EnGen® Sau Cas9 核酸酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

EnGen® Sau Cas9 核酸酶来自金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），是一种 RNA 介导的 DNA 核酸内切酶，可催化双链 DNA 的位点特异性切割。靶向目标序列需要一段与目标序列互补的长度约为 100 个核苷酸的向导 RNA（gRNA），同时需要在靶标序列对侧的 DNA 链上存在 5´-NNGRRT-3´（N = 任意，R = A 或 G）PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列。EnGen Sau Cas9 核酸酶的 DNA 切割位点位于 PAM 序列 5´ 端约第 3 个碱基处。EnGen Sau Cas9 核酸酶蛋白的 N 端和 C 端都含有猿猴病毒 40（SV40）T 抗原核定位序列（NLS）。

Sau Cas9 核酸酶序列识别与 DNA 切割示意图

EnGen® Sau Cas9 核酸酶 |

产品来源

EnGen® Sau Cas9 核酸酶来自金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），在大肠杆菌中表达，为 C 端含 6xHis 标签的融合蛋白。

产品类别:
Genome Editing Products,
Programmable Nucleases Products

应用:
Genome Editing Applications

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0654T     -20    
        EnGen® Sau Cas9 M0654TVIAL -20 1 x 500 pmol 20 µM
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    反应条件

    1X NEBuffer™ r3.1
    Incubate at 37°C

    NEBuffer™ r3.1
    100 mM NaCl
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    300 mM NaCl
    0.1 mM TCEP
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 5 minutes

  • 注意事项

    1. 20 µM 约等于 2.54 mg/ml EnGen® Sau Cas9 核酸酶，1 µM 等于 0.127 mg/ml。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. How to synthesize a sequence-specific sgRNA for experiments using EnGen® Sau Cas9

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How can the genome editing efficiency be determined following EnGen® Sau Cas9 (NEB #M0654) transfections or microinjections?
    2. Which nuclear localization signal is fused to EnGen® Sau Cas9?
    3. Can the EnGen® sgRNA Synthesis Kit (NEB #E3322S) be used to synthesize sgRNAs specific for Sau Cas9?
    4. What is the sequence for a typical guide RNA specific for EnGen® Sau Cas9?
    5. How can I synthesize a sequence-specific sgRNA for experiments using EnGen® Sau Cas9?
    6. Why do I observe incomplete digestion with EnGen® Sau Cas9 and my target-specific Sau sgRNA in vitro?
    7. How do I dilute the enzyme to 1 μM for in vitro reactions?
    8. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?