- 产品特性
- 相关资料
- Q&A
- 参考文献
组织透明化试剂
SCALEVIEW®-S
ScaleS技术由一组主要成分为尿素和山梨糖醇的组织透明化试剂组成。
开发此技术的理化研究所·脑神经科学研究中心和光量子工学研究中心通过进一步改良，研发出兼备出色透明度和可保留细微结构及荧光信号的新成果。
FUJIFILM Wako取得理化研究所的许可，把此项成果商品化，推出SCALEVIEW®-S产品。
SCALEVIEW®-S 不仅可以透明化含有荧光蛋白的生物标本，而且也可以有效应用于抗体或荧光染料标记的厚标本。它将有望成为分析脑组织病理标本的有力工具。
SCALEVIEW®-S Trial Kit主要由从SCALEVIEW®-S0到SCALEVIEW®-SMt等6种试剂组成，可通过使用各试剂进行透明化的试剂盒。
数据提供：
国立研究开发法人理化学研究所
脑神经科学研究中心细胞机能探索研究组/光量子工学研究中心生命光学技术研究组
濱裕先生、星田哲志先生、宮脇敦史先生
合作：olympus株式会社
◆SCALEVIEW®-S 组织透明化实验报告例子
■ 小鼠大脑半球1-2 mm厚切片
（※试剂用量标准：透明化处理和固定各5 mL。）
※在组织透明化实验中，请注意试剂的使用量、处理的时间根据样本大小会有所改变。
此外，请尽可能在灌注固定后取出并重新固定样本。
■ 使用SCALEVIEW®-S小鼠大脑透明化例子
从左依次是小鼠大脑切片（1mm厚）SCALEVIEW®-S处理前后和小鼠大脑半球SCALEVIEW®-S处理前后
■ 用双光子激发显微镜观察YFP-H line系小鼠透明化全脑——逐步放大基底神经节区域
点击查看protocol
◆免疫组织染色：AbScale 实验报告
■ 小鼠大脑半球1-2 mm厚切片
（※试剂用量标准为前处理各试剂：10 mL、抗体染色：1.5 mL、透明化：10 mL、固定：10 mL。）
* AbScale Solution : 含0.33 M 尿素、0.1 % (wt/vol) Triton X-100的PBS(-)溶液
■ 阿尔茨海默病模型小鼠（17个月）大脑切片（2mm厚）通过AbScale法进行免疫组织染色的图
像例
◆荧光染料染色：ChemScale 实验报告
■ 小鼠大脑半球1-2 mm厚切片
（试剂用量标准为前处理各试剂：10 mL、荧光染料染色：8 mL、洗涤：10 mL、透明化：10 mL）
■ 用共聚焦激光扫描显微镜（倒立）观察ChemScale处理（PI染色）后的YFP-H line小鼠大脑半球
切片（2 mm厚）
◆SCALEVIEW®-S Neurosphere观察示例
■ Neurosphere
（试剂用量标准：前处理及透明化各试剂1.2 mL。※抗体染色基于AbScale实验报告）
■ 从成年大鼠海马体制备的神经干细胞Neurosphere三维免疫染色——使用AbScale法
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
组织透明化配套耗材：成像用透明室
|
|
 |
|
透明化试剂方法选择流程 |
AbScale发进行直接IHC实验步骤 |
|
|
|
|
组织透明试剂化系列 |
组织透明化试剂Q&A ver1.0
Tissue clearing reagent Q&A ver1.0
Q：组织透明化的原则
Ａ：组织透明化通常是按下面的步骤进行的：
Ａ：（a）固定 （b）透化 （c）脱色 （d）折射率匹配
Q：组织透明化的优势
Ａ：目前大多数可用的透明化技术，都是通过编码荧光报告蛋白或者用荧光标记抗体进行后标记，从而可视化
Ａ：组织中特定的蛋白。组织透明化成为了具有单细胞分辨率的组织3D成像中重要的一环。
Q：透明化技术的比较
Ａ：下面是水性的透明化技术。
Ａ：SeeDB（基于果糖的方法）在一些应用中有一定优势。因为SeeDB不含去垢剂，所以对于透明化DiI(细胞膜
Ａ：红色荧光探针，一种神经示踪剂)标记的样品和使用光电关联显微镜（CLEM）的情况下，SeeDB有着一定优
Ａ：势。另外SeeDB会产生自体荧光，有时候会对辨认未标记的神经元结构（如神经毡）起着一定帮助。
Ａ：SeeDB2是为使用高NA物镜的高分辨率成像而优化的技术；因此，当处理较大的组织时，CLARITY或者CUBIC
Ａ：会是更好的选择。
Q：切片厚度的最大值和最小值？
Ａ：您应该根据您的物镜的WD（工作距离）来决定切片的厚度。我们建议切片的厚度不要超过3mm。对于十分薄
Ａ：且脆弱的样品，我们建议使用琼脂糖包埋。
Ａ：使用CUBIC，可以让全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重复性。
Q：试剂盒成分
Ａ：具体如下：
Ａ：1. SCALEVIEW-S试剂盒（299-79001）适用于20份1-2mm的切片样品
Ａ：Ａ：1） SCALEVIEW-S0——100 mL
Ａ：Ａ：2） SCALEVIEW-S1——100 mL
Ａ：Ａ：3） SCALEVIEW-S2——100 mL
Ａ：Ａ：4） SCALEVIEW-S3——100 mL
Ａ：Ａ：5） SCALEVIEW-S4——100 mL
Ａ：Ａ：6） SCALEVIEW-SMT——100 mL
Ａ：2. SCALEVIEW-S试剂盒（290-80801）适用于20-30份1-2 mm的切片样品。
Ａ：Ａ：1） SCaleCUBIC-1 Solution——250 mL
Ａ：Ａ：2） SCaleCUBIC-2 Solution——250 mL
Ａ：Ａ：3） Mounting Solution 1——40 mL
Ａ：Ａ：4） Mounting Solution 2——40 mL
