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Lemo21（DE3）E. coli 感受态细胞 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

大肠杆菌（E. coli）化学感受态细胞，适合转化和蛋白表达。T7 表达的精细调控可以缓解毒性蛋白包涵体的形成或生长抑制作用。许多情况下，较少的表达会产生更多所需形式的目的蛋白。膜蛋白表达尤其如此（Wagner et al.，2008）。大肠杆菌（E. coli）中的膜蛋白表达和蛋白输出都受到 Sec 转位酶（某些情况下是 Tat 转位酶）转运性能的限制。如果 T7 表达不受调控，靶向 Sec 转位酶的蛋白表达往往会导致包涵体的积累或细胞分裂的抑制。

Lemo21（DE3）不仅有 BL21（DE3）的宿主特性，还可对困难克隆进行可调控表达。可调控的表达是通过改变溶菌酶（lysY）的水平来实现的，溶菌酶是 T7 RNA 聚合酶的天然抑制剂。溶菌酶的水平（0-2,000 µM）通过在表达培养物中添加 L-鼠李糖来调节。当 Lemo21（DE3）在不含鼠李糖的情况下生长时，该菌株的表现与含 pLysS 的菌株相同。然而，添加鼠李糖可调节目的蛋白的表达。对于难溶的蛋白，调节表达水平有可能产生更可溶的正确折叠的蛋白。

重点

  • 含 Lemo System™ 的 BL21（DE3）
  • 可调 T7 表达菌株（适用于难表达蛋白）：膜蛋白、毒性蛋白以及存在可溶性问题蛋白
  • Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
  • 抗噬菌体 T1（fhuA2）
  • 氯霉素维持的 Lemo System™

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ∆hsdS/ pLemo(CamR)  λ DE3 = λ sBamHIo ∆EcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 ∆nin5 pLemo = pACYC184-PrhaBAD-lysY

产品类别:
T7 Expression,
E. coli Protein Expression Strains Products,
Protein Expression Products,

E. coli Expression Strains Products

应用:
T7 Expression,
Toxic Protein Expression,
Membrane Protein Expression,

Expression of Difficult Proteins,
Peptide Ligation,
Protein Expression in E. Coli,

Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C2528J     -80    
        pUC19 Vector N3041AVIAL -20 1 x 0.025 ml 50 pg/µl
        Lemo21(DE3) Competent E. coli C2528JVIAL -80 12 x 0.05 ml Not Applicable
        L-rhamnose solution B9030AVIAL -80 1 x 12.5 ml 0.5 M

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Streptomycin 25 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

    抗生素耐药性

    • cam

  • 优势和特性

    Features

    • 困难靶标的可调 T7 表达

    应用特性

    Western 分析带 6-His 标签的马来丝虫（Brugia malayi）蛋白 Lemo21（DE3）E. coli 感受态细胞 |
    A) 20℃ 下马来丝虫蛋白在 BL21（DE3）中的表达。B) 30℃ 下表达的马来丝虫蛋白的可溶部分。

    膜蛋白的过夜表达 – PhoA 融合Lemo21（DE3）E. coli 感受态细胞 |
    Lemo System™ 能够简单、快速地优化膜蛋白表达。

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    单独销售的组分

    • SOC Outgrowth 培养基

  • 注意事项

    1. 注意：本产品含有害物质 DMSO。处理前请先查看 MSDS。
    2. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 下贮存。在 -20℃ 贮存会导致转化效率显著降低。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。
    3. 必须添加 30 μg/ml 的氯霉素，以维持 Lemo System™。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. 5 Minute Transformation Protocol (C2528)
    2. Protein Expression Using Lemo21(DE3) (C2528)
    3. Transformation Protocol (C2528)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes

  • 应用实例

    • E. coli Lemo21 DE3-A T7 RNA Polymerase-based protein overexpression platform for routine and difficult targets

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Product Comparison

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are the solutions/recipes (C2528)?
    2. What are the strain properties (C2528)?
    3. Why are there no colonies or no growth in liquid culture (C2529)?
    4. Why is induced protein insoluble (C2528)?
    5. Why is there no protein visible on gel or no activity (C2528)?
    6. Can I store competent cells at -20°C instead of -80°C?
    7. Which kind of transformation tubes should be used?
    8. What volume of DNA can be added into competent cells?
    9. What is the shelf life for this strain (NEB #C2528H)?
    10. Are NEB’s competent cells compatible with the “Mix & Go” protocol?
    11. Is T7 expression subject to catabolite repression in BL21(DE3) and derivative strains?