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产品信息
细菌肝素酶 I 切割 N-硫酸氨基己醣与 2-O-硫酸艾杜糖醛酸残基之间，以及与 2-O-硫酸葡萄糖醛酸残基之间的糖苷键。2-O-硫酸糖醛酸残基对细菌肝素酶 I 的活性至关重要，GlcNS 的 6-O-硫酸化不会抑制酶活性。
产品来源
该酶克隆自埃氏拟杆菌（Bacteroides Eggerthii），在 E. coli 中表达。
- 产品类别:
- Heparinases Products
- 应用:
- Analysis of Heparin/HS
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产品组分信息
本产品提供以下试剂或组分：
NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度 -
P0735S -80 Bacteroides Heparinase I P0735SVIAL -80 1 x 0.02 ml 12,000 units/ml Bacteroides Heparinase Reaction Buffer B0735SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
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P0735L -80 Bacteroides Heparinase I P0735LVIAL -80 1 x 0.05 ml 12,000 units/ml Bacteroides Heparinase Reaction Buffer B0735SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
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特性和用法
单位定义
1 单位指在 100 μl 总反应体系中，pH 7.0，30℃ 条件下，每分钟能从猪黏膜肝素中释放 1.0 μmol 不饱和寡糖所需的酶量。
反应条件
1X 细菌肝素酶反应缓冲液
Incubate at 30°C贮存溶液
20 mM Tris-HCl
100 mM NaCl
5 mM CaCl2
1 mM EDTA
pH 7.5 @ 25°C热失活
100°C for 1 minute
分子量
实际: 42 kDa
单位活性检测条件
在 100 μl 反应体系中，将两倍稀释的细菌肝素酶 I 与 1 mg/ml 猪黏膜肝素底物（1X 细菌肝素酶反应缓冲液）进行温育。在 30℃ 条件下温育反应预混液。通过 232 nm 处的实时紫外光谱检测，确定不饱和寡糖的释放情况。
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- 细菌肝素酶 III
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注意事项
- 避免反复冻融。
- 反应条件：
- 在 100 μl 总反应体系中，将 10 μl 1 mg/ml 肝素底物、10 μl 细菌肝素酶反应缓冲液和水混合。
- 添加 1 μl 细菌肝素酶 I。
- 在 30℃ 条件下，将反应体系温育 1 – 24 小时（监测 232 nm 处的吸光度，确定发生部分或完全消化）。
对于特定底物，必须根据实际经验确定最佳温育时间和酶浓度。
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参考文献
- Landry, D. et al New England Biolabs, Inc.. Unpublished observation
- Yamada, S., Murakami, T., Tsuda, H., Yoshida K., Sugahara, K. (1995). J. Biol.Chem. 270, 8696-8705.
- Merchant, Z.M., Kim, Y.S., Rice, K.G., Linhardt, R. (1985). J. Biol.Chem. 229, 369-377.
FAQs & 问题解决指南
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FAQs
- What are Bacteroides Heparinase Enzymes?
- What is the difference between Bacteroides Heparinase I, II and III?
- Can Bacteroides Heparinase I, II, and III be used together in one digest?
- What is the optimal pH range for Bacteroides Heparinase I?
- Is Bacteroides Heparinase I activated by Calcium?
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实验技巧
细菌肝素酶 I 切割高度硫酸化的肝素/HS 链
细菌肝素酶 I 在 pH 6.5 – 7.5 之间的活性最大
细菌肝素酶 I 具有钙依赖性，在 1.5 – 5 mM CaCl2 条件下具有最大活性。
细菌肝素酶 I 可以使用肝素酶反应缓冲液，与细菌肝素酶 II 和 III 进行双重消化。