Ａ：3. SeeDB试剂盒（299-79901）适用于20-30份1-2 mm的切片样品。
Ａ：Ａ：1） SeeDB：20w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：2） SeeDB：40w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：3） SeeDB：60w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：4） SeeDB：80w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：5） SeeDB：100w/v% Fructose Solution——50 mL
Ａ：Ａ：6） SeeDB——50 mL
Ａ：4. SeeDB2试剂盒（294-80701）适用于20-30份1-2 mm的切片样品。
Ａ：Ａ：1） Saponin（皂角苷）——5 g
Ａ：Ａ：2） SeeDB2G solution——50 mL
Ａ：Ａ：3） SeeDB2S solution——50 mL
Ａ：Ａ：4） PBS——50 mL
Q：样品的保存
Ａ：SCALEVIEW-S处理的样品应在室温下保存2至3周。您可以在2至3周内观察SCALEVIEW-S透明化的样品中的
Ａ：荧光信号。
Ａ：CUBIC处理的样品应在室温下保存1周。您可以在1周内观察CUBIC透明化的样品中的荧光信号。
Ａ：SeeDB2G处理的样品应在冰箱中保存1年，而SeeDB2S处理的样品则可在室温下保存1年。您可以在1年内观
Ａ：察SeeDB透明化的样品中的荧光信号。
Q：抗体的荧光标记
Ａ：应在进行透明化前就进行抗体的荧光标记。
Q：适用于SCALEVIEW-S的显微镜
Ａ：SD-OSR（Olympus）
Ａ：FV-OSR（Olympus）
Q：适用于CUBIC的显微镜
Ａ：SD-OSR（Olympus）
Ａ：FV-OSR（Olympus）
Ａ：Zeiss Lightsheet Z.1（Carl Zeiss）
Q：适用于SeeDB2的显微镜
Ａ：Confocal（最好使用高NA的油浸镜头）
Ａ：STED（Leica Microsystems）
Ａ：SR-SIM（Carl Zeiss）
Ａ：SD-OSR（Olympus）
Ａ：FV-OSR（Olympus）
Ａ：Airyscan（Carl Zeiss）
Ａ：HyVolution（Leica Microsystems）
Ａ：Two-photon（最好使用复合浸没镜头）
Ａ：Confocal（最好使用高NA的甘油浸镜头）
Ａ：Light-sheet DLS（Leica，最好使用定制镜面的设备）
Q：重构
Ａ：对于定量用途，我们建议使用Neurolucida系统（MBF）。我们同样测试了VAST Lite用于成像用途时的表
Ａ：现。重构时也可以使用开源软件。例如，Vaa3d可以处理大量的拼接图像的数据。
Q：物镜推荐
Q：其他物种？其他器官？
Ａ：对于昆虫样品和鱼类样品，建议选择CUBIC。
Ａ：昆虫相关文献：Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).
Ａ：鱼类相关文献：Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).
对于多细胞球状体，选择SCALEVIEW-S会更好。
https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0
参考文献
|
[1] |
Hama,H.et al.:ProtocolExchange（2016).doi:10.1038 /protex.2016.019. |
|
[2] |
Hama,H.et al.:Nat.Neurosci.,18,1518(2015). |
|
[3] |
濱裕、日置寛之、並木香奈、星田哲志、黒川裕、宮脇敦史：生体の科学，68（1），85（2017）. |
|
[4] |
日置寛之、濱裕、孫在隣、黄晶媛、並木香奈、星田哲志、黒川裕、宮脇敦史：日本薬理学雑誌， 149 （4），173（2017）. |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| 193-18455 | SCALEVIEW-A2 SCALEVIEW® 组织透明化试剂A2 |
500 mL | 组织透明化试剂 |
| 196-18521 | SCALEVIEW-S0 | 250 mL | 组织透明化试剂 |
| 193-18531 | SCALEVIEW-S1 SCALEVIEW-S1组织透明化试剂 |
250 mL | 组织透明化试剂 |
| 190-18541 | SCALEVIEW-S2 SCALEVIEW-S2组织透明化试剂 |
250 mL | 组织透明化试剂 |
| 197-18551 | SCALEVIEW-S3 SCALEVIEW-S3组织透明化试剂 |
250 mL | 组织透明化试剂 |
| 194-18561 | SCALEVIEW-S4 SCALEVIEW-S4组织透明化试剂 |
250 mL | 组织透明化试剂 |
| 191-18571 | SCALEVIEW-SMt SCALEVIEW-SMt组织透明化试剂 |
250 mL | 组织透明化试剂 |
| 041-34425 | deScale Solution | 500 mL | 组织透明化试剂 |
| 299-79901 | SCALEVIEW-S Trial Kit | 1 Kit | 组织透明化试剂 |
