Bsu DNA 聚合酶，大片段 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Bsu DNA 聚合酶 I，大片段保留了枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DNA 聚合酶 I（1）的 5´→3´ 聚合酶活性，但缺乏 5´→3´ 核酸外切酶结构域。这种大片段酶天然缺乏 3´→5´ 核酸外切酶活性。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的 DNA 聚合酶 I 基因（从密码子 297 开始，因此缺乏 5´→3´ 核酸外切酶结构域）与编码麦芽糖结合蛋白（MBP）的基因的融合基因。将融合蛋白纯化到接近同质状态，并在体外将 MBP 部分切除。剩余的 DNA 聚合酶纯化后不含 MBP。

产品类别:
DNA Manipulation Products

应用:
Recombinase Polymerase Amplification and SIBA,
Polymerases for DNA Manipulation,
RT-PCR & cDNA Synthesis,

Isothermal Amplification,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0330S     -20    
        Bsu DNA Polymerase, Large Fragment M0330SVIAL -20 1 x 0.04 ml 5,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0330L     -20    
        Bsu DNA Polymerase, Large Fragment M0330LVIAL -20 1 x 0.2 ml 5,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 37℃ 条件下，30 分钟能使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶物所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 2
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ 2
    50 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    (pH 7.9 @ 25°C)

    热失活

    75°C for 20 minutes

    5′ – 3′ 核酸外切酶

    No

    3′ – 5′ 核酸外切酶

    No

    链置换

    +

    单位活性检测条件

    1X NEBuffer 2、33 µM dNTP（含 [3H]-dTTP）和 70 µg/ml 变性鲱鱼精子 DNA。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 随机引物法标记
    • 第二链 cDNA 合成
    • 单个 dA 的加尾
    • 链置换 DNA 合成（2）

  • 相关产品

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    • dNTP 套装
    • dNTP 混合液

    单独销售的组分

    • NEBuffer 2

  • 注意事项

    1. Bsu DNA 聚合酶大片段不适合用于产生平末端，因为此酶缺乏 3´→5´ 核酸外切酶活性来去除 3´ 未配对的突出末端。
    2. Bsu DNA 聚合酶，大片段能在 25℃ 下保留 50% 的活性，是 Klenow 片段（3´→5´ exo–）在此温度下活性的两倍。

  • 参考文献

    1. Okazaki, T. et al. (1964). J. Biol.Chem.. 239, 259-268.
    2. Piepenburg, O. et al. (2006). PLOSBiology. 4, 1115-1121.

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Polymerase Selection Chart