡萄糖苷酶(20mL,3300 U/mL on soluble starch。)
总计:80ml(4瓶20ml包装)
另外,实验中需要用到硅藻土需要单独购买。
其他相关试剂盒:
膳食纤维质控试剂盒(货号:K-TSCK)
质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度,含下表中所列物质每种一瓶,并附有技术数据单(K-TSCK),盒中每种物质足够10次测试用。

品种 数量
β-葡聚糖(大麦) 1.0g
高直链玉米淀粉 10.0g
淀粉(小麦) 10.0g
酪蛋白 5.0g
果胶 1.0g 
  1. 需要的设备和试剂

5.1 设备

  1. 高型无导流口烧杯:400mL或600mL
  2. 坩埚:具粗面烧结玻璃板,孔径40-60 μm。清洗后在马福炉中525℃灰化6小时或过夜,用真空泵除去硅藻土和灰分,室温下用2%清洗液浸泡1小时,用水和蒸馏水冲洗干净,用15 mL丙酮冲洗后风干,加1g硅藻土到干燥的坩埚中,在130℃干燥至恒重,在干燥器中冷却1小时,记下坩埚(包括硅藻土)的重量。
  3. 真空溶剂过滤装置:真空泵或有调节装置的抽吸器,1L的抽滤瓶,侧壁有抽滤口,以及抽滤瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。
  4. 恒温振荡水浴:95-100℃
  5. 分析天平:感量0.1mg
  6. 天平(台秤):4 000g量程,感量0.1g
  7. 马福炉:525±5°C,
  8. 烘箱:103±2℃,130±3℃
  9. 真空干燥箱
  10. 干燥器:二氧化硅或等同干燥剂
  11. PH计,具有温度补偿功能。
  12. 微量凯氏定氮仪。
  13. 移液器,50-200 μL,5 mL,一次性移液吸头。
  14. 计时器。
  15. 橡胶刮勺
  16. 磁力搅拌器

5.2 试剂

  1. 95%乙醇(体积比),
  2. 78 %乙醇:取821mL95%乙醇置于容量瓶中,用水稀释到刻度,混匀。
  3. 丙酮
  4. 蒸馏水或去离子水
  5. 清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).,配成2%液体
  6. MES/TRIS缓冲液(0.05mol/L):称取19.52g (MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g

(TRIS) (Sigma,T1503),用1.7L蒸馏水溶解,用6mol/L氢氧化钠调节PH至
8.2±0.1,加水稀释到2L(注意24℃时PH值为8.2,20℃时PH值为8.3,27-28℃
时PH值为8.1)

  1. 盐酸溶液(0.561 mol/L):取93.5mL 6 mol/L的盐酸,加入700mL水中,混匀

后用水定容到1L。

  1. 氢氧化钠
  2. PH值标准缓冲液:PH值为 4.0,7.0 和10.0。

 

  1. 酶的纯化和标准化

6.1 根据AACC/AOAC的膳食纤维检测方法,必须确保酶的纯度。
6.1.1 淀粉葡萄糖苷酶被木聚糖酶、纤维素酶和果胶酶污染,会低估β-葡聚糖、
阿拉伯木聚糖和果胶的含量。
6.1.2 热稳定a-淀粉酶被污染,会影响抗性淀粉的测量。
6.1.3 蛋白酶被4-β-葡聚糖酶污染,会低估β-葡聚糖的含量。
6.1.4 如不是使用该酶,请参考下面方法测定。

Test Sample Activity Tested Sample Wt(g) Expected Recovery (%)
Citrus pectin Pectinasea 『1』 0.1 90-95 『3』
ß-Glucan (barley) ß-glucanase (cellulase) 『1』 0.1 95-100
Wheat starch Amylase 『2』 1.0 0-1
Casein Protease 『2』 0.3 0-2
High amylose starch Amylase 1.0 ~30   『4』

