USER™ 酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

USER（尿嘧啶特异性切除试剂）酶（1）在尿嘧啶位置产生一个单核苷酸缺口。USER 酶是南极热敏尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）和 DNA 糖基酶-裂解酶核酸内切酶 VIII 的混合物。UDG 可催化切除尿嘧啶碱基，形成一个碱基（脱嘧啶）位点，同时保持结构完整的磷酸二酯键（2,3）。核酸内切酶 VIII 的裂解酶活性使脱碱基位点 3´ 和 5´ 端的磷酸二酯键断裂，从而释放无碱基的脱氧核糖（4,5）。

为帮助您选择最佳 DNA 组装方法，请使用我们的合成生物学/DNA 组装选择表。

图 2：USER 酶（NEB #M5505）、热敏 USER II 酶（NEB #M5508）和热稳定 USER III 酶（NEB #M5509）在 DNA 切割后产生不同的功能性末端产物。

USER™ 酶 |

除了最佳反应温度不同（USER 和热敏 USER II 酶为 37℃，热稳定 USER III 酶为 65℃）以及热失活能力不同（仅限热敏 USER II 酶），不同的 USER 酶还会在切割后产生不同的 3’ 和 5’ 末端产物。USER 酶（NEB #M5505）包含核酸内切酶 VIII，在切割后产生 3’ 和 5’ 磷酸末端。热敏 USER II 酶（NEB #M5508）包含核酸内切酶 III，在切割后产生 3′-磷酸-α、β-不饱和醛和 5′ 磷酸末端。热稳定 USER III 酶（NEB #M5509）包含核酸内切酶 IV，并产生 3′-羟基和 5′-脱氧核糖磷酸。

产品来源

这两种组分蛋白分别从大肠杆菌 K-12 菌株纯化获得，该菌株携带有质粒编码核酸内切酶 VIII 和尿嘧啶-DNA 糖基酶。

产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

应用:
Applications of USER® and Thermolabile USER II Enzymes,
USER® Cloning,
DNA Assembly and Cloning,

High-throughput cloning and automation solutions

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M5505S     -20    
        USER® Enzyme M5505SVIAL -20 1 x 0.05 ml 1,000 units/ml
        rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M5505L     -20    
        USER® Enzyme M5505LVIAL -20 1 x 0.25 ml 1,000 units/ml
        rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，15 分钟能切刻 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 mer 双链寡核苷酸所需的酶量。

    反应条件

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    5 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    175 µg/ml Recombinant Albumin
    50% Glycerol
    50 mM KCl
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

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  • 注意事项

    1. USER 酶在所有经测试的市售 PCR 缓冲液中都有活性。在 TE（10 mM Tris-HCl pH 8.0，0.1 mM EDTA）中也具有 100% 的活性。
    2. 37℃ 温育。

  • 参考文献

    1. Bitinaite, J. unpublished observations.
    2. Lindhal, T., Ljungquist, S., Siegert, W., Nyberg, B. and Sperens, B. (1977). J. Biol. Chem.. 252, 3286-3294.
    3. Lindhal, T. (1982). Annu. Rev. Biochem.. 51, 61-64.
    4. Melamede, R.J., Hatahet, Z., Kow, Y.W., Ide, H. and Wallace, S.S. (1994). Biochemistry. 33, 1255-1264.
    5. Jiang, D., Hatahet, Z., Melamede, R.J., Kow, Y.W. and Wallace, S.S. (1997). J. Biol. Chem.. 272, 32230-32239.

操作说明、说明书 & 用法

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer
    • DNA Damage and PreCR
    • Traditional Cloning Quick Guide

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Synthetic Biology/DNA Assembly Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Will the USER Enzyme work in rCutSmart buffer?
    2. Where can I find information or a protocol for cloning with USER® Enzyme?
    3. During an NEBNext DNA library prep, which enzyme cleaves NEBNext DNA loop adaptors and uracil-containing single stranded loops?
    4. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?