核酸外切酶 III（E. coli） |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

该酶作用于双链 DNA，沿 3´ 羟基末端方向逐步催化去除单核苷酸（1）。每次酶与底物结合催化时，只有少量核苷酸被去除，从而在 DNA 分子群内产生渐进缺失（2）。

尽管该酶也可作用于双链 DNA 的切刻以产生单链缺口，但其最适底物是平末端或 3´ 凹陷末端。 该酶无法切割 3´ 突出末端；抗切割程度随突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端则完全不能被切割。

核酸外切酶 III 的活性部分依赖螺旋结构（4），并根据序列的不同而有所差异（C>A=T>G；参考文献 5）。温度、盐浓度和酶与 DNA 的比例对酶活性影响很大，需要根据特定应用调整反应条件。

报告显示，核酸外切酶 III 也有 RNase H 活性、3´ 磷酸酶活性和脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶活性（1）。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自大肠杆菌的核酸外切酶 III 基因。

产品类别:
Exonucleases and Non-specific Endonucleases Products

应用:
Polymerases for DNA Manipulation

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0206V     -20    
        Exonuclease III (E. coli) M0206VVIAL -20 1 x 0.025 ml 100,000 units/ml
        NEBuffer™ 1 B7001SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0206S     -20    
        Exonuclease III (E. coli) M0206SVIAL -20 1 x 0.05 ml 100,000 units/ml
        NEBuffer™ 1 B7001SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0206L     -20    
        Exonuclease III (E. coli) M0206LVIAL -20 1 x 0.25 ml 100,000 units/ml
        NEBuffer™ 1 B7001SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 1X NEBuffer 1 中，37℃ 条件下，总反应体积为 50 μl 时，30 分钟催化超声处理的 0.15 mM [3H]-标记双链 DNA 产生 1 nmol 酸溶性总核苷酸所需要的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 1
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ 1
    10 mM Bis-Tris-Propane-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    (pH 7 @ 25°C)

    贮存溶液

    5 mM KPO4
    200 mM KCl
    5 mM β-ME
    0.05 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 6.5 @ 25°C

    热失活

    70°C for 20 minutes

    比活度

    150,000 units/mg

  • 优势和特性

    应用特性

    • 非定向巢式缺失（3）
    • 定点突变（6）
    • 链特异性探针制备（2）
    • 制备用于双脱氧测序的单链底物（7）

  • 相关产品

    相关产品

    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

    单独销售的组分

    • NEBuffer 1

  • 注意事项

    1. 核酸外切酶 III 不能切割硫代磷酸酯键。但是，可以通过引入一个 α-硫代磷酸核苷酸将 DNA 分子的一端保护起来，从而进行单向切割。

    2. 核酸外切酶 III 在各种缓冲液中的活性如下所示：

      • NEBuffer 1：100%
      • NEBuffer 2：75%
      • NEBuffer 3：25%
      • NEBuffer 4：75%
      • CutSmart：100%

  • 参考文献

    1. Rogers, G.S. and Weiss, B. (1980). L. Grossman and K. Moldave(Ed.), Methods Enzymol.. 65, 201-211. New York: Academic Press.
    2. Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd. Ed.). 5.84-5.85.
    3. Henikoff, S. (1984). Gene. 28, 351-359.
    4. Richardson, C.C. et al. (1964). J. Biol. Chem. 239, 251-258.
    5. Linxweiler, W. and Horz, W. (1982). Nucl. Acids Res. 10, 4845-4859.
    6. Vandeyar, M.A. (1988). Gene. 65, 129-133.
    7. Guo, L.H. and Wu, R. (1982). Nucl. Acids Res.. 10, 2065-2084.
    8. Putney, S., Benkovic, S. and Schimmel, P. (1981). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 78, 7350-7354.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Exonuclease III (M0206)

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of Exonucleases and Non-specific Endonucleases
    • Common Applications for Exonucleases and Endonucleases
    • Properties of Exonucleases and Non-specific Endonucleases

  • Web 工具

    • Exo Selector

  • 研究摘要

    • Choosing the Right Exonuclease (2019)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of M0206 Exonuclease III in various NEB buffers?
    2. How does T5 Exonuclease differ from Exonuclease III (NEB# M0206)?
    3. How Does T7 Exonuclease differ from Exonuclease III (NEB# M0206)?
    4. Will Exonuclease III work in rCutSmart buffer?
    5. Can Exonuclease I be used with a double stranded exonuclease to clean up plasmid preparations?