注解:
『1』:没有酶活力作用。
『2』:最大酶活力作用
『3』:除很少量的柑橘果胶全部沉淀
『4』:含有大量抗性淀粉,准确回收率的数值影响热稳定a-淀粉酶的使用量。
6.2 根据AACC/AOAC的膳食纤维检测方法,必须对酶标准化测定,如果不是使用该的酶,请按以下方法测定
6.2.1 淀粉葡萄糖苷酶,0.2 mL,
— 酶活力表示方法1:淀粉/葡萄糖酶-过氧化物酶法,3300 U/mL,1个酶活力单位定义为:40°C,PH值4.5时,每分钟释放1 μmol葡萄糖所需要的酶量。
— 酶活力表示方法2:对-硝基苯基-b-麦芽糖苷(PNPBM)法,200 U/mL, 1个酶活力单位(1PNP单位))定义为:40°C,有过量萄糖苷酶存在下,每分钟从对硝基苯基-β-麦芽糖苷释放1 μmol 对硝基苯基所需要的酶量。
6.2.2 热稳定a-淀粉酶,0.05 mL,
— 酶活力表示方法1:以淀粉为底物,以Nelson/Somogyi还原糖表示,10000U/mL ,1个酶活力单位定义为:40°C,PH值6.5时,每分钟释放1 μmol葡萄糖所需要的酶量。
— 酶活力表示方法2:对硝基苯基麦芽糖为底物,3,000 U/mL(Ceralpha),1个酶活力单位定义为:40°C,PH值6.5时,每分钟释放1 μmol对-硝基苯基所需要的酶量。
6.2.3 蛋白酶,0.10 mL
— 酶活力表示方法1:酪蛋白测试,350 U/mL或50 mg/mL或7 Tyrosine U/mL,1个酶活力单位定义为:40°C,PH值8.0时,每分钟从可溶性酪蛋白中水解出(并溶于三氯乙酸)1 μmol酪氨酸所需要的酶量。
— 酶活力表示方法2:偶氮酪蛋白测试,350 U/mL或50 mg/mL或7 Tyrosine U/mL,1个内肽酶活力单位定义为:40°C,PH值8.0时,每分钟从可溶性酪蛋白中水解出(并溶于三氯乙酸)1μmol酪氨酸所需要的酶量。该偶氮酪蛋白(货号:S-AZCAS).
 

  1. 检测步骤

7.1 试样制备
准确称取双份试样各1 g,质量差小于0.005g,精确到0.1mg,置于400mL或600mL高型烧杯中,同时制备双份空白样,在每个烧杯中加入40 mL PH值8.2的MES-TRIS缓冲液,磁力搅拌,直到试样完全分散到缓冲液中。
7.2 热稳定a-淀粉酶酶解:加入50 μL热稳定a-淀粉酶溶液,加盖铝箔,置于95-100°C恒温振荡水浴中持续振摇,当所有烧杯全部放入水浴开始计时,反应35分钟。
7.3 冷却:将烧杯取出玲却到60°C,除去铝箔盖,用刮勺将烧杯内壁和底部的胶状物刮下,用10 mL蒸馏水冲洗烧杯壁和刮勺。
7.4 蛋白酶酶解:在每个烧杯中各加入100 μL蛋白酶溶液,加盖铝箔,置于60°C恒振荡水浴中,当烧杯内温度达到60°C开始计时,持续反应30分钟。
7.5 PH值调节:反应30分钟后,边搅拌边加入0.561 mol/L盐酸,严格控制60°C,用 1mol/L氢氧化钠溶液或 1mol/L盐酸溶液,控制PH值在4.5±0.2。
7.6 淀粉葡萄糖苷酶酶解:在上述溶液中边搅拌边加入200 μL淀粉葡萄糖苷酶溶液,加盖铝箔,置于60°C恒温振荡水浴中,持续振摇,当烧杯内温度达到60°C开始计时,反应30分钟。

