产品信息

微球菌核酸酶来源于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），是一种相对非特异性的核酸内外切酶。该酶从重组大肠杆菌菌株纯化得到，可消化双链、单链、环化以及线性的核酸。pH 7.0-10.0 范围内微球菌核酸酶均具有活性；pH 9.2 时，无论 RNA 和 DNA 底物均具有最佳活性。微球菌核酸酶偏向于切割富含腺苷酸、脱氧腺苷酸或胸腺苷酸的位点（1）。DNA 和 RNA 均降解为 3´ 磷酸末端的单核苷酸和二核苷酸。

微球菌核酸酶可很好的搭配 Cell Signaling Technology 公司的 SimpleChIP^® Enzymatic Chromatin IP Kit（Magnetic Beads）#9003 使用。请点击链接查看其网站上的产品信息与实验方案。

图 1：
3 倍稀释的微球菌核酸酶酶切 1 µg Lambda 基因组 DNA。泳道 2 中所用的酶量定义为 1 个凝胶单位。泳道 M：PCR Marker（NEB #N3234）。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有微球菌核酸酶基因（基因 ID：3238436）与编码麦芽糖结合蛋白（MBP）基因的融合表达。从融合蛋白上切割微球菌核酸酶，并纯化除去 MBP。

产品类别:

RNA Modification,

Exonucleases and Non-specific Endonucleases Products

应用:

ChIP

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  M0247S     -20       Micrococcal Nuclease M0247SVIAL -20 1 x 0.16 ml 2,000,000 gel units/ml   Micrococcal Nuclease Reaction Buffer B0247SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X   Recombinant Albumin, Molecular Biology Grade B9200SVIAL -20 1 x 0.6 ml 20 mg/ml

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 37℃ 条件下，15 分钟内消化 1 µg Lambda DNA 产生的低分子量 DNA 片段（小于 400 bp）所需的酶量，消化产物经琼脂糖凝胶电泳分析。

  反应条件

  1X 微球菌核酸酶反应缓冲液
  Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin, Molecular Biology Grade
  Incubate at 37°C

  1X 微球菌核酸酶反应缓冲液
  50 mM Tris-HCl
  5 mM CaCl₂
  (pH 7.9 @ 25°C)

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  50% Glycerol
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  否

  单位活性检测条件

  1X 微球菌核酸酶缓冲液、0.1 mg/ml BSA 和 1 μg Lambda DNA，总反应体积为 50 μl。

• 优势和特性

  应用特性

  • 降解蛋白制剂中的核酸
  • 体外翻译（2）
  • 在非机械细胞裂解制备过程中降低细胞裂解物的粘度
  • 染色结构分析（3）
  • 快速 RNA 测序

• 相关产品

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  • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
  • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  单独销售的组分

  • 重组白蛋白, 分子生物学级（不含动物成分）

• 注意事项

  1. 因 NEBuffer r1.1 – r3.1 或 rCutSmart 中没有 Ca²⁺，所以该酶在这些缓冲液中没有活性。在 NEBuffer 中添加 Ca²⁺ 后，仅有 10% 的活性。
  2. 必须添加 1-5 mM Ca²⁺ 来保障酶的活性。
  3. 该酶的活性范围为 pH 7-10，pH 9.2 时活性最佳；且盐离子浓度低于 100 mM。
  4. 添加过量的 EGTA 可使酶失活。

• 参考文献

  1. Cuatrecasas, S.F., and Anfinsen, C.B. (1967). J. Biol. Chem. 242, 1541-1547.
  2. Craig, D. et al. (1992). Nucl. Acids Res. 20, 4957-4987.
  3. O’Neill, L.P. and Turner B.M. (2003). Methods. 31, 76-82.

操作说明、说明书 & 用法

• 使用指南

  • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer

工具 & 资源

• 选择指南

  • Activities of Exonucleases and Non-specific Endonucleases
  • Common Applications for Exonucleases and Endonucleases
  • Properties of Exonucleases and Non-specific Endonucleases

• Web 工具

  • Exo Selector

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Will Micrococcal Nuclease cleave DNA as well as RNA and what type of end is left after digestion?
  2. Does Micrococcal Nuclease work in ChIP sequencing protocols?
  3. Will Micrococcal Nuclease work in rCutSmart Buffer?

• 实验技巧

  如果存在 EDTA 或 EGTA，加入 1-5 mM Ca++ 可增加活性

  加入 1-5 mM EDTA 或 EGTA 可螯合 Ca++ 并显著降低活性

  NaCl 高于 100 mM 时会抑制酶的活性

  用于染色质结构分析（CHiP）