DNA 聚合酶 I（E. coli） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

DNA 聚合酶 I（E. coli）是依赖于 DNA 的 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 和 5´→3´ 核酸外切酶活性（1）。该酶的 5´→3´ 核酸外切酶活性能够切除位于延伸链前端的核苷酸，从而使切刻平移成为可能。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有过表达 polA 基因。

产品类别:
DNA Labeling Products,
DNA Manipulation Products,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
Polymerases for DNA Manipulation,
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0209V     -20    
        DNA Polymerase I (E. coli) M0209VVIAL -20 1 x 0.025 ml 10,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0209S     -20    
        DNA Polymerase I (E. coli) M0209SVIAL -20 1 x 0.05 ml 10,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0209L     -20    
        DNA Polymerase I (E. coli) M0209LVIAL -20 1 x 0.25 ml 10,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 37℃ 条件下，30 分钟能使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶物所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 2
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ 2
    50 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    25 mM Tris-HCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    75°C for 20 minutes

    分子量

    理论上的: 103000 道尔顿

    5′ – 3′ 核酸外切酶

    Yes

    3′ – 5′ 核酸外切酶

    Yes

    链置换

    No

    单位活性检测条件

    1X NEBuffer 2，33 μM dNTP（含 [3H]-dTTP）和 70 μg/ml 变性鲱鱼精子 DNA。

    错配率

    < 9x10-6bases

  • 优势和特性

    应用特性

    • DNA 切刻平移，获得高比活性的探针（2）
    • cDNA 第二条链的合成（3,4）

  • 相关产品

    相关产品

    • dNTP 混合液
    • dNTP 套装
    • m0303-dnase-i-rnase-free
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

    单独销售的组分

    • NEBuffer 2

  • 注意事项

    1. 该酶不含DNase I，因此切刻平移反应时需额外添加 DNase I。
    2. 加入 dNTP（未随产品提供）后，DNA 聚合酶 I（E.coli）在四种 NEBuffer 中均有活性。

  • 参考文献

    1. Lehman, I.R. (1981). In P.D. Boyer(Ed.), The Enzymes. 14A, 16-38. San Diego: Academic Press.
    2. Meinkoth, J. and Wahl, G.M (1987). S.L. Berger and A.R. Kimmel(Ed.), Methods Enzymol.. 152, 91-94. San Diego: Academic Press.
    3. Gubler, U. and Hoffmann, B.J. (1983). Gene. 25, 263-269.
    4. D’Alessio, J.M. and Gerard, G.F. (1988). Nucl. Acids Res.. 16, 1999-2014.
    5. Kunkel, T.A., Loeb, L.A. and Goodman, M.F. (1984). J. Biol. Chem. . 259, 1539-1545.

操作说明、说明书 & 用法

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Polymerase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can DNA Polymerase I (E. coli) be used in other NEBuffers, including rCutSmart?
    2. Can DNA Polymerase I (E. coli) be used to blunt DNA?
    3. Can DNA Polymerase I (E. coli) be used to fill in 3′ overhangs?
    4. Why are there artifacts in my blots using the nick translated probe?
    5. Can DNA Polymerase I (E. coli) be used to remove 5′ overhangs?
    6. Can DNA Polymerase I (E. coli) be heat inactivated?
    7. Can DNA Polymerase I (E. coli) be used in nick translation protocols?
    8. Is nick translation the best way to make a labeled probe?
    9. Are NEB DNA Polymerases supplied with dNTPs?