  1. 测定

8.1 不溶性膳食纤维测定:
8.1.1 过滤洗涤:试样酶解液全部转移到坩埚中过滤,残渣用10mL预热到70°C的蒸馏水洗涤两次,合并过滤液,转移至另一600mL高脚烧杯中,备测可溶性膳食纤维。残渣分别用10mL 95%乙醇和丙酮洗涤两次,抽滤去除洗涤液,将坩埚连同残渣在103°C烘干过夜,将坩埚置于干燥器中冷却1小时,称重(包括坩埚、膳食纤维残渣和硅藻土),精确至0.1mg,减去坩埚和硅藻土的干重,计算残渣质量。
8.1.2 蛋白质和灰分测定:称完质量的残渣和硅藻土的混合物,一份用凯氏定氮法,以N×6.25为换算系数,计算蛋白质质量。另一份在525°C灰化5小时,于干燥器中冷却,精确称量坩埚总量(精确至0.1mg)减去坩埚和硅藻土干重,计算灰分质量。
8.2 可溶性膳食纤维测定
8.2.1 计算滤液体积:将不可溶性膳食纤维过滤后的滤液收集到600mL的高型烧杯中,通过烧杯+滤液总重扣除烧杯质量的方法估算滤液的体积。
8.2.2 沉淀:将滤液加入4倍体积预热60°C的95%乙醇,或取80g滤液加入320mL预热60°C的95%乙醇室温下沉淀1小时。
8.2.3 过滤:在干燥的坩埚中加入1g硅藻土,70°C真空干燥至恒重,记录坩埚的质量(精确到0.1mg)。用15mL 78%乙醇将硅藻土润湿,并用真空溶剂过滤装置在抽真空条件下,使硅藻土平铺于坩埚中。将样品酶解液缓慢转移至对应的坩埚中,抽滤。用刮勺和78%乙醇将所有残渣转至坩埚中。
8.2.4 洗涤:分别用15mL 78%乙醇、15mL 95%乙醇和15mL丙酮洗涤残渣各两次,抽滤去除洗涤液后,将坩埚连同残渣在105°C烘干过夜。将坩埚置于干燥器中冷却1小时,称重(包括坩埚、膳食纤维残渣和硅藻土),精确至0.1mg。减去坩埚和硅藻土的干重,计算残渣质量。
8.2.5 蛋白质和灰分测定:称完质量的残渣和硅藻土的混合物,一份用凯氏定氮法,以N×6.25为换算系数,计算蛋白质质量,另一份在525°C灰化5小时,于干燥器中冷却,精确称量坩埚总量(精确至0.1mg)减去坩埚和硅藻土干重,计算灰分质量。
8.3 总膳食纤维检测检测
8.3.1 沉淀:在每份试样中加入预热至60°C的95%乙醇225mL(预热后的体积,如乙醇的温度超过65°C,则加入228mL),乙醇与样液体积比为4:1,取出烧杯,盖上铝箔,室温下沉淀1小时。建议改为:称量酶解液的质量,用天平加入4倍质量的预热的60°C的95%乙醇,4°C冰箱中沉淀过夜。
8.3.2 过滤:在干燥的坩埚中加入1g硅藻土,70°C真空干燥至恒重,记录坩埚的质量(精确到0.1mg)。用15mL 78%乙醇将硅藻土润湿,并用真空溶剂过滤装置在抽真空条件下,使硅藻土平铺于坩埚中。将样品酶解液缓慢转移至对应的坩埚中,抽滤。用刮勺和78%乙醇将所有残渣转至坩埚中。
8.3.3 洗涤:分别用15mL 78%乙醇、15mL 95%乙醇和15mL丙酮洗涤残渣各两次,抽滤去除洗涤液后,将坩埚连同残渣在105°C烘干过夜。将坩埚置于干燥器中冷却1小时,称重(包括坩埚、膳食纤维残渣和硅藻土),精确至0.1mg。减去坩埚和硅藻土的干重,计算残渣质量。
8.3.4 蛋白质和灰分测定:称完质量的残渣和硅藻土的混合物,一份用凯氏定氮
法,以N×6.25为换算系数,计算蛋白质质量。,另一份在525°C灰化5小时,
于干燥器中冷却,精确称量坩埚总量(精确至0.1mg)减去坩埚和硅藻土
干重,计算灰分质量。

  1. 计算:

DF(%)=『(R1+R2)/2-p-A-B』/『(M1+M2)/2』*100%
式中:
DF=样品中膳食纤维含量(TDF、IDF、SDF),%
R1 和R2=双份样品残渣的质量,单位为毫克(mg)
m1 和m2=双份样品的质量,单位为毫克(mg)
A=灰分的质量,
P=蛋白的质量
B=空白=(BR1+BR2)/2-BP-BA
BR1 和BR2=双份试样空白残渣的质量
BP=试样空白蛋白的质量
BA=试样空白灰分的质量
可以使用该的计算软件Mega-CalcTM进行自动计算。
方法二
根据AACC method 32-05 和AOAC Method 985.29方法测定

