热敏 USER® II 酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

热敏 USER®（尿嘧啶特异性切除试剂）II 酶在尿嘧啶位置产生一个单核苷酸缺口。热敏 USER II 酶是南极热敏尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）和 DNA 糖基酶-裂解酶核酸内切酶 III 的混合物。

图 2：USER 酶（NEB #M5505）、热敏 USER II 酶（NEB #M5508）和热稳定 USER III 酶（NEB #M5509）在 DNA 切割后产生不同的功能性末端产物。

热敏 USER® II 酶 |

除了最佳反应温度不同（USER 和热敏 USER II 酶为 37℃，热稳定 USER III 酶为 65℃）以及热失活能力不同（仅限热敏 USER II 酶），不同的 USER 酶还会在切割后产生不同的 3’ 和 5’ 末端产物。USER 酶（NEB #M5505）包含核酸内切酶 VIII，在切割后产生 3’ 和 5’ 磷酸末端。热敏 USER II 酶（NEB #M5508）包含核酸内切酶 III，在切割后产生 3′-磷酸-α、β-不饱和醛和 5′ 磷酸末端。热稳定 USER III 酶（NEB #M5509）包含核酸内切酶 IV，并产生 3′-羟基和 5′-脱氧核糖磷酸。
图 3：使用 USER 酶制备的 DNA 文库（用于接头切割）与使用热敏 USER II 酶制备的文库一致
热敏 USER® II 酶 |
（A）Illumina® 文库使用不同数量的起始 DNA（1 µg、100 ng、5 ng 或 0.5 ng）和 NEBNext® DNA Ultra™ II 文库制备试剂盒（含 USER 酶或热敏 USER II 酶）制备而成，适用于接头切割。文库分别使用 3、5、9 或 12 个循环进行 PCR 扩增，并在安捷伦生物分析仪（Agilent Bioanalyzer）上进行量化。热敏 USER II 酶的性能与 USER 酶相似，并且不会影响文库产量。（B）使用 USER 酶或热敏 USER II 酶制备的 DNA 测序文库具有合适的插入片段大小。（C）在使用 USER 酶或热敏 USER II 酶制备的文库中观察到明显的 GC 偏差。

ILLUMINA® 是 Illumina（因美纳）公司的注册商标
AGILENT® 和 BIOANALYZER® 是安捷伦科技有限公司的注册商标

产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

应用:
Applications of USER® and Thermolabile USER II Enzymes,
USER® Cloning,
DNA Assembly and Cloning,

High-throughput cloning and automation solutions

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M5508S     -20    
        Thermolabile USER® II Enzyme M5508SVIAL -20 1 x 0.05 ml 1,000 units/ml
        rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M5508L     -20    
        Thermolabile USER® II Enzyme M5508LVIAL -20 1 x 0.25 ml 1,000 units/ml
        rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 1X T4 DNA 连接酶缓冲液中，37℃ 条件下，当总反应体积为 10 µl 时，15 分钟能切刻 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 mer 荧光双链寡核苷酸所需的酶量。

    反应条件

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    在不同缓冲液中的活性

    rCutSmart™ Buffer: 100%
    NEBuffer™ r1.1: 100%
    NEBuffer™ r2.1: 100%
    NEBuffer™ r3.1: 100%

    贮存溶液

    15 mM Tris-HCl
    35 mM NaCl
    25 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    100 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

  • 相关产品

    相关产品

    • M0515 Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase

    单独销售的组分

    • rCutSmart™ 缓冲液

  • 注意事项

    1. 热敏 USER II 酶在所有经测试的市售 PCR 缓冲液中都有活性。在 TE（10 mM Tris-HCl，pH 8.0，0.1 mM EDTA）中也具有 100% 的活性。

  • 参考文献

    1. Lindhal, T. et al. (1977). J. Biol. Chem. 252, 3286-3294.
    2. Lindhal, T. (1982). Annu. Rev. Biochem. 51, 61-64.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Thermolabile USER® II Enzyme Applications in Next Generation Sequencing Library Preparation (M5508)
    2. Thermolabile USER® II Enzyme Standard Protocol (M5508)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of Thermolabile USER II Enzyme in other buffers?
    2. Can Thermolabile USER Enzyme be heat inactivated?
    3. How is Thermolabile USER® II Enzyme different than USER Enzyme?
    4. Will Thermolabile USER II Enzyme (NEB #M5508) remove uracil from ssDNA and dsDNA?
    5. What applications are Thermolabile USER® II Enzyme best suited for?
    6. During an NEBNext DNA library prep, which enzyme cleaves NEBNext DNA loop adaptors and uracil-containing single stranded loops?
    7. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?