核酸外切酶 I 反应缓冲液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

NEB 公司为每种酶都提供 10X 反应缓冲液。1X 反应缓冲液浓度确保该酶达到最佳活性。

产品类别:
Exonucleases and Non-specific Endonucleases Products,
Buffers Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分:

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • B0293S     -20    
        Exonuclease I Reaction Buffer B0293SVIAL -20 6 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    1X 缓冲液组分

    67 mM Glycine-KOH
    6.7 mM MgCl2
    10 mM β-ME
    pH 9.5@25°C

  • 相关产品

    相关产品

    • 核酸外切酶 I(E. coli

工具 & 资源

  • 选择指南

    • NEB Diluent and Buffer Table

  • Web 工具

    • Exo Selector

核酸外切酶 T |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

核酸外切酶 T(Exo T),又称 RNase T,是一种单链 RNA(1,2)或 DNA(3,4)特异性核酸酶,该酶需要游离的 3´ 末端,沿 3´→5´方向去除核苷酸。核酸外切酶 T 可用于将含有 3´ 突出末端(2)的 RNA(5)或 DNA 分子的末端平齐化。

产品来源

核酸外切酶 T 与麦芽糖结合蛋白(MBP)进行 C-端融合后,过表达并纯化。随后用 Factor Xa 蛋白酶从核酸外切酶 T 上切除 MBP,最后纯化去除 Xa 因子和 MBP。从 MBP 上切割的核酸外切酶 T 在 N 端多出一个氨基酸,且 Phe 替换了 Met(即 Glu-Phe-Exo T 而非 Met-Exo T)。

产品类别:
RNases,
Exonucleases and Non-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分:

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0265S     -20    
        Exonuclease T M0265SVIAL -20 1 x 0.05 ml 5,000 units/ml
        NEBuffer™ 4 B7004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0265L     -20    
        Exonuclease T M0265LVIAL -20 1 x 0.25 ml 5,000 units/ml
        NEBuffer™ 4 B7004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 25℃ 条件下,30 分钟从 50 pmol Fam 标记的多聚胸腺嘧啶核苷底物生成 1 nmol 单个 dT 核苷酸所需要的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 4
    Incubate at 25°C

    1X NEBuffer™ 4
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    1 mM DTT
    (pH 7.9 @ 25°C)

    在不同缓冲液中的活性

    NEBuffer™ 1: 100%
    NEBuffer™ 2: 75%
    NEBuffer™ 3: 25%

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

  • 相关产品

    单独销售的组分

    • NEBuffer 4

  • 注意事项

    1. 核酸外切酶 T 对 RNA 和 DNA 具有不同的活性。对于 RNA,在标准反应条件下,1 单位核酸外切酶 T 可以完全消化 1.0 pmol 的 rA20,反应结果通过凝胶电泳检测。
    2. 3´ 末端含有 C 碱基的单链 RNA 分子可能难以被核酸外切酶 T 消化。
    3. 核酸外切酶 T 能够切除单链 DNA 突出末端,但不适用于两个相邻胞嘧啶核苷酸。  “尽管 RNase T 可在其活性位点结合多达 10 个核苷酸,但其特异性主要取决于最后 4 个碱基。单个 3´ 末端 C 碱基可将 RNase T 的作用降低 100 多倍,而 2´末端 C 碱基基本上可终止该酶活性。”(PMID:12050169 DOI:10.1074/jbc.M204252200)

  • 参考文献

    1. Deutscher, M. P., Marlor, C. W. and Zaniewski, R. (1984). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 81, 4290–4293.
    2. Deutscher, M. P. and Marlor, C. W. (1985). J. Biol. Chem. 260, 7067–7071.
    3. Viswanathan, M., Dower, K. D. and Lovett, S. T. (1998). J. Biol. Chem. 273, 35126–35131.
    4. Zuo, Y. and Deutscher, M. P. (1999). Nucleic Acid Res. 27, 4077–4082.
    5. Zeng, Y. and Cullen, B. R. (2004). Nucleic Acid Res. 32, 4776–4780.
    6. Zuo, Y. and Deutscher, M.P. (2002). J. Biol. Chem. 277, 29654-61.