  1. 仪器设备和同方法一
  2. 试剂和溶液
  3. 280±2.0 mL 95 %乙醇

b.10±0.5 mL 78 %乙醇

  1. 50±0.5 mL缓冲液
  2. 磷酸盐缓冲液(0.08mol/L,PH值6.0): 取1.400g Na2HPO4和9.68g NaH2PO4

溶解在700mL蒸馏水中,用水定容到1L,用PH计检查PH值。

  1. 氢氧化钠溶液(0.275mol/L):去11g氢氧化钠溶解在700mL蒸馏水中,冷却转

移到容量瓶中,用水定容到1L。

  1. 盐酸溶液(0.325 mol/L):取 325 mL 1.0 mol/L 盐酸置于容量瓶中,用水定容

到1L。

  1. 样品准备

总膳食纤维的测定必须是低脂或无脂的干燥样品,取混匀后的样品于70°C真
空干燥过夜,干燥器中冷却,再称重记录重量损失,干样粉碎后过0.3-0.5 mm
筛,若试样不能加热,则冷冻干燥后再粉碎过筛。如果是高脂肪样品(> 10 %),
取经过干燥的样品分别用25mL石油醚脱脂三次,干燥后记录脱脂的质量损失,
最后计算总膳食纤维含量时进行进行校正,粉碎过筛后的干燥试样放在干燥
器中待用。

  1. 分析步骤

准确称取双份试样各1 g,质量差小于0.005g,精确到0.1mg,置于400mL或
600mL高型烧杯中,同时制备双份空白样,在每个烧杯中加入50 mL PH值6.0
的磷酸盐缓冲液,磁力搅拌,直到试样完全分散到缓冲液中,控制PH值6.0±0.1。
4.2 热稳定a-淀粉酶酶解:加入50 μL热稳定a-淀粉酶溶液,加盖铝箔,置于沸腾
水浴中15分钟,每5分钟轻轻振荡一次。当烧杯内的温度到100°C开始计时,
总共大约30分钟。
4.3 冷却:将烧杯取出冷却到室温,加入10 mL 0.275mol/L 的氢氧化钠,调节
PH值在7.5±0.1。
4.4 蛋白酶酶解:在每个烧杯中各加入100 μL蛋白酶溶液,加盖铝箔,置于60°C
恒振荡水浴中,当烧杯温度达到60°C开始计时,持续反应30分钟。
4.5 冷却:加入10 mL 0.325 mol/L盐酸,调节PH值在4.5±0.2。
4.6 淀粉葡萄糖苷酶酶解:在上述溶液中边搅拌边加入200 μL淀粉葡萄糖苷酶溶
液,加盖铝箔,置于60°C恒温振荡水浴中,持续振摇,当烧杯内温度达到60°C
开始计时,反应20分钟。
4.7 在每份试样中加入预热至60°C的95%乙醇280mL(预热前的体积),乙醇与样
液体积比为4:1,取出烧杯,盖上铝箔,室温下沉淀1小时。
4.8 过滤:在干燥的坩埚中加入1g硅藻土,70°C真空干燥至恒重,记录坩埚的质
量(精确到0.1mg)。用15mL 78%乙醇将硅藻土润湿,并用真空溶剂过滤装置
在抽真空条件下,使硅藻土平铺于坩埚中。将样品酶解液缓慢转移至对应的
坩埚中,抽滤。用刮勺和78%乙醇将所有残渣转至坩埚中。
4.9 洗涤:分别用20mL 78%乙醇洗涤3次、10mL 95%乙醇和10mL丙酮洗涤残渣
各两次,抽滤去除洗涤液后,将坩埚连同残渣在105°C烘干过夜或70°C真空
干燥过夜。将坩埚置于干燥器中冷却1小时,称重(包括坩埚、膳食纤维残渣
和硅藻土),精确至0.1mg。减去坩埚和硅藻土的干重,计算残渣质量。
4.10 蛋白质和灰分测定:称完质量的残渣和硅藻土的混合物,一份用凯氏定
氮法,以N×6.25为换算系数,计算蛋白质含量。另一份在525°C灰化5小时,
于干燥器中冷却,精确称量坩埚总量(精确至0.1mg)减去坩埚和硅藻土干重,
计算灰分质量。
计算:
未校正的平均空白残渣 (UABR)=平均试样空白残渣质量,单位为毫克
未校正空白蛋白残渣(BPR)=UABR x %空白蛋白/100
未校正空白灰分残渣(BAR)=UABR x %空白灰分/100
校正的空白(CB)= UABR – BPR – BAR
未校正的平均样品残渣 (USAR)=平均试样空白残渣质量,单位为毫克
未校正样品蛋白残渣(SPR)=UABR x %空白蛋白/100
未校正样品灰分残渣(SAR)=UABR x %空白灰分/100
校正的样品(CSR)= USAR-SPR-SAR-CB% TDF= 100 x CSR/样品质量mg最终的% TDF是去除了和水分后的总膳食纤维含量。
10、参考文献:

