EnGen® Spy dCas9（SNAP-tag）核酸酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

EnGen® Spy dCas9 核酸酶是 Cas9 核酸酶的无活性突变体，保留了与 DNA 的结合活性（1,2）。该核酸酶包含 D10A 和 H840A 这两个点突变，可分别导致 RuvC 与 HNH 核酸酶结构域失活。N 端 SNAP-tag® 标签可与荧光基团、生物素和许多其它利于可视化和靶标富集的偶联物共价结合。与 Cas9 核酸酶一样，EnGen Spy dCas9 核酸酶结合 DNA 需要与靶标序列互补的向导 RNA，并且 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列的 NGG 必须位于靶标序列下游。EnGen Spy dCas9 核酸酶蛋白的 C 端含有 SV40 T 抗原核定位序列（NLS）。

产品来源

EnGen® Spy dCas9 核酸酶在大肠杆菌中表达为 N 端含 6xHis 标签的融合蛋白。

产品类别:
Genome Editing Products,
Programmable Nucleases Products

应用:
Genome Editing Applications

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0652S     -20    
        EnGen® Spy dCas9 (SNAP-tag®) M0652SVIAL -20 1 x 90 pmol 1 µM
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0652T     -20    
        EnGen® Spy dCas9 (SNAP-tag®) M0652TVIAL -20 1 x 500 pmol 20 µM
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    反应条件

    1X NEBuffer™ r3.1
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ r3.1
    100 mM NaCl
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    300 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    0.1 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

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  • 注意事项

    1. 20 µM 约等于 3.6 mg/ml，1 μM 约等于 0.18 mg/ml EnGen® Spy dCas9 核酸酶。
    2. 本产品兼容稀释缓冲液 B：含有 300 mM NaCl、10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、1 mM DTT、500 µg/ml BSA 和 50% 甘油（pH 7.4 @ 25℃）。

  • 参考文献

    1. Qi, LS., et. al. (2013). Cell. 152 (5), 1173-83.
    2. Qi, LS., et. al. (2013). Cell. 154 (2), 442-51.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Transfection of Cas9 RNP (ribonucleoprotein) into adherent cells using the Lipofectamine® RNAiMAX

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Where is the nuclear localization signal on SNAP dCas9 NLS, S. pyogenes located?
    2. Which nuclear localization signal is fused to SNAP dCas9 NLS, S. pyogenes?
    3. What inactivating mutations were made in SNAP dCas9 NLS, S. pyogenes?
    4. Why do I observe incomplete binding with SNAP dCas9 NLS, S. pyogenes?
    5. Why does binding efficiency differ between two different guide RNAs?
    6. Does NEB provide plasmids for sgRNA cloning?
    7. How do I dilute the enzyme to 1 μM for in vitro reactions?
    8. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?