T4 PDG 嘧啶二聚体糖基酶（T4 核酸内切酶 V） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

T4 PDG（嘧啶二聚体糖基酶）既有 DNA 糖基酶活性，又有 AP 裂解酶活性。16 KD 的蛋白质可识别因紫外线照射引起的 cis-syn 型环丁烷嘧啶二聚体。该酶切割嘧啶二聚体的 5´ 端糖苷键，同时其内切酶活性切割 AP 位点上的磷酸二酯键。

产品来源

从携带有编码 T4 denV 基因质粒的大肠杆菌菌株中纯化获得。

产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0308S     -20    
        T4 PDG (T4 Endonuclease V) M0308SVIAL -20 1 x 0.2 ml 10,000 units/ml
        T4 PDG Reaction Buffer B0308SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
        Recombinant Albumin, Molecular Biology Grade B9200SVIAL -20 1 x 0.6 ml 20 mg/ml

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 20 µl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟使超过 95% 的 0.5 µg 经紫外线照射诱变的超螺旋 pUC19 DNA 变成切刻型质粒所需的酶量。切刻可通过琼脂糖凝胶电泳检测。诱变后的质粒 DNA 平均含有 3-5 个嘧啶二聚体。

    反应条件

    1X T4 PDG 反应缓冲液
    Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin, Molecular Biology Grade
    Incubate at 37°C

    1X T4 PDG 反应缓冲液
    100 mM NaCl
    1 mM DTT
    1 mM EDTA
    25 mM Na2HPO4
    (pH 7.2 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    250 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    0.15% Triton® X-100
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

    单位活性检测条件

    20 µl 总反应体系，含 1X T4 PDG 反应缓冲液、0.5 µg 经紫外线照射诱变的超螺旋 pUC19 DNA 和 100 µg/ml BSA。

  • 优势和特性

    应用特性

    • DNA 损伤研究
    • 单细胞凝胶电泳（彗星试验）

  • 相关产品

    单独销售的组分

    • 重组白蛋白, 分子生物学级（不含动物成分）

  • 注意事项

    1. 缓冲液在 4℃ 时会产生沉淀，因此需将其加热至室温。
    2. 该酶在 NEBuffer 4（NEB #B7004）中具有 100% 的活性，在 NEBuffer 1 – 3（NEB #B7001、NEB #B7002、NEB #B7003）中具有 75% 的活性。
    3. 为取得最佳使用效果，建议温育时间不超过 30 分钟。
    4. 反应后，电泳前，在 6X 上样缓冲液中加入终浓度为 0.5% 的 SDS 或 1 µl 苯酚，以分离蛋白与 DNA 的结合，从而改善电泳结果。

  • 参考文献

    1. Higgins, K.L. and Lloyd, R.S. (1987). Mutation Research. 183, 117-121.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for T4 PDG (M0308)

  • 使用指南

    • DNA Damage and PreCR

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
    • DNA Repair Enzymes on Damaged and Non-standard Bases
    • Properties of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of T4 PDG in the NEBuffers 1-4?
    2. What is the molecular weight of T4 PDG?
    3. Is T4 PDG a tagged protein?
    4. Can the T4 PDG be used in the comet assay?
    5. Does T4 PDG remove the damaged base?
    6. What type of damaged DNA does T4 PDG recognize?