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of Exonucleases and Non-specific Endonucleases
    • Common Applications for Exonucleases and Endonucleases
    • Properties of Exonucleases and Non-specific Endonucleases

  • Web 工具

    • Exo Selector

  • 研究摘要

    • Choosing the Right Exonuclease (2019)

Msz 核酸外切酶 I |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Msz 核酸外切酶 I 分离自大肠杆菌菌株,携带有克隆自喜热嗜甲基菌属(Methylocaldum szegediense)的 pMC45-1 基因。Msz 核酸外切酶 I 为 DNA 特异性核酸外切酶,作用于单链 DNA,沿 3′→5′ 方向逐步催化去除核苷酸,在 45℃-60℃ 条件下的 rCutSmart™ 缓冲液中活性最佳。

产品类别:
Exonucleases and Non-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分:

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0527S     -20    
        Msz Exonuclease I M0527SVIAL -20 1 x 0.1 ml 10,000 units/ml
        rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位 Msz 核酸外切酶 I 是指在 100 µl 总反应体系中,55℃ 条件下,含 0.17 mg/ml 单链 [3H]-大肠杆菌 DNA 的 1X rCutSmart 缓冲液中,15 分钟内能催化释放 2 nmol 酸溶性核苷酸所需的酶量。

    反应条件

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    Incubate at 55°C

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    热失活

    80°C for 1 minute

  • 相关产品

    相关产品

    • 核酸外切酶 I(E. coli
    • M0568 Thermolabile Exonuclease I

  • 参考文献

    1. Fei L, Tian S, Moysey R, Misca M, Barker JJ, Smith MA, et al. (2015). Structural and Biochemical Studies of a Moderately Thermophilic Exonuclease I from Methylocaldum szegediense. PLoS ONE. 10 (2), e0117470. DOI: 10.1371/journal.pone.0117470

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Standard Protocol for Msz Exonuclease I Reaction (NEB #M0527)

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Common Applications for Exonucleases and Endonucleases
    • Properties of Exonucleases and Non-specific Endonucleases

  • Web 工具

    • Exo Selector

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the optimal reaction temperature range for Msz Exonuclease I activity?
    2. Can Msz Exonuclease I remove primers in nested PCR reactions?
    3. Can Msz Exonuclease I be used to blunt dsDNA?
    4. Can Msz Exonuclease I be heat inactivated?
    5. Can Msz Exonuclease I be used with a double-stranded exonuclease to clean up plasmid preparations?
    6. Will Msz Exonuclease I work in other buffers?

RecJf 核酸外切酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

RecJf 核酸外切酶是一种单链 DNA 特异性核酸外切酶,沿 5’→3′ 方向催化去除 DNA 的单磷酸脱氧核苷酸(1)。RecJf 核酸外切酶是 RecJ 与麦芽糖结合蛋白(MBP)的重组融合蛋白,与野生型 RecJ 具有相同的酶学特性。与 MBP 融合表达,提高了 RecJf 核酸外切酶的溶解度(2)。

当底物为 5´ 端突出了 22 个核苷酸的 DNA 时,经 RecJf 核酸外切酶酶切后可得到含有以下三种末端的混合产物:平齐末端、5´ 突出末端(1-5 个核苷酸)和 5´ 凹陷末端(1-8 个核苷酸)(3)。RecJf 核酸外切酶发挥活性时无需 5′ 末端磷酸化(3)。

产品来源

RecJf 核酸外切酶 C 端融合麦芽糖结合蛋白(MBP)进行过表达和纯化。MBP 不影响 RecJf 核酸外切酶的催化活性,但提高了 RecJf 核酸外切酶的溶解度(2)。

产品类别:
Exonucleases and Non-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分:

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0264S     -20    
        RecJf M0264SVIAL -20 1 x 0.033 ml 30,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0264L     -20    
        RecJf M0264LVIAL -20 1 x 0.165 ml 30,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 50 μl 含 1X NEBuffer 2 的反应体系中,37℃ 条件下,30 分钟催化超声处理的 1.5 µg [3H]-标记单链 E. coli DNA 时,产生 0.05 nmol 可溶于 TCA 的脱氧核糖核苷酸所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 2
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ 2
    50 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

  • 相关产品

    相关产品

    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒(5 μg)

    单独销售的组分

    • NEBuffer 2

  • 参考文献

    1. Lovett, S.T., Kolodner, R.D. (1989). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86, 2627-2631.
    2. Lovett, S. and Whitaker, R. Unpublished observation
    3. Whitaker, R. Unpublished observation

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for RecJf (NEB #M0264)

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of Exonucleases and Non-specific Endonucleases
    • Common Applications for Exonucleases and Endonucleases
    • Properties of Exonucleases and Non-specific Endonucleases

  • Web 工具

    • Exo Selector

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of RecJf in the NEBuffers?
    2. Can DNA be blunted using RecJf?
    3. What is the difference between RecJf and Exonuclease I (NEB# M0293)?
    4. Can RecJf be heat inactivated?
    5. Will RecJF work in rCutSmart buffer?