  1. Association of Official Analytical Chemists (1985). Official Methods of Analysis, 14th ed., 1st suppl. Secs. 43, A14-43,A20, p.399.
  2. Association of Official Analytical Chemists (1986). Changes in methods. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 69:370.
  3. Association of Official Analytical Chemists (1987). Changes in methods. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 70:393.
  4. Prosky, L., Asp, N.-G., Furda, I., DeVries, J.W., Schweizer, T.F.and Harland, B.F. (1985). Determination of total dietary fibre in foods and food products: Collaborative study. J. Assoc. Off. Anal.Chem., 68:677.
  5. Prosky, L., Asp, N.-G., Schweizer, T.F., DeVries, J.W. and Furda,I. (1988). Determination of insoluble, soluble, and total dietary fibre in

foods and food products. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 71:1017.16

Total Dietary Fiber Assay Kit
The Total Dietary Fiber test kit is suitable is suitable for the measurement and analysis of Total Dietary Fiber.

For the determination of Total Dietary Fiber in cereal products,
foodstuffs, feeds and other materials
Principle:
(α-amylase + amyloglucosidase)
(1) Starch + H2O → D-glucose(protease)
(2) Protein + H2O → peptides(3) Dietary fiber determined gravimetrically following alcohol
precipitation

(4) Ash and residual protein determined on DF residues
and subtracted


Kit size: 100 / 200 assays
Method: Hydrolysis / removal of non-dietary
fibre components
Total assay time: ~ 100 min
Detection limit: 0.5-100% of sample weight
Application examples:
Food ingredients, food products and other materials
Method recognition:
AOAC (Methods 985.29, 991.42, 991.43 and 993.19), AACC
(Methods 32-05.01, 32-06.01, 32-07.01 and 32-21.01) and
CODEX (Type I Method)
Total Dietary Fiber Assay Kit, for the measurement and analysis of total, soluble and insoluble dietary fiber according to AOAC and AACC approved methods. See General Referee Reports: Journal of AOAC INTERNATIONAL, Vol. 81, No. 1, 1998.
Fiber is a mixture of complex organic substances, including hydrophilic compounds, such as soluble and insoluble polysaccharides and non-digestable oligosaccharides, as well as a range of non-swellable, more or less hydrophobic, compounds such as cutins, suberins and lignins. The procedures for the determination and analysis of total dietary fiber as outlined in our booklet are based on the methods of Lee et al.1 and Prosky et al.2,3 (AOAC 991.43, AOAC 985.29, AACC 32-07.01 and AACC 32-05.01). However, the enzymes in the Megazyme Total Dietary Fiber Kit can also be used in other dietary fiber analytical methods such as AACC Method 32-21.01 and AACC Method 32-06.01.
1. Association of Official Analytical Chemists. (1985). Official Methods of Analysis, 14th ed., 1st suppl. Secs. 43, A14-43, A20, p.399.
2. Association of Official Analytical Chemists. (1986). Changes in methods. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 69, 370.
3. Association of Official Analytical Chemists. (1987). Changes in methods. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 70, 393.
Two separate methods are described in the associated data booklet:
METHOD 1:
DETERMINATION OF TOTAL, SOLUBLE AND INSOLUBLE DIETARY FIBER
Based on AOAC Method 991.43 “Total, Soluble, and Insoluble Dietary Fiber in Foods” (First Action 1991) and AACC Method 32-07.01 “Determination of Soluble, Insoluble, and Total Dietary Fiber in Foods and Food Products” (Final Approval 10-16-91).
METHOD 2:
DETERMINATION OF TOTAL DIETARY FIBER
Based on AACC method 32-05.01 and AOAC Method 985.29.

Advantages

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