ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)

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      310-08171

    从植物组织提取RNA试剂盒

    ISOSPIN Plant RNA

     

          ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

     

      ISOSPIN Plant RNA用于从植物组织提取和纯化RNA。本产品的原理是在离液剂离子条件下,RNA吸附于二氧化硅。无需苯酚和氯仿等有毒有机溶剂。所使用的离心柱最大限度地确保了柱容积,内封的硅胶模确保足够的RNA吸附容量和高洗脱率。
      本试剂盒采用离心法去除杂物,在硅胶模上进行DNase I处理,提取和纯化高纯度RNA用时仅约1小时。

     

     

    ◆特点

     

      • 高纯度RNA

      离心法去除杂物和硅基质膜上的DNase I 处理能提取出高纯度RNA。

      • 无需使用过滤器

      无需使用过滤器样品均匀化或过滤时后。本试剂盒用离心法去除杂物沉淀。

      • 无需苯酚、氯仿

      无需使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂。

      • 包装附有DNase I

      试剂盒内含有DNase I (RNase free),不需另外购买。

     

    ◆产品列表

     

    ISOSPIN Plant    RNA (50次用量)

    产品

    容量

    保存

    备注

    PT Extraction   Buffer

    30 ml x 1支

    室温

     

    PT Binding   Buffer

    40 ml x 1支

    室温

    含乙醇

    PT Wash1   Buffer

    40 ml x 1支

    室温

    含乙醇(清洗液)

    PT Wash2   Buffer

    40 ml x 1支

    室温

    含乙醇(清洗液)

    DNase I (RNase   free)

    2,000 units x   1支

    -20°C

     

    10 x DNase I   Buffer

    1 ml x 1支

    -20°C

     

    ddWater (RNase   free)

    1 ml x 8支

    室温

    调制DNase I 溶液・洗提

    离心柱

    50 支 x 1袋

    冷藏

    上端组成:吸附柱
    下端组成:收集管

     

     

    运送方法

     

      NIPPON GENE提供直送服务,将室温品和冷藏品的试剂盒、-20°C的产品、放入干冰的泡沫箱一同放入纸箱,在常温下进行运输。

     

     

    ◆使用实例

     

    ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

     

     

    Data.1 RNA的回收量标准

     

     

      本产品可提取的RNA的回收量标准如下表。

     

    样品

     

     

    菠菜(叶)

    0.5 μg RNA/mg 组织

    青花菜(芽)

    1.0 μg RNA/mg组织

    卷心菜(种子)

    1.3 μg RNA/mg组织

    卷心菜(芽)

    1.4 μg RNA/mg组织

    卷心菜(叶)

    0.1 μg RNA/mg组织

    竹子(叶)

    0.3 μg RNA/mg组织

    郁金香(球根)

    0.2 μg RNA/mg组织

     

     

    Data.2 从卷心菜(十字花科)种子及从叶子提取RNA

     

     

       使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品按照步骤提取卷心菜的种子(约4mg)和叶(约30mg)的RNA。用吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总 RNA为模板逆进行转录,使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。

     

    实验条件

     

    1.  样品量
      ・种子(约4 mg)
      ・叶(约30 mg)

    2.  变性凝胶电泳
      ・凝胶:1% Agarose S(甲醛变性)
      ・RNA添加量:种子(1μg)/叶(0.5μg)
      ・RNA Ladder:与RNA添加量等量

    3.  实时qPCR
      ・试剂:GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX
      ・装置:ABI 7500 Fast
      ・模板cDNA:以提取出的总RNA为模板进行逆转录
      ・扩增片段长度:441 bp
      ・实验次数: n=3

     

     

    结果

     

      从吸收光谱结果看,在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低,说明本产品更能有效去除多糖类杂物(图1)。

    卷心菜种子 卷心菜叶
    ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社) ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)
    图1 吸收光谱

     

     

     

    ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

    ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

     

     

     

     

     

     

    【RNA添加量】

      种子(1μg)/叶子(0.5μg)

     

    【Marker】
      RNA Ladder(与RNA的添加量等量)
      1% Agarose S(甲醛变性)

    图2 变性凝胶电泳

     

     

    卷心菜种子 卷心菜叶
    ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社) ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)
    图3 实时qPCR

    【试剂】

      GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX

    【模板】

      以提取出的总RNA为模板进行逆转录

    【装置】ABI 7500 Fast

    【扩增片段长度】441 bp

    【循环数】n=3

    红色: ISOSPIN Plant RNA
    绿色: A公司产品

     

     

    Data.3 从竹子(禾本科)愈伤组织提取RNA

     

     

       ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

            竹子愈伤组织

      (淡竹培养细胞系Pn(rpc00047)形成)

       使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品,按照步骤对各样品量竹子愈伤组织提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转 录,使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。

     

      ※本实验使用的竹子愈伤组织由富山县立大学荻田信二郎博士(现公立大学法人县立广岛大学)提供。竹子愈伤组织委托理化学研究所BioResource Center获得的淡竹培养细胞系Pn(rpc00047)培养形成的。

     

     

    实验条件

     

    1.  样品量
      ① 约65 mg
      ② 约50 mg
      ③ 约40 mg

    2.  琼脂糖凝胶电泳
      ・凝胶:0.8% 琼脂糖 S/TAE
      ・RNA添加量:最终提取量的1/10(5 μl)
      ・Marker:OneSTEP Marker6(5 μl)

    3.  实时qPCR
      ・试剂:GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX
      ・装置:ABI 7500 Fast
      ・模板cDNA:以提取的总RNA为模板进行逆转录
      ・扩增片段长度:197 bp
      ・循环数: n=3

     

     

    结果

     

      从吸收光谱结果看,在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低,说明更能有效去除多糖类杂物(图1)。根据琼脂糖凝胶电泳比较结果显示,ISOSPIN Plant RNA更有效提取出RNA(图2)。

     

    ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社) ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)
    图1 吸收光谱 图2 变性凝胶电泳

    【凝胶】

      0.8% 琼脂糖 S/TAE

    【RNA添加量】

      最终提取量的1/10(5 μl)

    【Marker】

      OneSTEP Marker6(5 μl)

     

     

     

     

    ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

     

     

     

    【试剂】GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX

     

    【装置】ABI 7500 Fast

     

    模板cDNA】以提取出的总RNA为模板进行逆转录

     

    【扩增片段长度】197 bp

     

    【循环数】n=3

    图3 实时qPCR  

     

     

     

    Data.4 从郁金香(百合科)球根中提取RNA

     

     

        ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社) ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

                      提取液的粘性状态
                  左:ISOSPIN Plant RNA
                  右:B公司产品

     

       使用ISOSPIN Plant RNA与B公司产品,按照步骤对郁金香球根(100mg)提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆 转录,使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。

      郁金香球根样品粘性高,提取困难。郁金香球根在液氮中碎成粉末状后,取1.5ml移至离心管,并在各公司提取Buffer中用研磨棒磨碎,右图将离心管倒置比较溶液的粘性。

     

     

    实验条件

     

    1.  样品量

      100 mg

    2.  琼脂糖凝胶电泳
      RNA添加量:最终提取量的1/10(5 μl)

     

     

    结果

     

      ISOSPIN Plant RNA也能从粘性高的郁金香球根提取出RNA。

     

    ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社) ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)
       最终提取量的1/10(5 μl)
    图1吸收光谱 图2 琼脂糖凝胶电泳

    ISOSPIN Plant RNA(从植物组织提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

     

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